Альбумины семян льна: биохимические и физико-химические свойства тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.04, кандидат биологических наук Козловская, Юлия Владимировна

• Козловская, Юлия Владимировна
• кандидат биологических наук
• 2012

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Козловская, Юлия Владимировна

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Аминокислотный состав альбуминовых белков

1.2. Структурная организация белков

1.3. Альбумины животного и растительного происхождения

1.4. Выделение белков растительного происхождения

1.5. Методы количественного определения

индивидуальных белков

1.6. Кислотно-основные свойства альбуминовых белков

1.7. Электрохимические свойства белков и их электрофоретическое поведение

1.8. Поверхностное натяжение и поверхностно-активные

вещества

1.9. Адсорбция и структурообразование адсорбционных слоев

белков

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Объекты исследования

2.2. Выделение и очистка белков

2.2.1. Гомогенизация биоматериала (семян льна)

2.2.2. Выделение и очистка белков альбуминов

из гомогената семян и стеблей льна

2.3. Приготовление реактивов

2.3.1. Приготовление трис-глицинового буфера

2.3.2. Приготовление 50% и 100% насыщения

нейтрального раствора сульфата аммония (МН4)2804

2.3.3. Приготовление биуретового реактива

2.4. Спектрофотометрический метод качественного

и количественного анализа водных растворов белков

2.5. Биуретовый метод определения концентрации белков

2.6. Методика электрофореза на целлогеле в

горизонтальных блоках

2.6.1. Подготовка к работе полосок целлогеля

2.6.2. Подготовка к работе ЭФ камеры

2.6.3. Нанесение образцов

2.6.4. Окрашивание белковых фракций

2.6.5. Просветление целлогеля

2.6.6. Сканирование проб

2.7. Методика электрофореза на агарозе

2.8. Метод электрофореза в полиакриламидном геле

2.9. Метод максимального давления пузырька

2.10. Метод электронной микроскопии

2.11. Линейный регрессионный анализ

2.12. Статистическая обработка результатов исследования

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖЕНИЕ

3.1. Изучение электрофоретического поведения альбуминов, выделенных из стеблей и семян льна

3.2. Выделение и очистка белков альбуминов из семян

растений льна

3.3. Определение концентрации белков альбуминов в

водных экстрактах методом УФ-спектроскопии

3.4. Определение содержания белков альбуминов

в семенах льна методом биуретовой реакции

3.4.1. Построение калибровочного графика

3.4.2. Количественное определение содержания белков

альбуминов в семенах льна

3.5. Определение гетерогенности альбуминов семян

льна методом электрофореза на агарозе

3.6. Определение молекулярной массы альбуминов

семян льна

3.7. Изучение поверхностной активности раствора альбуминовых белков

3.8. Предполагаемые модели структуры адсорбционных слоев альбуминов льна

3.9. Электронномикроскопическое исследование структуры межфазного адсорбционного слоя альбуминов

льна, сформированного на границе с воздухом

ВЫВОДЫ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ПРИНЯТЫЕ СОКРАЩЕНИЯ

АДГ - алкогольдегидрогеназа печени лошади ИЭТ - изоэлектрическая точка

ОЭП - относительная электрофоретическая подвижность

ПАВ - поверхностно-активное вещество

ПОХ - пероксидаза хрена

САЧ - сывороточный альбумин человека

Тир - тирозин

Три - триптофан

Фен - фенилаланин

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Альбумины семян льна: биохимические и физико-химические свойства»

ВВЕДЕНИЕ

Растения - биосистемы, в которых важную роль в регулировании и нормализации течения биохимических процессов играют различные биомолекулы, среди которых большая часть имеет белковую природу. Белки растительного происхождения изучены в меньшей степени в сравнении с животными.

Лен, одна из важнейших сельскохозяйственных культур Тверского региона, изучен недостаточно с точки зрения отдельных классов биоорганических макромолекул. В частности мало исследованы основные биоорганические молекулы льна - альбумины - и их физико-химические и биохимические свойства. Есть информация, что семена льна (1лпшп шкайззтшт Ь.) содержат от 18 % до 33 % белковых молекул [48, 70, 77, 86]. Важность исследования белковых макромолекул определяется тем, что именно эта группа определяет структурные характеристики биотканей, их специфические функции и биохимические особенности, характеризует связь структуры и свойств. В то же время известно [45, 48], что альбуминовые белки играют немаловажную роль в процессах роста и развития растений льна (создают тургор ткани, определяют транспорт микроэлементов, являются депо для аминокислот), а, следовательно, способны влиять на качество льняного волокна. Стойкость и перспектива качества зависит от фракции альбуминовых белков. В связи с этим изучение на молекулярном уровне альбуминов льна позволит приблизиться к созданию условий и механизмов, обеспечивающих высокое качество льняных волокон [32].

Для выполнения этой задачи необходимо исследование структурно-функционального состояния белков не только в объеме, но и на границе раздела фаз. Именно на поверхности раздела локализованы и функционируют

многие биомолекулы [1], формирующие количество, длину элементарных волоконец и др.

Получение новой информации по исследованию поведения иммобилизованных белковых макромолекул - альбуминовых белков льна -представляет очевидный интерес с фундаментальной точки зрения. Исследования на молекулярном уровне механизмов образования и стабилизации искусственных коллоидных систем имеет огромное значение для льна, а также разработки новых лекарственных форм и новых технологий для пищевой и косметической промышленности и др.

Кроме того, изучение функционирования группы альбуминовых белков и ферментов (пероксидазы, о-ДФО и др.) в объеме и на границе раздела фаз тесно связаны с изучением механизмов регуляции и обмена, а также процессов роста и развития растений [49].

Наряду с неоспоримой фундаментальной значимостью исследований объемных и поверхностных свойств и особенностей функционирования белков представляют особый интерес с точки зрения практического применения. Немаловажный аспект прикладного применения результатов такого рода исследований - разработка новых пищевых коллоидных систем и биологически активных добавок, а также белок- и фермент-содержащих синтетических моющих средств. В связи с широкими перспективами практического применения исследования молекулярных параметров альбуминовых белков на поверхности раздела и в объеме водной фазы привлекает все большее внимание исследователей.

Однако, в настоящее время в арсенале исследователей не разработаны в достаточной мере подходы и методы, позволяющие на молекулярном уровне изучать физико-химические свойства белков, адсорбированных на поверхности раздела, т.е. в иммобилизованном состоянии. Информация,

встречающаяся в литературе [23, 58, 59], носит скорее качественный и эпизодический характер.

Таким образом, разработка современных методических подходов на стыке биохимии, коллоидной химии, физической химии и т.д. для получения новой информации о физико-химических и структурно-функциональных свойствах альбуминовых белков льна открывает широкие перспективы, как в плане фундаментальных исследований, так и для создания новых технологий для сельского хозяйства, пищевой промышленности, биотехнологии и медицины.

Особо следует отметить, что актуальность исследований поведения белковых молекул и в объеме водного раствора, и на границе раздела фаз определяется возможностью регулировать качественные, количественные и технические характеристики культурных сельскохозяйственных растений (льна) посредством варьирования комплекса биохимических и физико-химических параметров отдельных групп биоорганических молекул на примере белков-альбуминов как в объеме, так и на границе раздела, т.е. в иммобилизованной форме.

Цель и задачи исследования. Цель работы - изучить биохимические и физико-химические свойства альбуминовых белков, выделенных из семян льна, и сформировать подходы в исследовании молекулярных (в объеме водного раствора) и иммобилизованных форм (в структуре адсорбционных слоев, сформированных на границе раздела вода-воздух) альбуминов льна.

В работе были поставлены следующие задачи:

- изучить электрофоретическое поведение альбуминов, выделенных из стеблей льна, на разных стадиях роста и развития с целью подтверждения значимости именно этой группы белковых макромолекул льна;

- выделить и очистить фракцию альбуминовых белков из семян льна. Процедура выделения включает стадии гомогенизации, экстракции, центрифугирования и высаливания.

I часть. Для исследования физико-химических характеристик альбуминов льна в объеме водной фазы:

- получить и интерпретировать УФ-спектры фракции альбуминовых белков льна;

- количественно определить альбуминовые белки семян льна и рассчитать их содержание в семенах льна;

- определить и рассчитать молекулярную массу альбуминовой фракции

льна.

II часть. С целью исследования иммобилизованной формы альбуминов

льна:

- провести количественную оценку поверхностной активности водного экстракта фракции альбуминовых белков при рН 6,5 и варьировании ионной силы водной подложки в интервале 0 - 0,3 М, включающей построение изотерм адсорбции и их анализ по рассчитанному комплексу адсорбционных параметров: максимальной адсорбции (Гтах); площади, приходящейся на молекулу (8М0Л) и толщины адсорбционного слоя (5). На основе полученных данных построить и проанализировать молекулярные модели структуры адсорбционного слоя альбуминовых белков льна;

- определить размеры белковых ассоциатов с использованием метода электронной микроскопии.

Научная новизна результатов исследования. Теоретическая значимость работы. В настоящее время практически отсутствуют прямые методы, позволяющие изучать структурные свойства белков адсорбированных (или иммобилизованных) на поверхностях раздела фаз. Данных по строению

белков и белоксодержащих молекулярных ансамблей на поверхности раздела фаз в литературе практически не встречается.

В представленной работе впервые предложен принципиально новый подход, позволяющий исследовать структурные свойства адсорбированных (иммобилизованных) на поверхности раздела фаз индивидуальных белков -альбуминов льна.

Суть разработанного подхода состоит в изучении альбуминов льна, как в объеме, так и на поверхности раздела вода-воздух для получения наиболее полной количественной информации о свойствах альбуминов льна (молекулярной массы, концентрации, содержании в семенах льна, степени агрегации, адсорбции и т.д.).

С применением комплексного подхода получена детальная количественная информация о содержании альбуминовых белков в семенах льна-долгунца, их молекулярной массе, а также о структурных параметрах альбуминов, адсорбированных на границе раздела вода-воздух. Впервые предложены молекулярные модели структуры иммобилизованных альбуминов льна, механизмы их формирования. Показано, что применение такого подхода открывает новые возможности для исследования на молекулярном уровне механизмов формирования иммобилизованных белковых систем и их комплексов на поверхности раздела фаз, а также способов регуляции их характеристиками, что важно для решения прикладных задач, стоящих в льноводстве и связанных с получением льноволокна высокого качества.

Практическая значимость работы. Практическая значимость характеризуется возможностью регулировать качественные, количественные и технические характеристики культурных сельскохозяйственных растений (льна) посредством варьирования комплекса биохимических и физико-химических параметров отдельных групп биоорганических молекул на

примере белков альбуминов, как в объеме, так и на границе раздела, т.е. в иммобилизованной форме.

Немаловажный аспект практического применения результатов такого рода исследований - разработка новых пищевых коллоидных систем и биологически активных добавок, а также белок- и фермент-содержащих синтетических моющих средств. Способность белков адсорбироваться на различных поверхностях раздела является молекулярной основой формирования и стабилизации белок-содержащих иммобилизованных систем.

В частности, многие пищевые продукты представляют собой коллоидные системы, в которых белки и их комплексы выполняют роль стабилизаторов. Адсорбционные свойства белков в них определяют условия получения, текстуру и вкусовые качества пищевых продуктов.

Показано, что эффективными методами контроля процесса образования текстуры и стабильности белок-содержащих иммобилизованных систем являются варьирование физико-химических свойств среды.

Найденные закономерности и предложенный подход могу служить физико-химической основой при разработке новых продуктов в пищевой и косметической промышленности, при разработке новых лекарственных форм, путей регуляции процессами роста и развития льноволокна с целью получения наиболее качественных его параметров.

Полученные результаты перспективны в плане рассмотрения круга практического использования белков и ферментов для аналитических целей и в тонком органическом синтезе.

Полученные данные по исследованию биохимических и физико-химических свойств альбуминов семян льна используются в исследовательской работе и в учебном процессе на кафедре физико-химической экспертизы биоорганических соединений ТвГУ: в курсе лекций,

семинарских занятий, при подготовке курсовых и дипломных работ студентов

и аспирантов.

Научные результаты, выносимые на защиту:

1. Выявлена и подтверждена существенная доля фракции альбуминовых белков льна во фракции водорастворимых белков по данным диск-электрофореза в ПААГе.

2. Уф-спектры альбуминов льна имеют максимум поглощения, приходящийся на длину волны X, равную 280 нм.

3. На основе результатов двух методов - УФ-спектроскопии и методом биуретовой реакции - рассчитано содержание альбуминов в семенах льна,

Л

составляющее (1,75+ 0,05) '10" г/г сырой массы семян льна.

4. Проведен расчет молекулярной массы альбуминов льна, равный 82000±5700, с применением метода электрофореза на агарозе и построением калибровочного графика по коммерческим препаратам белков: САЧ (сывороточному альбумину человека), ПОХ (пероксидазе хрена) и АДГ (алкогольдегидрогеназе печени лошади).

5. Иммобилизация альбуминов льна границе вода-воздух позволяет получить устойчивые формы адсорбционных слоев белка, структурные характеристики (максимальную адсорбцию Гт; площадь, приходящуюся на молекулу Бд, и толщину адсорбционного слоя 8) которых можно варьировать, меняя ионную силу водной подложки.

6. Предложены молекулярный механизм формирования структур адсорбционных слоев альбуминов льна и модели этих структур.

7. Методом электронной микроскопии получены электронномикроскопические имиджи структуры межфазных адсорбционных слоев альбуминов льна и определены размеры разрешенных элементов структуры.

Апробация и реализация результатов диссертации. Основные положения и выводы диссертации апробированы в выступлениях на научных конференциях. Материалы диссертации докладывались и обсуждались на III Международной конференции «Экстракция органических соединений» (Воронежская государственная технологическая академия, Воронеж, 2005); III, V научной конференции аспирантов и студентов химического факультета (Тверской государственный университет, Тверь, 2004, 2006); XIV, XVII Региональных Каргинских чтениях. Областной научно-технической конференции молодых ученых «Физика, химия и новые технологии» (Тверской государственный университет, Тверь, 2007, 2010); Научной сессии РАН «Применение поверхностно-активных веществ в сельском хозяйстве: производство и переработка сельхозпродукции» (Белгородский государственный университет, Белгород, 2009); Всероссийской научной школе для молодежи «Приборное и научно-методическое обеспечение исследований и разработок в области каталитического превращения бифункциональных органических соединений» (Тверская государственная сельскохозяйственная академия, Тверь, 2010); III Всероссийском конгрессе студентов и аспирантов-биологов «Симбиоз Россия 2010» (Нижегородский государственный университет им. Н.И. Лобачевского, Нижний Новгород, 2010); IV Всероссийском конгрессе студентов и аспирантов-биологов «Симбиоз Россия 2011» (Воронежский государственный университет, Воронеж, 2011); Международном семинаре «Роль льна в улучшении среды обитания и активном долголетии человека» (ВНИИ льна, Торжок, 2012); научно-методического семинаре «О взаимосвязи структурно-динамических свойств ферментов с их функциональной активностью» (ТвГУ, Тверь, 2012), а также на научных семинарах кафедры физико-химической экспертизы

биоорганических соединений ТвГУ и при выполнении курсовых и дипломных работ, в которых соискатель был научным руководителем.

Результаты исследования отражены в 26 публикациях, 2 из которых в рецензируемых научных журналах, включенных в перечень ВАК.

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Козловская, Юлия Владимировна

выводы

1. Исследованы структурно-функциональные характеристики альбуминов льна в объеме водной фазы:

- максимальное число альбуминовых фракций на электрофореграммах выявлено в фазе быстрого роста стеблей льна и составляет 11-12, в семенах - 12-16, что подтверждает значимость белков-альбуминов льна в процессах роста и развития растений льна;

- найден максимум поглощения водных растворов альбуминов льна при А.=280 нм, наличие которого обусловлено 3-мя ароматическими аминокислотами - тир, три, фен, - входящими в состав первичной структуры альбуминов льна;

- рассчитано содержание альбуминовых белков в семенах льна, составившее (1,75±0,05)-10"3 г/г сырой массы семян льна;

- впервые определена молекулярная масса альбуминовых белков семян льна, равная 82000±5700.

2. Впервые исследованы структурно-функциональные характеристики альбуминов льна на границе раздела водный раствор белка - воздух (в иммобилизованном состоянии):

- установлено, что возрастание от 0 до 0,3 М ионной силы водного раствора рН 6,5 ухудшается адсорбируемость альбуминов льна:

7 О

• максимальная адсорбция Гтах (-10" , моль/м ) снижается от 7,07±0,05 до

5,45±0,04;

• площадь, приходящаяся на молекулу (8А, А2), возрастает от 230±16 до

300±21;

• толщина адсорбционного слоя (5, А) уменьшается от 580±41 до

445±31; построены молекулярные модели структуры адсорбционных слоев альбуминов при различных степенях заполнения поверхности; показана полимолекулярность адсорбционных слоев белков; - определены размеры разрешенных элементов структуры адсорбционных слоев альбуминовых белков, которые составили 5000 А, и подтверждены молекулярные модели структуры адсорбционного слоя иммобилизованных альбуминов льна.

Выражаю глубокую признательность и благодарность моему научному руководителю д.х.н., профессору Лапиной Галине Петровне за неоценимую помощь в работе над диссертацией, а также сотрудникам кафедры физико-химической экспертизы биоорганических соединений ТвГУ.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Козловская, Юлия Владимировна, 2012 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Амбрамзон A.A., Зайченко Л.П., Файнгольд С.И. Поверхностно-активные вещества: синтез, анализ, свойства, применение. - Л.: Химия, 1988.-236 с.

2. Аминокислоты, их производные и регуляция метаболизма. Отв. ред. Броневицкая З.Г. Ростов на Дону: Изд-во Рост. гос. ун-та, 1983. - 111 с.

3. Анисимов A.A., Добротина H.A., Чадаева Н.И и др. Биохимия / Под ред. Е.С. Северина, А.Я. Николаева. - 2-е изд., испр. и доп. - М.: ГЭОТАР-МЕД, 2002. - 448 с.

4. Антипова Л.В., Перелыгин В.М., Курчаева Е.Е. Продукт эмульсионной природы на основе растительного белка. // Хранение и переработка сельхозсырья. 2001, №1 - С.50-52.

5. Артюхов В.Г. Оптические методы анализа интактных и модифицированных биологических систем: учеб. пособие. / В.Г. Артюхов, О.В. Путинцева. - Воронеж: Изд. Воронеж, гос. ун-та, 1996. -240 с.

6. Артюхов В .Г., Бутурлаки М.С. и др. Оптические методы исследования биологических систем и объектов. - Воронеж: ВГУ, 1980. - 114 с.

7. Асатиани B.C. Химия нашего организма. - М.: Наука, 1969.

8. Барбашов A.B., Ксандопуло С.Ю. Групповой состав белкового комплекса семян льна современных сортов. // Известия вузов. Пищевая технология. 2005, № 4 - С.71-72.

9. Барбашов A.B., Шульвинская И.В. Групповой состав белкового комплекса пророщенных семян льна современных сортов // Известия вузов. Пищевая технология. 2006, № 4 - С.40-41.

Ю.Бархатова Т.В., Лунев A.M., Дыкань В.Н. Миграция азотистых соединений при получении соевого белкового концентрата // Известия вузов. Пищевая технология. 2002, №2-3 - С.75-76.

11. Башлов В., Гуржин И. Биологическая химия. - Самара, 1992. - 517 с.

12. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия - М.: Медицина, -2-е изд. перераб. и доп., 1990. - 542 с.

13. Бородулина А. А., Супрунова Л.В. Сравнительная характеристика белкового комплекса семян масличных культур и возможность его улучшения в процессе селекции. // Известия вузов. Пищевая технология. 2003, № 1 - С.29-41.

14. Бохински Р. Современные возрения в биохимии. - М.: Мир, 1987. - 342 с.

15. Брюхнова Е.А., Мустафаев С.К., Романов Д.М., Сираш H.H. Влияние СВЧ-нагрева на белковый комплекс семян сои // Известия вузов. Пищевая технология. 2002, №2-3 - С.74-75.

16. Бухтоярова З.Т., Куликов И.А., Бугаец H.A., Корнеева O.A. Соус-майонез повышенной биологической ценности. // Известия вузов. Пищевая технология. 2003, № 1 - С. 84-85.

17. Вандерли С. Плазма, Пер. с англ. - М.: Мир, 1954. - 463 с.

18.Венецкий И.Г., Венецкая В.И. Основные математико-статистические формулы в экономическом анализе - М.: Статистика, 1979. - 447 с.

19. Весслер Е. Аналитическая биохимия, Пер. с англ. - М.: Мир, 1971.

20. Виноградов В.Ф., Смирнова Л.Е., Сульман Э.М., Сидоров А.И., Козлов В.П., Ущаповский И.В. Технологические и медико-биологические аспекты в использовании льна как комплексного нутрицевтика. // Материалы международной научно-практической конференции 2 марта 2001 г. «Льняной комплекс России. Проблемы и перспективы» - М.: Изд- во ЦНИИКАЛП - 2001. - С.83-89.

21. Волькенштейн M.B. Молекулярная биофизика. - М.: Наука, 1975. -616 с.

22. Гааль Э., Медьеши Г., Верецкеи Л. Электрофорез в разделении биологических макромолекул: Пер. с англ. - М.: Мир, 1982. - 448 с.

23. Геген Ж., Азанза Ж.Л. Состав и физико-химические свойства белков бобовых и масличных культур // Растительный белок. / Пер. с франц. В.Г. Долгополова. - М.: Агропромиздат, 1991.- С. 149-175.

24. Джорджеску П., Пзунеску Е. Биохимические методы диагноза и исследования. - Бухарест, 1963. - 341 с.

25. Ермаков А.И. Биохимия льна.- М.: Сельхозгиз, 1938. - 132 с.

26. Ермаков А.И. Методы биохимического исследования растений. - Л.: Колос, 1972.- 456 с.

27. Збарский Б.И., Иванов И.И., Мордашев С.Р. Биологическая химия. -Л.: Медицина, 1972.-583 с.

28. Зубцов В.А., Лебедева Т.И., Осипова Л.Л., Антипова Н.В. Потребительская ценность семян льна. I. Состав льняного семени. // Аграрная наука. 2002, №10 - С. 12-14.

29. Зубцов В.А., Лебедева Т.И., Осипова Л.Л., Антипова Н.В. Потребительская ценность семян льна.П. Нутрицевтическое действие льняного семени. // Аграрная наука. 2002, №11 - С.7-9.

30. Зубцов В. А., Лебедева Т.И., Осипова Л. Л., Антипова Н.В. Функциональные свойства биологически активных веществ из семян льна. // Достижения науки и техники АПК. - 2006. № 5 - С. 44-45.

31.Зубцов В.А., Лебедева Т.И., Осипова Л.Л., Антонова Н.В. Комплексная переработка семян льна. / Материалы международной научно-практической конференции «Интенсификация машинных технологий и переработки льнопродукции», 15-16 июля, г. Тверь - М.: «Издательство ВИМ», 2004, Ч.2-С.66-75.

32.3убцов В.А., Осипова JI.JL, Лебедева Т.И. Льняное семя его состав и свойства. // Российский химический журнал (Журнал Российского химического общества им. Д.И. Менделеева). 2002, T.XIVI, №2 - С. 1416.

33. Ибрагимов А.П., Туйчиков A.B., Турсундаев П. Электрофоретическая характеристика белков семян различных сортов хлопчатника. -Узбекский биол. журнал, 1973, №4, с. 66-67.

34. Иванова B.M., Нешумова Л.А., Калинина В.Н. Математическая статистика. М.: Наука, 1991. -268 с.

35. Измайлова В.Н., Ребиндер H.A. Структурообразование в белковых системах. - М.: Наука, 1991. - 268 с.

36. История научных исследований во ВНИИМКе за 90 лет. / Сост. Н.И. Бочкарев, С.Д. Крохмаль. - Краснодар: Сельские зори, 2002. - 292 с.

37. Кайваряйнен А.И. Динамическое поведение белков в водной среде. -Л.: Наука, 1980.-271 с.

38. Капрельянс Л.В., Швец H.A. Биохимическая характеристика липидов семян льна как компонентов функциональных продуктов питания. // Зерновые продукты и комбикорма. 2002, №1.- С. 45-49.

39. Ковалев В.Б. Справочник льновода. М.: Московский рабочий, 1978, 256 с.

40. Кокс P.A. Методы энзимологии, Академик Пресс, Пер. с англ. - М.: Мир, 1968.

41. Колпакова В.В., Зайцева Л.В., Смирнов Е.А., Конопленко Е.И. Интенсификация процесса экстракции белков из отходов зерноперерабатывающей промышленности с применением мультиэнзимных композиций // Известия вузов. Пищевая технология. 2004, №2-3-С.28-30.

42. Колпакова В.В., Мартынова И.В., Невский A.A., Чумикина Л.В. Функциональные свойства растительных белковых композитов и физико- химические характеристики их белков и липидов. // Известия вузов. Пищевая технология. 2006, № 4 - С.36-40.

43. Колпакова В.В., Нечаев А.П., Линниченко В.Т., Смирнова A.B. Белок из пшеничных отрубей. Влияние технологических факторов на выход и биологическую ценность. // Хранение и переработка сельхозсырья. 1994, №6 - С.34-42.

44. Кольман Я., Рём К.-Г. Наглядная биохимия. - М.: Мир, 2004. - 469 с.

45. Комов В.П., Шведова В.Н. Биохимия: учеб для вузов - М.: Дрофа, 2004. - 640 с.

46. Краус С., Акжигитова JL, Иунихина В., Люнина Е. Льняное семя и пищевая ценность хлебобулочных изделий // Хлебопродукты. - 2003. -№ 9. С 28-29.

47. Кретович В.Л. Биохимия растений. - М.: Высшая школа, 1986. - 503 с.

48. Крылов B.C. Значение льняного комплекса в экономике Нечерноземной зоны России. // Материалы международной научно-практической конференции «Интенсификация машинных технологий и переработки льнопродукции», 15-16 июля, г.Тверь - М.: Издательство ВИМ, 2004, 4.1 - С. 31-47.

49. Кушнер В.П. Конформационная изменчивость и денатурация биополимеров - Л.: Наука, 1977. - 274 с.

50. Лапина Г.П. Методы выделения, очистки, количественного определения и исследования физико-химических свойств белков и ферментов: Лабораторный практикум для студентов химико-биологического факультета специализации «биохимия Часть I». -Калинин, 1981. - 32 с.

51. Лапина Г.П. Молекулярные механизмы изменчивости пероксидазы льна в раннем онтогенезе и их регуляция: Монография. - Тверь: Твер. гос. ун-т, 1999. - 232 с.

52. Лапина Г.П., Рулин B.C. Электрофоретическое исследование белковых фракций стеблей льна-долгунца на разных фазах роста. // Физиология и биохимия культурных растений. 1985, т. 17, № 4 - с. 356360.

53. Листопад В. Анализ и перспективы рынка льна и продуктов переработки // Масложировой комплекс - 2006. - №2 (13) - С. 22-27.

54. Мазин A.B., Кузнеделов К.Г. и др. Методы молекулярной генетики и генной инженерии. - Новосибирск, 1988. - 333 с.

55. Методы белковой химии: Учебное пособие / Под ред A.A. Анисимова. -Горький, 1977. -71 с.

56. Методы физиолого-биохимических исследований хлопчатника; Институт биохимии АН УССР. Ташкент, 1973. 111 с.

57. Нечаев А.П. Пищевая химия. - СПб: ГИОРД, издание 2-ое перераб. и испр. -2003.-640 с.

58. Нечаев А.П., Колпакова В.В. Ресурсосберегающая технология переработки отрубей пшеницы. // Пищевая промышленность. 1993, № 12-С. 18-20.

59. Николаева М.Г. Биология семян. - СПб.: - 1999. - 231 с.

60. Овчинников Ю.А., Шамин А.Н. Строение и функции белков. - М.: Педагогика, 1983. - 127 с.

61,Остерман Л.А. Методы исследования белков и нуклеиновых кислот. Электрофорез и ультрацентрифугирование. М., Наука, 1981.

62. Пащенко Л.П. Применение семян льна для повышения биологической ценности хлеба. // Материалы Московского

международного конгресса: «Биотехнология: состояние и перспективы развития». . 2004. №4 - С.59-60.

63. Пащенко Л.П., Курчаева Е.Е., Кулакова Ю.А., Яковлев Е.А. Некоторые сведения о нуте и применении его в продуктах питания. // Хранение и переработка сельхозсырья. 2004. №4 - С.59-60.

64. Пащенко Л.П., Никитин H.A., Кобцева Я.Ю. Повышение пищевой ценности сахарного печенья. // Хранение и переработка сельхозсырья. 2004, №4-С.56-59.

65. Пащенко Л.П., Прохорова A.C., Кобцева Я.Ю., Никитин И.А. Характеристика семян льна и их применение в производстве продуктов питания. // Хранение и переработка сельхозсырья. 2004, №7 - С.56-57.

66. ПащенкоЛ.П., Странадко Г.Г., Булгакова H.H., Кулакова Ю.А., Золотарева Е.П. Применение семян льна для повышения биологической ценности хлебобулочных изделий. // Хранение и переработка сельхозсырья. 2003, №4.

67. Перцов A.B., Задымова Н.М. Методические разработки к практикуму по коллоидной химии. М.: Изд-во МГУ, 1999. - 57 с.

68. Петрова Л.И. Питание растений льна-долгунца макро- и микроэлементами. // Технические культуры. - 1992. - № 1. - С. 31-36.

69. Пири Н.У. Белки из листьев зеленых растений. / Пер. с англ. Ф.Р. Кивучана-М.: Колос, 1980- 191 с.

70. Плешков Б.П. Практикум по биохимии растений: Учеб пособие. - М.: изд-во «Колос», 1968. - 183 с.

71. Плешков Б.П. Биохимия сельскохозяйственных растений. - 5-е изд. доп и перераб. - М.: Агропромиздат, 1987. - 494 с.

72. Плешков Б.П. Практикум по биохимии растений. -3-е изд-е прераб. и доп. -М.: Агропромиздат, 1985, - 255 с.

73. Попелло И.А., Варфоломеева Е.П., Сучков В.В., Токаев Э.С. Оптимизация процесса получения белка из семян гороха // Обзорная информация Московской государственной академии прикладной биотехнологии. (Серия: Мясная и холодильная промышленность, молочная промышленность) - М.: АгроНИИ ТЭИП, 1996, Вып. 1.-С.25-28.

74. Попов Е.М. Структурно-функциональная организация белков. -М.: Наука, 1992.-360 с.

75. Прут P.E. Биохимия. Биофизика, Пер. с англ. - М.: Мир, 1969.

76. Пустовалова JI.M. Практикум по биохимии. - Ростов-на-Дону: изд-во «Феникс», 1999. - 544 с.

77. Рогов И.А., Антипова Я.В., Дунченко Н.И. и др. Химия пищи. Книга 1: Белки: структура и функции. В 2 кн.Кн.1 - М.: Колос, 2000. - 384 с.

78. Рубин Ж.М. Биологическая химия, Пер. с англ. - М.: Мир, 1973.

79. Сафонов В.И., Сафонова М.П. Исследование белков и ферментов растений методом электрофореза в полиакриламидном геле. М.: Наука, 1971.113 с.

80. Сергеева Д.С., Барцева A.A. О формировании свойств устойчивости против полегания у льна-долгунца. // Агрохимия. 1964, №12 - с. 67-70.

81.Скоупс Р.К. Методы очистки белков. Пер. с англ. - М.: Мир, 1985. -358 с.

82. Смолин А.Н. Методы выделения белков. - М.: Мир, 1969. - 154 с.

83. Соболев М.А. Химия льна и лубоволокнистых материалов - М.: Гизлегпром, 1963. - 142 с.

84.Соловьев А .Я. Льноводство - 2-е изд. перераб. и доп. - М.: Агропромиздат, 1989. - 320 с.

85.Соркина Д.А., Залевская И.Н. Структурно-функциональные свойства белков. - Киев: Вища школа, 1990. - 215 с.

86.Степанов В.М. Молекулярная биология. Структура и функции белков. - М.: Высшая школа, 1996 -335 с.

87. Тоблер Ф., Бредерман Г., Рябов И. и др. Лен как прядильное растение -М.: Сельхозгиз, 1931.-240 с.

88.Толстогузов В.Б. Новые формы белковой пищи. -М.: Агропромиздат, 1987.-303 с.

89. Троицкий Г.В. Электрофорез белков. - Харьков, 1962.

90. Тюкавкина H.A., Бауков Ю.И. Биоорганическая химия.-М.: Медицина, 1985.-480 е., ил.

91. Ущаповский И.В., Виноградов В.Ф., Смирнова Л.Е., Сульман Э.М., Сидоров А.И., Козлов В.П. Технологические аспекты применения семени льна в лечебно-профилактических целях. // Технологии и технические средства производства льнопродукции. Сб. науч. тр. -Тверь, 2001.-С. 139-146.

92. Физико-химические методы исследования биополимеров и их низкомолекулярных регуляторов. - М.: Наука, 1992. - 405 с.

93. Физические методы определения строения органических соединений / Под ред. Иоффе Б.В., Костиков P.P., Разин B.B. - М.: Высшая школа, 1984.-336 с.

94. Филлипович Ю.Б. Биохимия белка и нуклеиновых кислот. - 1978.

95. Филлипович Ю.Б., Основы биохимии. - М.: Высш. школа, 1985. - 503с.

96. Финкельштейн А.В, Птицын О.Б. Физика белка: курс лекций. - М.: Книжный дом «Университет», 2002. - 374 с.

97. Чёгёр С.И. Транспортная функция сывороточного альбумина. - Изд-во академии СРР, 1975.- 184 с.

98. Шамин А.Н. История биологической химии. - М.: Наука, 1994.

99. Шадманов Р.К., Брискман Л.И., Нигматова У., Саранская Л.Б. Электрофорез белков семян и его возможности в таксономии. -Ташкент, 1976.

100. Щербаков В.Г. Биохимия и товароведение масличного сырья. -М.: Агропромиздат, 1991. -302 с.

101. Щербаков В.Г. Лабораторный практикум по биохимии и товароведению масличного сырья. - 2-е изд. Перераб. и доп. - М.: Колос, 1999.- 128 с.

102.Электрофоретические методы анализа белков: [Сб. статей] / АН СССР, Сиб. ин-т физиологии и биохимии растений; Отв. ред. Р.К. Саляев,- Новосибирск: Наука, Сиб. отде-ние, 1981.

103. Элиот В., Элиот Д. Биохимия и молекулярная биология. Пер. с англ. Под ред. Арчакова А.И. и.др. - М.: научно-исслед. ин-т. Биомедицинской химии РАМН, Материк-альфа, 2002. - 466 с.

104. Юршин И.А. Изменение химического состава и качества льнопродукции под действием минерального питания. // Пути повышения урожайности полевых культур. 1976 - с. 152.

105. Baraniak В., Niezabitovska М. Jakoze bialka koncentratow otrzymanysh roznumi metodami z nasion grochu odmiany Piast // Ann. Univ. Mariae Curie- Sklodowska. Sect E. - 2004. - Vol. 59,N 4 - P. 15571566.

106. Barron J.M., Chaires С., Navarro A.L., Vazguez F.A., Yanez G.A. Effects of alcali treatment on the nutrition characterristics of soybean (Clycine max) albumins and globulins // J. Food Processing Preserva! -2003. - Vol. 26, N6 - P.375-383.

107. Batty R.S. Flaxseed in Human Nutrición. Ed. By S.C. Gunnane and L.U. Tompson. AOSC. Press. Champaihg, IL., 1995, P.22-42.

108. Berti C., Ballabio C., Restani P., Porrini M., Bonomi F., lametti S. Immunochemical and Molecular Properties of Proteins in Chenopodium quinoa // Cereal Chemistry; St. Paul. - 2004. -Vol. 81, N 2. - P.275-277.

109. Bordignon J.R., Nakahara K., Yoshihashi T., Nikkuni S. Hydrolysis of isoflavanones and consumption of oligosaccarides during lactic acid fermentation of soybean milk // JARQ - 2004. - Vol. 38,N4 - P. 259-265.

110. Boschin G., Scaglioni L., Arnoldi A. Optimization of the synthesis of the cross-linked amino acid ornithinoalanine and nuclear magnetic resonance characterization of lyssinoalanine and ornithinoalanine // J.agr.Food Chem. -1999 - Vol.47, N3. - P.939-944.

111. Chango A., Villiaume C., Bau H.M., Nicotas J.P., Messian L. Debittering of lupin protein by calcium alginate and nutritional evalution // J. Sci. Food Agric., 1993,63.

112. Choo Wee Sim, Muchammad K., Yusof S., Bakar J., Hashim D. The optumization of conditions for the prodaction of acid-hydrolysed winged bean and soe bean proteins with reduction of 3-monocloropropane-l, 2-diol (3- MCPD) // Internacional Journal Food Science & Technology - 2004. -Vol. 39, N 9 - P.947-958.

113. Chove B.E., Grandison A.S., Lewis M.J. Emulsifyihg properties of soy protein isolate fraction obtained by isoelectric precipitation // J. Sc. Food Agr. - 2001. Vol. 81., iss 8.-P.759-763

114. Fasina O., Tyler B., Picard M., Zheng G.-H., Wahg N. Effect of infrared heating on the properties of legume seeds // Intern. J. Food Sc. Technol. -2001. -Vol. 36, N1 - P.79-90.

115. Fredrikson M., Biot P., Alminger M.L., Carlsson N.-G., Sandberg A.-S. Production process for high-quality pea-protein isolate with low content of oligosaccharides and phytate // J. agr. Food Chem. - 2001. -Vol. 49, N 3. -P. 1208-1212.

116. Fuh W.-S., Chaing B.-H. Dephytinisation of the rice bran and manufacturing a new food ingredient // J. Sc. Food Agr. - 2001 - Vol.81, iss.15 - P. 14191425.

117. Gambus H., Mikulec A., Gambus F., Pisulewski P. Perspectives of linseeds utilization in bacing // Pol.J.Food Nutrit. Sc. - 2004. - Vol.13, N1 -P.21-27.

118. Gonzalez Z., Perez E. Evaluation of lentil starches by microware irradiation and extrusion cooking // Food Res. intern. - 2002. - Vol. 35, N5 -P.415-420.

119. Graham J.A., Panozzo J.F., Lim P.S., Brouwer J.B. Effects of gamma irradiation on physical and chemical properties of chikpeas (Cicer arietinum) // J.Sc.Food Agr. -2002. -Vol. 82, iss 14-P. 1599-1605.

120. Haque A.M., Shams-Ud-Din M., Haque A. The effect of aqueous extracted wheat bran on the baking quality of biscuit // Intern. J. Food Sc. Technol. - 2002. - Vol. 37,N4 - P.453-462.

121. Hout R. Van den, Pouw M., Gruppen H., Van't Riet K. Inactivation kinetics study of the Kunitz soybean trypsin inhibitor and the Bowman-Birk inhibitor

122. Inouye K., Shiihara M., Uno T., Takita T. Deodorization of soybean proteins by enzymatic and physicochemical treatments // J. agr .Food Chem. - 2002 - Vol.50, N6 - P.1652-1658

123. Kadles P., Sculinova M., Urbanova D., Blaxa L., Pincrova J. Influens of abiotic stress and technologial treatment on chemical composition of cereal grains and legumin seeds // Pol.J.Food Nutrit. Sc. -2003. - Vol. 12/53, SI-2 - P.40-41.

124. Kaiser H., Muller K. Gewinnung und Eigenschaften pflanzlicher Proteine fur der Einsaz in gezchaumten Systemen und Feinen // Getreide Mehl Brot. - 2005, Vol.59, N1.- P. 39-47.

125. Kampars V., Kronberga S. Iodine values estimination of vegetable oils by FTIR spectroscopy // Pol J.Food Nutrit. Sc. - 2003. - Vol. 12/53, SI-2 - P.45- 47.

126. Kawai K., Hagiwara Т., Takai R. Suzuki T. Maillard reaction rate in various glassy matrices // Biosc. Biotechnol. Biochem. - 2004.- Vol. 68, N 11 - P.2285-2288.

127. Ngugen T.T.H., Sacurai H., Migahara M., Yoshihashi Т., Uematsu Т., Yamaki Т., Parkanyiova J, Pokorny J. Comparative study on allergenic properties of high -oleic and conventional peanuts // Pol. J.Food Nutrit. Sc. -2003. - Vol. 12/53, SI-2 - P.88-95.

128. Ozcan M., Seven S. Physical and chemical analysis and fatty acid composition of peanut, peanut oil and peanut butter from COM and NC-7 cultivars // Grasas Aceites - 2003. - Vol. 54, fasc. 1 - P. 12-18.

129. Pelembe L.A.M., Erasmus C., Taylor J.R.N. Development of a protein-rich composite sorghum-compea instant porridge by extrusion cooking process // Lebensmittel-Wiss.-Technol.-2002, Vol.35,N2-P. 120127.

130. Porres J.M., Etcheverry P., Miller D.D., Lei X.G. Phytase and citric acid supplementation in whole-wheat bread improves phitate-phosphorus release and iron dialyzability // J. Food Sc. - 2001. - Vol.66, N 4. - P.614-619.

131. Saleedo-Chavez В., Osuna-Casto J.A., Guevara-Lara F., Dominguez-Dominguez J., Paredes-Lopez O. Optimization of the isoelectric precipitation method to obtain protein isolates from amaranth (Amaranthus cruentus) seeds // J.agr. Food Chem. - 2002 - Vol.50, N22 - P.6515-6520.

132.Tauford C. Interpretation of Hudrogen ion Titration Curoes of proteius. Adv. Protein Chem, 263,2003, 69-165.

133. Zielinski H., Kozlowska H. The content of tocopherols in Cruciferae sprouts // Pol.J.Food Nutrit. Sc. - 2003. - Vol. 12/53, N4 - P.25-31.

134. Zielinski H., Piscula M.K., Kozlowska H. Biologically active compounds in Cruciferae sprouts and their canger after termal treatment Pol.J.Food Nutrit. Sc. - 2005. - Vol.14, N4 - P.375-380.

135. L.M. Hjelmeland and A. Chrambach. The impact of L.G. Longsworth on the theory of electrophoresis. Electrophoresis, 1982, 3,9-17.

136. Laemmli U. K., Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature, 1970, 227, 680-685.