Активность теломеразы при раке предстательной железы тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.40, кандидат медицинских наук Поляковский, Константин Александрович

• Поляковский, Константин Александрович
• кандидат медицинских наук
• 2007

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Поляковский, Константин Александрович

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. Обзор литературы.

ГЛАВА 2. Материалы и методы исследований.

ГЛАВА 3. Активность теломеразы при раке предстательной железы

ГЛАВА 4. Активность теломеразы при доброкачественной гиперплазии простаты и простатической интраэпителиальной неоплазии

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Активность теломеразы при раке предстательной железы»

Рак предстательной железы (РПЖ) в настоящее время является наиболее распространенной формой рака среди мужчин и занимает второе место в структуре онкологической смертности мужского населения европейских стран и США. В России за период с 1998 по 2003 годы прирост показателя заболеваемости РПЖ составил 28% [161]. Столь значительный прирост заболеваемости РПЖ может быть обусловлен как растущей настороженностью в отношении этого заболевания среди практикующих врачей и населения, так и повсеместным внедрением в клиническую практику определения уровня простатспецифического антигена (ГГСА) в сыворотке крови с последующим проведением пункционной биопсии предстательной железы. Повсеместное определение уровня ПСА у мужчин старше 50 лет значительно улучшило диагностику локализованных форм РПЖ и, как следствие, повысило число выполняемых радикальных простатэктомий, что способствовало повышению общей выживаемости от 67% до 89%) за последние 20 лет [16].

К сожалению, несмотря на то, что применение ПСА продемонстрировало высокую чувствительность диагностики рака простаты с использованием максимально допустимого уровня, равного 4 нг\мл, низкая специфичность ПСА остается повсеместной проблемой. Ложное повышение уровня ПСА наблюдается при таких заболеваниях как простатит и доброкачественная гиперплазия предстательной железы (ДТП) [43, 46, 54, 56, 62, 68, 103, 104, 111, 113, 117, 131, 148, 163] . В результате у пациентов с уровнем ПСА от 4 до 10 нг\мл (так называемая «серая зона» шкалы) позитивная предсказательная ценность выявления РПЖ по разным данным составляет от 18 до 25% (средняя 21%) [28, 36, 37, 116, 123, 125, 134, 152, 164]. Столь низкая специфичность этого маркера приводит к большому количеству ненужных биопсий и связанных с ними осложнений. Еще одним настораживающим фактором является рост случаев выявления РПЖ при уровне ПСА менее 4 нг\мл, причем, согласно данным Catalona и соавторов, у 17% пациентов с верифицированным раком простаты и уровнем ПСА от 2,6 до 4 нг\мл РПЖ был местнораспространенным [35]. Снижение порогового уровня ПСА ниже 4 нг\мл, как рекомендуют некоторые исследователи, еще больше усугубит проблему низкой специфичности этого маркера.

Повсеместное выполнение пункционных биопсий простаты в случае повышения уровня ПСА привело к выявлению такого патоморфологического феномена как простатическая интраэпителиальная неоплазия (ПИН). ПИН относится к разряду дисплазий эпителия и разделяется на ПИН низкой и высокой степеней. Если в отношении ПИН низкой степени врачебная тактика более или менее общепринята и сводится к динамическому наблюдению с контролем уровня ПСА, то ПИН высокой степени до сих пор является предметом дискуссий. Ряд авторов считает ПИН высокой степени «предраком» и настаивает на выполнении повторных биопсий с интервалом от 1 до 3 месяцев [1], другие авторы не столь критичны и рекомендуют динамическое наблюдение с выполнением повторной биопсии только в случае роста уровня ПСА. При этом вероятность выявления РПЖ при повторной биопсии даже в случае наличия ПИН высокой степени невелика и большинство биопсий оказываются ненужными.

Таким образом, несмотря на низкую специфичность, ПСА хорошо зарекомендовал себя как неинвазивный скрининг-тест из-за высокой чувствительности, простоты методики определения и низкой стоимости. По всей видимости, в этом качестве определение ПСА останется методом выбора на ближайшие годы. Однако необходимы новые маркеры РПЖ, обладающие большей раковой специфичностью.

В зарубежной литературе активно обсуждается возможность использования фермента теломеразы в качестве универсального онкомаркера. Этот фермент содержится в ядре клетки и его биологическая роль заключается в восстановлении утраченных концов хромосомной ДНК (теломер) после каждого клеточного деления. В большинстве соматических клеток активность теломеразы (AT) отсутствует, что приводит к тому, что после определенного числа клеточных делений (примерно 80-100) длина концевых теломерных последовательностей ДНК уменьшается до критического уровня и клетка подвергается апоптозу — запрограммированной клеточной гибели. Фермент теломераза позволяет избежать-*этого, восстанавливая утраченные теломеры на концах хромосом, благодаря чему клетка становится условно «бессмертной». Неудивительно, в большинстве злокачественных опухолей обнаруживается высокая активность этого фермента. При этом практически во всех нормальных клетках активность теломеразы не определяется. Активность теломеразы обнаружена только в некоторых здоровых тканях человека. Это, прежде всего, ткани зародышевой линии взрослого организма, ткани эмбриона [151, 159]. Теломераза также экспрессируется в интенсивно пролиферирующих тканях взрослого организма: эндометрии [77], эпидермисе [147], слизистой кишечника [60] и др. Однако даже в активно пролиферирующих здоровых клетках AT значительно ниже, чем в злокачественных опухолях.

Первые данные об активации теломеразы в опухолях человека были опубликованы в 1994 году Counter и соавторами [42]. AT была обнаружена в клетках асцитной жидкости больных карциномой яичника. Примерно в это же время Kim и соавт. разработали очень чувствительный метод определения активности теломеразы TRAP (Telomeric Repeat Amplification Protocol), с помощью которого удалось продемонстрировать наличие AT в 90 случаях из 101 при исследовании двенадцати различных типов опухолей и полное отсутствие фермента во всех 50 исследованных образцах нормальных тканей

72]. Чувствительность используемого для анализа AT метода TRAP настолько высока, что позволяет обнаружить активность теломеразы всего в 1-10 клетках. Наличие AT в доброкачественных и диспластических тканях может свидетельствовать о начале злокачественной трансформации.

Согласно данным зарубежных авторов, при аденокарциноме предстательной железы AT выявляется в 47 - 92% случаев [17, 39, 64, 70, 71, 82, 83, 110, 130, 138, 143, 144, 146, 150, 160, 162, 166]. При простатической инграэпителиальной неоплазии AT выявляется от 16% до 73% случаев [39, 64, 74, 166]. При доброкачественной гиперплазии предстательной железы и в нормальной ткани простаты AT выявляется от 0 до 10,5% случаев, причем ее уровень существенно ниже, чем в раковых клетках [31, 70, 74, 82, 83, 130, 138, 146, 150, 162, 166]. Наличие AT у пациентов с ПИН и ДГП большинство авторов объясняют ранней стадией злокачественной трансформации, не определяемой при гистологическом исследовании.

Вышеуказанные данные свидетельствуют о том, что определение AT в ткани простаты может не только улучшить диагностику РПЖ, но и прогнозировать его развитие у пациентов с ПИН и ДГП. Отдаленное наблюдение за пациентами с наличием AT и не выявленным РПЖ поможет подтвердить или отвергнуть это предположение.

К сожалению, в отечественной литературе мы не встретили работ, посвященных изучению активности теломеразы при заболеваниях простаты. Отчасти это может объясняться высокой стоимостью применяемого большинством зарубежных авторов изотопного метода TRAP. Помимо высокой стоимости, данный метод определения AT требует использования меченных радиоизотопами нуклеотидов, и, как следствие, может применяться только в условиях специализированной лаборатории. Это обстоятельство что еще более затрудняет внедрение метода в широкую клиническую практику. В лаборатории молекулярной биологии НИИ медицинской экологии департамента здравоохранения г. Москвы разработан модифицированный неизотопный метод TRAP, при котором для оценки продуктов реакции вместо меченных радиоизотопами нуклеотидов используется высокочувствительный краситель Sybr Gold. Испытание модифицированного метода на культуре клеток андрогензависимого рака простаты LnCap продемонстрировало сопоставимые со стандартным методом TRAP результаты [Глухов А.И., 1998]. Однако остается неясным, можно ли применять модифицированный неизотопный метод для работы с тканью простаты, а точнее с пункционными биоптатами простаты. Кроме того, в проанализированной зарубежной литературе отсутствуют отдаленные результаты наблюдения за пациентами с наличием AT и не выявленным РПЖ. В результате вопрос о возможности использования AT для прогнозирования развития РПЖ у больных с ПИН и ДТП остается открытым. Неясность по вышеуказанным вопросам явилась основанием для проведения собственного исследования.

Цель исследования оценить возможность использования пеизотоппого метода TRAP для определения активности теломеразы в ткани предстательной железы и улучшить результаты диагностики рака предстательной железы

Задачи исследования:

1. Использовать модифицированный метод TRAP и оценить его возможности по выявлению активности теломеразы в образцах ткани простаты

2. Исследовать активность теломеразы у здоровых мужчин с нормальным уровнем ПСА

3. Исследовать активность теломеразы у пациентов с наличием рака предстательной железы

4. Исследовать активность теломеразы у пациентов с повышенным уровнем ПСА и наличием доброкачественной гиперплазии простаты, хронического простатита и простатической интраэпителиальной неоплазии

5. Изучить клиническую ценность определения активности теломеразы у пациентов с наличием рака предстательной железы

6. Изучить клиническую ценность определения активности теломеразы в прогнозировании развития рака простаты у пациентов с доброкачественной гиперплазией простаты и простатической интраэпителиальной неоплазией

Научная новизна:

• исследована активность теломеразы у пациентов с нормальным уровнем ПСА и пациентов с повышенным уровнем ПСА и различными заболеваниями предстательной железы (рак предстательной железы, доброкачественная гиперплазия простаты с сопутствующей простатической интраэпителиальной неоплазией, хронический простатит). Установлено, что определение активности ■ теломеразы позволяет не только улучшить диагностику рака простаты, но и прогнозировать развитие РПЖ у пациентов с ДГПиПИН.

• разработан и внедрен в клиническую практику новый диагностический метод - исследование активности теломеразы модифицированным неизотопным методом TRAP, который обладает высокой специфичностью и позитивной предсказательной ценностью диагностики РПЖ.

• определена клиническая ценность исследования активности теломеразы в диагностике рака предстательной железы

• определена' клиническая ценность исследования активности теломеразы в прогнозировании развития рака простаты у пациентов с доброкачественной гиперплазией простаты и простатической интраэпителиальной неоплазией по результатам динамического наблюдения сроками от 2 до 5 лет

Практическая значимость: исследование активности теломеразы - новый высокочувствительный и высокоспецифичный метод диагностики рака предстательной железы исследование активности теломеразы не только улучшает диагностику рака предстательной железы, но и позволяет уточнить стадию заболевания исследование активности теломеразы у пациентов с доброкачественной гиперплазией простаты и простатической интраэпителиальной неоплазией позволяет выделить группу пациентов с высокой вероятностью развития рака предстательной железы исследование активности теломеразы у пациентов с РПЖ, прошедших лечение методом сфокусированной ультразвуковой аблации простаты (Hi-Fu), позволяет выявить местный рецидив рака простаты на ранней стадии

Заключение диссертации по теме «Урология», Поляковский, Константин Александрович

ВЫВОДЫ:

1. Модифицированный неизотопный метод TRAP может быть использован для оценки активности теломеразы в образцах ткани простаты.

2. В ткани простаты у здоровых мужчин с нормальным уровнем ОПСА активность теломеразы отсутствует. При наличии в ткани патологически измененной предстательной железы активной теломеразы концентрация ПСА в крови статистически достоверно выше, чем при отсутствии фермента.

3. При раке предстательной железы активность теломеразы выявляется в 97,5% случаев. Выявление АТ в различных отделах предстательной железы коррелирует с распространенностью опухолевого процесса.

4. Активность теломеразы выявлена у 11 из 51 больных (21,5%) с ДГП и ПИН, причем высокая АТ выявлена у 10 больных, а у 1 пациента низкая "АТ.

5. Активная теломераза существенно повышает риск развития РПЖ у пациентов с ПИН.

6. Определение активности теломеразы у пациентов с РПЖ позволяет не только улучшить диагностику рака простаты, но и уточнить стадию опухолевого процесса. Определение АТ у пациентов с РПЖ после сфокусированной ультразвуковой аблации простаты позволяет диагностировать рецидив рака на ранней стадии.

7. Для 13%) пациентов выявление активной теломеразы предшествует на 7 месяцев - 2,5 года гистологически доказанному РПЖ.

8. Определение активности теломеразы у пациентов с ДГП и ПИН позволяет выделить из общей массы группу пациентов с высоким риском развития РПЖ и существенно снизить количество выполняемых биопсий простаты.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

При выполнении биопсии простаты в связи с повышенным уровнем простатспецифического антигена, особенно если уровень последнего находится в пределах «серой зоны» шкалы, рекомендуется исследование активности теломеразы в биопсийном материале.

Наличие высокой активности теломеразы у пациента с доброкачественной гиперплазией простаты и простатической интраэпителиальной неоплазией свидетельствует о высоком риске развития рака простаты и требует тщательного динамического наблюдения с выполнением повторных биопсий простаты.

При отсутствии активности теломеразы у пациента с неподтвержденным раком предстательной железы выполнение повторной биопсии нецелесообразно. В этой ситуации рекомендуется динамическое наблюдение (контроль уровня простатспецифического антигена, пальцевое ректальное и трансректальное ультразвуковое исследования).

У больных раком предстательной железы, прошедших лечение методом сфокусированной ультразвуковой аблации простаты, рекомендуется определение активности теломеразы до и после операции для контроля радикальности лечения и исключения прогрессирования опухолевого процесса.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Поляковский, Константин Александрович, 2007 год

1. Аляев Ю.Г., Головченко К.В., Коваленко Н.А., Лесничук С.Н., Северин С.Е., Зезеров Е.Г., Глухов А.И., Северин Е.С., Винаров А.З. Теломеразная активность при опухоли почки. //Здравоохранение Башкортостана 2003, №3, с. 6-9.

2. Глухов А.И., Зимник О.В., Гордеев С.А., Северин С.Е. Разработка амплификационных тест-систем для анализа теломеразы// Аллергия, астма и клиническая иммунология 1999. - №9. - С. 173-175.

3. Головченко К.В., Коваленко Н.А., Лесничук С.Н., Северин С.Е., Зезеров Е.Г., Глухов А.И., Северин Е.С., Винаров А.З. Теломеразная активность при опухоли почки.//Здравоохранение Башкортостана 2003, №3, с. 85-89.

4. Гориловский JT.M. Доброхотов М.А. Морфологические исследования при раке предстательной железы. Клиническая геронтология, 2003, №11, с. 811.

5. Гориловский JT.M., Лахпо И.Г., Любимова Н.В. Клиническое значение общего и свободного простатспецифического антигена при раке предстательной железы. Клиническая геронтология, 1998, №2, с. 9-14.

6. Докудовская С.С., Петров А.В., Донцова О.А. и др. Теломераза -необычный РНК-содержащий фермент (обзор) // Биохимия.- 1997.- т. 62, выпуски,-С. 1411-1422.

7. Каприн А.Д., Костин А.А., Семин А.В. Роль гормонотерапии в комплексном лечении локализованного и местнораспространенного рака предстательной железы. Русский медицинский журнал, 2006, № 28, 20532058.

8. Каприн А.Д., Подшивалов А. В. Современные аспекты диагностики рака простаты.// Андрология и генитальная хирургия : Научно-практический журнал. 2002. - N 1 . - С. 39-47.

9. Лопаткин Н.А. Руководство по урологии, Медицина, 1998.

10. Лоран О.Б., Пушкарь Д.Ю., Степанов В.Н. Дифференциальная диагностика опухолей предстательной железы с помощью определения уровня простатспсцифического антигена сыворотки крови. М., 2000 г.

11. Лоран О.Б., Пушкарь Д.Ю., Франк Г.А. Простат-специфический антиген и морфологическая характеристика рака предстательной железы: Руководство для врачей. М.: МЕДпресс, 1999.

12. Мазо Е.Б., Мешков В.В. Простатическая интраэпителиальная неоплазия. М, Гэотар-мед, 2001.

13. Матвеев Б.П., Комарова JI.E., Бухаркип Б.В. Итоги 5-летнего скрининга рака предстательной железы. Урология, №1, 2003.

14. Матвеев Б.П., Соколов А.В., Бухаркин Б.В. Клиническое использование простатического специфического антигена у больных раком предстательной железы. Урология и нефрология, 1991, №4, с. 8-11.

15. Молочков В.А., Трапезникова М.Ф., Уренков С.Б. Методы диагностики хронического уретрогенного простатита.// Рос. Журн. Кож. и Вен. болезней, 1998, №2, С. 57-61.

16. Пушкарь Д.Ю. Простат-специфический антиген и биопсия предстательной железы. М.: МЕДпресс-информ, 2003.

17. Пушкарь Д.Ю., Говоров А.В. Диагностические возможности биопсии простаты. Урология №6, 2002.

18. Пушкарь Д.Ю., Говоров А.В., Бормотин А.В. Скрининг рака предстательной железы. Урология, №1, 2003.

19. Ткачук В.М., Горбачев А.Г., Агулянский Л.И. Хронический простатит// «Медицина». Ленинград, 1998.

20. Akalin A. Elmore LW. Forsythe HL. Amaker В A. McCollum ED. Nelson PS. Ware JL. Holt SE. A novel mechanism for chaperone-mediated telomeraseregulation during prostate cancer progression. Cancer Res 2001 Jun 15;61(12):4791-6.

21. Babajan RJ, Fritsche H, Ayala A, Bhadkamkar V, Johnston DA, Naccarato W, et al. Performance of a neural network in detecting prostate cancer in the prostate-specific antigen reflex range of 2,5 to 4,0 ng/ml. Urology 2000;56:1000-6.

22. Babajan RJ, Fritsche H, Evans RB. Prostate specific antigen and prostate gland volume: correlation and clinical application. J Clin Lab Anal 1990;4:135-7.

23. Benson MC, Whang IS, Olsson CA, McMahon DJ, Cooner WH. The use of prostate specific antigen density to enhance the predictive value of intermediate levels of serum prostate specific antigen. J Urol 1992;147:817-21.

24. Blumenfeld W, Tycci S, Narayan P. Incedental lymphocytic prostatitis: Selective involvement with nonmalignant glands. Am J Surg Pathol 1992;16:975-981.

25. Borer JG, Sherman J, Solomon MC, Plawker MW, Macchia RJ. Age specific prostate specific antigen reference ranges: population specific. J Urol 1998;159:444-8.

26. Brawer MK, Meyer GE, Letran JL, Bankson DD, Morris DL, Yeung KK, et al. Measurement of complexed PSA improves the specificity for early detection of prostate cancer. Urology 1998;52:372-8.

27. Bretton PR. Prostate specific antigen and digital rectal examination in screening for prostate cancer: a community based study. South Med J 1994; 87:720-3.

28. Broccoli, D., Young, J.W., de Lange, T. Telomerase activity in normal and malignant hematopoietic cells. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1995, 92, 90829086.

29. Bussemalcers MJ, van Bokhoven A, Verhaegh GW, Smit FP, Karthaus HF, Schalken JA, et al. DD3: a new prostate-specific gene, highly overexpressed in prostate cancer. Cancer Res 1999;59: 5975-9.

30. Caldarera E. Crooks NH. Muir GH. Pavone-Macaluso M. Carmichael PL. An appraisal of telomerase activity in benign prostatic hyperplasia. Prostate 2000 Nov l;45(3):267-70.

31. Catalona WJ, Smith DS, Ornstein DK. Prostate cancer detection in men with serum PSA concentrations of 2,6 to 4 ng/ml and benign prostate examination. Enhancement of specificity with free PSA measurements. JAMA 1997;277:1452-5.

32. Catalona WJ, Smith DS, Ratliff TL, Basler JW. Detection of organ confined prostate cancer is increased through prostate specific antigen based screening. JAMA 1993;270: 978-54

33. Catalona WJ, Smith DS, Ratliff TL, Dodds KM, Coplen DE, Yuan JJ, et al. Measurement of prostate specific antigen in serum as a screening test for prostate canccr. N Eng J Med 1991; 324:1156-61.

34. Chan JM, Stampfer MJ, Giovannucci E, Gann PH, Ma J, Wilkinson P, et al. Plasma insulin-like growth factor-1 and prostate cancer risk: a prospective study. Science 1998;279:563-6.

35. Chieco P. Bertaccini A. Giovannini C. Stecca BA. Martorana G. Telomerase activity in touch-imprint cell preparations from fresh prostate needle biopsy specimens. Eur Urol 2001 Dec;40(6):666-72.

36. Chiu, C.-P., Dragowska, W., Kim, N.W., Vaziri, H., Yui, J., Thomas, Т.Е., Harley, C.B., Lansdorp, P.M. Differential expression of telomerase activity in hematopoietic progenitors from adult human bone marrow. Stem Cells, 1996, 14, 239-248.

37. Cooke, H.J., Smith, B.A. Variability at the telomeres of human X/Y pseudoautosomal region. Cold Spring Harbor Sym. Quant. Biol., 1986, 51, 213219.

38. Counter, C.M., Hirte, H.W., Bacchetti, S., Harley, C.B. Telomerase activity in human ovarian carcinoma. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1994, 91, 2900-2904.

39. Dalton DL. Elevated serum prostate specific antigen due to acute bacterial prostatitis. Urology 1989;33:465.

40. Darson MF, Pacelli A, Roche P, Rittenhouse HG, Wolfert RL, Saeid MS, et al. Human glandular kallikrein 2 expression in prostate adenocarcinoma and lymph node metastases. Urology 1999;53:939-44.

41. Darson MF, Pacelli A, Roche P, Rittenhouse HG, Wolfert RL, Saeid MS, et al. Human glandular kallikrein 2 expression in prostate adenocarcinoma and lymph node metastases. Urology 1999;53:939-44.

42. Djavan B, Bursa B, Seitz C, Soeregi G, Remzi M, Basharkhah A, et al. Insulinlike growth factor-1 (IGF-1), IGF-1 density, and IGF-1/ PSA ratio for prostate cancer detection. Urology 1999;54:603-6.

43. Djavan В, Zlotta A, Remzi M, Ghawidel K, Bashaiichah A, Schulman CC, et al. <

44. Optimal predictors of prostate cancer on repeat prostate biopsy: a prospectivetstudy of 1051 patients. J Urol 2000; 163:1144-9.

45. Djavan B, Zlotta AR, Byttebier G, Shariat S, Omar M, Schulman CC, et al. Prostate specific antigen density of the transitional zone for early detection of prostate cancer. J Urol 1998; 160:411-9.

46. Ferrero-Doria R, Peres-Flores D, Terrer-Artes С et al. Impact of prostaticibenign hyperplasia and prostatic inflammation on the increase of prostate specific antigen levels. Actas-Urol-Esp 1997;21 (Suppl. 2): 100-104.

47. Glukhov A. I., Zimnik O.V., Gordeev S.A., Severin S.E. Inhibition of Telomerase activity of Melanoma Cells in vitro by antisence oligonucleotides. Biochem Biophys Res Commns 1998, vol. 248, p. 368-371.

48. Guo C. Armbruster BN. Price DT. Counter CM. In vivo regulation of hTERT expression and telomerase activity by androgen. J Urol 2003 Aug; 170(2 Pt l):615-8.

49. Hammerer P. and Huland H.: Systematic sextant biopsies in 651 patients referred for prostate evaluation. J Urol 1994; 151:99.

50. Hastie, N.D., Dempster, M., Dunlop, M.G., Thompson, A.M., Green, D.K., Allshire, R.C. Telomere reduction in human colorectal carcinoma and with aging. Nature, 1990, 346, 866-868.

51. Heeb MJ, Espana F, Gittes RF, Griffin JH. Prostate specific antigen-alpha 2-macroglobulin complexes in prostate cancer patient sera. Biochem Mol Bio Int 1995;37:917-23.

52. Hessels D, Klein Gunnewiek JM, van Oort Г, Karthaus HF, van Leenders GJ, van Balken B, et al. DD3PCA3-based molecular urine analysis for the diagnosis of prostate cancer. Eur Urol 2003;44:8-15.

53. Hiyama, E., Hiyama, K., Tatsumoto, N., Shay, J.W., Yolcoyama, T. Telomerase activity in human intestine. Int. J. Oncol., 1996, 9, 453-458.

54. Hiyama, K., Hirai, Y., Kyoizumi, S., Akiyama, M., Hiyama, E., Piatyszek, M., Shay, J.W., Ishiolca, S., Yamakido, M. Activation of telomerase in human lymphocytes and hematopoietic progenitor cells. J. Immunol., 1995, 155, 37113715.

55. Hoekx L, Jeuris W, Van Marck E, Wyndaele JJ. Elevated serum prostate specific antigen (PSA) related to asymptomatic prostatic inflammation. Acta Urol Belg 1998; 66 (Suppl. 3):l-2.

56. Horninger W, Cheli CD, Babaian RJ, Fritsche HA, Lepor H, Taneja SS, et al. Complexed prostate specific antigen for early detection of prostate cancer in men with serum prostate specific antigen levels of 2 to 4 ng/ml. Urology 2002;60(Suppl):31-5.

57. Iczkowski KA. Pantazis CG. McGregor DH. Wu Y. Tawfik OW. Telomerase reverse transcriptase subunit immunoreactivity: a marker for high-grade prostate carcinoma. Cancer 2002 Dec 15;95(12):2487-93.

58. Igarashi, H., Sakaguchi, N. Telomerase activity is induced in human peripheral В lymphocytes by the stimulation to antigen receptor. Blood, 1997, 89, 12991307.i

59. Irani J, Levillain P, Goujon JM, Bon D, Doru BM, Aubert J. Inflammation in benign prostate hyperplasia: correlation with prostate specific antigen value. J Urol 1997; 157: 1301-1303.

60. Ismail A H, Pollak M, Behlouli H, Tanguay S, Begin LR, Aprikian AG. Insulin-like growth factor-1 and insulin-like growth factor binding protein-3 for prostate cancer detection in patients undergoing prostate biopsy. J Urol 2002;168:2426-30.

61. Kageyama Y. Kamata S. Yonese J. Oshima H. Telomere length and telomerase activity in bladder and prostate cancer cell lines. Int J Urol 1997 Jul;4(4):407-10.

62. Kallakury BV. Brien TP. Lowry CV. Muraca PJ. Fisher HA. Kaufman RP Jr. Ross JS. Telomerase activity in human benign prostate tissue and prostatic adenocarcinomas. Diagn Mol Pathol 1997 Aug;6(4): 192-8.

63. Kim, N.W., Piatyszek, M.A., Prowse, K.R., Harley, C.B., West, M.D., Ho; P.L.C., Coviello, G.M., Wright, W.E., Weinrich, S.L., Shay, J.W. Specific association of human telomerase activity with immortal cells and cancer. Science, 1994, 266, 2011-2015.

64. Kitagawa Y. Kyo S. Takakura M. Kanaya T. Koshida K. Namiki M. Inoue M. Demethylating reagent 5-azacytidine inhibits telomerase activity in human prostate cancer cells through transcriptional repression of hTERT. Clin Cancer Res 2000 Jul;6(7):2868-75.

65. Koeneman KS. Pan CX. Jin JK. Pyle JM 3rd. Flanigan RC. Shankey TV. Diaz MO. Telomerase activity, telomere length, and DNA ploidy in prostatic intraepithelial neoplasia (PIN). J Urol 1998 Oct; 160(4): 1533-9.

66. Kondo Y. Koga S. Komata T. Kondo S. Treatment of prostate cancer in vitro and in vivo with 2-5A-anti-telomerase RNA component. Oncogene 2000 Apr 27;19(18):2205-11.

67. Kyo, S., Takakura, M., Kohama, Т., Inoue, M. Telomerase activity in human endometrium. Cancer Res., 1997, 57, 610-614.

68. Latil A. Vidaud D. Valeri A. Fournier G. Vidaud M. Lidereau R. Cussenot O. Biache I. htert expression correlates with MYC over-expression in human prostate cancer. Int J Cancer 2000 Mar 20;89(2): 172-6.

69. Liang P, Pardee AB. Differential display of eukaryotic messenger RNA by means of polymerase chain reaction. Science 1992;257:967-71.

70. Liang P, Pardee AB. Differential display: a general protocol. Mol Biotechnol 1998;10:261-7.

71. Lin Y. Uemura H. Fujinami K. Hosaka M. Harada M. Kubota Y. Telomerase activity in primary prostate cancer.J Urol 1997 Mar; 157(3): 1161-5.

72. Lin Y. Uemura H. Fujinami K. Hosaka M. Iwasaki Y. Kitamura H. Harada M. Kubota Y. Detection of telomerase activity in prostate needle-biopsy samples. Prostate 1998 Jul l;36(2):121-8.

73. Linton HJ, Marks LS, Millar LS, Knott CL, Rittenhouse FIG, Mikolajczyk SD. Benign prostate specific antigen (BPSA) in serum is increased in benign prostate disease. Clin Chem 2003;49:253-9.

74. Liu ВС. LaRose I. Weinstein LJ. Ahn M. Weinstein MH. Richie JP. Expression of telomerase subunits in normal and neoplastic prostate epithelial cells isolated by laser capture microdissection. Cancer 2001 Oct 1 ;92(7): 1943-8.

75. Lovgren J, Piironen T, Overmo C, Dowell В, Karp M, Pettersson K, et al.

76. Production of recombinant PSA and HK2 and analysis of their immunologicicross-reactivity. Biochem Biophys Res Commun 1995; 213:888-95.

77. Luzzi G. The prostatitis syndromes. Int J STD AIDS 1996;7:471-478.

78. Maeda H, Arai Y, Aoki Y, Okubo 1С, Okada T, Maekawa S. Complexed prostate specific antigen and its volume indexes in the detection of prostate cancer. Urology 1999; 54:225-8.

79. Mantzoros CS, Tzonou A, Signorello LB, Stampfer M, Trichopoulos D, Adami HO. rnsulin-Iike growth factor 1 in relation to prostate cancer and benign prostatic hypertrophy. Br J Cancer 1997;76:1115-8.

80. Martin KJ, Pardee AB. Principles of differential display. Methods Enzymol 1999;303:234-58.

81. Meid FH. Gygi CM. Leisinger ITJ. Bosman FT. Benhattar J. The use of telomerase activity for the detection of prostatic cancer cells after prostatic massage. J Urol 2001 May; 165(5): 1802-5.

82. Mikolaiczylc SD, Rittenhouse HG. Pro PSA: a more cancer specific form of prostate specific antigen for the early detection of prostate cancer. Keio J Med 2003;52:86-91.

83. Milcolajczyk SD, Grauer LS, Millar LS, Hill TM, Kumar A, Rittenhouse HG, etal. A precursor form of PSA (pPSA) is a component of the free PSA in prostateicancer serum. Urology 1997;50:710-4.

84. Mikolajczyk SD, Marker KM, Millar LS, Kumar A, Saedi MS, Payne JK, et al.i

85. A truncated precursor form of prostate specific antigen is a more specific serum marker of prostate cancer. Cancer Res 2001 ;61:6958-63.

86. Mikolajczyk SD, Marks LS, Partin AW. Free prostate specific antigen is becoming more complex. Urology 2002;59:797-801.

87. Mikolajczyk SD, Millar LS, Marker KM, Wang TJ, Rittenhouse HG, Marks LS, et al. Seminal plasma contains "BPSA", a molecular form of prostatespecific antigen that is associated with benign prostatic hyperplasia. Prostate 2000;45:271-6.

88. Mikolajczyk SD, Millar LS, Wang TJ, Rittenhouse HG, Marks LS, Song W, et al. A precursor form of prostate specific antigen is highly elevated in prostate cancer compared with benign transitional zone prostate tissue. Cancer Res 2000;60:756-9.

89. Miller MC, O'Dowd GJ, Partin AW, Veltri RW. Contemporary use of complexed PSA and calculated per cent free PSA for early detection of prostate cancer: impact of changing demographics. Urology 2001; 57:1105-11.

90. Minev B. Hipp J. Firat II. Schmidt JD. Langlade-Demoyen P. Zanetti M'. Cytotoxic T cell immunity against telomerase reverse transcriptase in humans. Proc Natl Acad Sci U S A 2000 Apr 25;97(9):4796-801.

91. Mitchell ID, Croal BL, Dickie A, Cohen NP, Ross I. A prospective study to evaluate the role of complexed prostate specific antigen and free/total prostate specific antigen ratio for the diagnosis of prostate cancer. J Urol 2001; 165:4953.

92. Nadler RB, Humphrey PA, Smith DS, Catalona WJ, Rati iff TL. Effect of inflammation and and benign prostatic hyperplasia on elevated serum prostatic specific antigen levels. J Urol 1995; 154 (Suppl. 2.1):407-413.

93. Neal DE Jr., Clejan S, Sarma D, Moon TD. Prostate specific antigen and prostatitis. Effect of prostatitis in serum PSA in human and nonhuman primates. Prostate 1995; 20:105-111.

94. Nixon RG, Meyer GE, Blase AB, Gold MH, Brawer MK. Comparison of three investigational assays for the free form of prostate specific antigen. J Urol 1998; 160:420-5.

95. Okegawa T, Noda H, Nutahara K, Higashihara E. Comparison of two investigational assays for the complexed prostate specific antigen in total prostate specific antigen between 4.0 and 10.0 ng/ml. Urology 2000;55:700-4.

96. Okihara K, Cheli CD, Partin AW, Fritche HA, Chan DW, Sokoll LJ, et al. Comparative analysis of complexed prostate specific antigen, free prostate specific antigen, and their ratio in detecting prostate cancer. J Urol 2002;167:2017-23.

97. Orlando C. Gelmini S. Selli C. Pazzagli M. Telomerase in urological malignancy. J Urol 2001 Aug;166(2):666-73.

98. Pansadoro V, Emilliozzi P, Defidio L. Prostate-specific antigen and prostatitis in men under fifty. Eur Urol 1996;30 (Suppl. l):24-27.

99. Partin AW, Brawer MK, Bartsch G, Hominger W, Taneja SS, Lepor H, et al. Complexed prostate specific antigen improves the specificity for prostate cancer detection: results of a prospective multicenter clinical trial. J Urol 2003;170:1787-91.

100. Partin AW, Carter HB, Chan DW, et al. Prostate specific antigen in the staging of localized prostate cancer: influence of tumor volume and benign hyperplasia. J Urol 1990; 143:747

101. Partin AW, Catalona WJ, Southwick PC, Subong EN, Gasior GH and Chan DW. Analysis of percent free prostate specific antigen (PSA) for prostate cancer detection: influence of total PSA, prostate volume and age. Urology 1996; Suppl. 48:55.

102. Partin AW, Catalona WJ, Smith DS. Use of human glandular kallikrein 2 for detection of prostate cancer: preliminary analysis. Urology 1999;54:839-45.

103. Peter J, Unverzagt C, Krogh TN, Vorm O, Hoesel W. Identification of precursor forms of free prostate specific antigen in serum of prostate cancer patients by immunosorption and spectrometry. Cancer Res 2001;61:957-62.'

104. Piironen T, Lovgren J, Karp M, Eerola R, Lundwall A, Dowell B, et al. Immunofluorometric assay for sensitive and specific measurement of human prostatic glandular kallikrein (hk2) in serum. Clin Chem 1996;42:1034-41.

105. Piironen T, Pettersson К, Suonpaa M, Stenman UH, Oesterling JE, Lovgren T, et al. In vitro stability of free prostate specific antigen (PSA) complexed to alpha 1-antichymotrypsin in blood samples. Urology 1996;48(Suppl):81-7.

106. Porter JR, Hay ward R, В rawer MK. The significance of short term PSA change in men undergoing ultrasound guided prostate biopsy. J Urol 1994;264(Suppl):239A.

107. Presti JC, Hovey R, Bhargava V, et al. Prospective evaluation of prostate specific antigen and prostate specific antigen density in the detection of carcinoma of the prostate: Ethnic variations. J Urol 1997; 157:907

108. Reisiggl A, Horninger W, Fink K, Klocker H, Bartsch G. Prostate cancer screening in the country of Tyrol, Austria: experience and results. Cancer 1997;80:1818-29.

109. Royver O. Mege-Lechevallier F. Chapelon J-Y. Gellet A. Bouvier R. Boutetie F. Lyomet D. Evaluation of colour doppler in guiding prostate byopsy after HIFU. European Urology 2006 (50):490-497.

110. Saad F, Aprikian AG, Dessureault J, Elhilali MM, Tradel C, Piche L, et al. Multicenter study of the uPM3 test, a new molecular urine assay to detect prostate cancer. AUA Program Abstract 2003; 169(Suppl): 121.

111. Sakr WA. Partin AW. Histological markers of risk and the role of high-grade prostatic intraepithelial neoplasia. Urology 2001 Apr;57(4 Suppl 1): 115-20.

112. Scates DK. Muir GH. Venitt S. Carmichael PL.Detection of telomerase activity in human prostate: a diagnostic marker for prostatic cancer? Br J Urol 1997 Aug;80(2):263-8.

113. Schaeffer AJ, Wendel EF, Dunn JK. Prevalence and significance of prostatic inflammation. J Urol 1981;125:215-219.

114. Schalken JA, Hessels D, Verhaegh G. New targets for therapy in prostate cancer: Differential display code 3 (DD3PCA3), a highly prostate cancer-specific gene. Urology 2003;62(Suppl):34-43.

115. Schedlich LJ, Benetts B, Morris BJ. Primary structure of a human glandular kallikrein gene. DNA 1987;6:429-37.

116. Schroder FH, van der Cruijsen-Koeter, et al. Prostate cancer detection at low prostate specific antigen. J Urol 2000;163:806-812.

117. Shay, J.W., Wright, W.E. Telomerase activity in human cancer. Curr. Opin. Oncol., 1996, 8, 66-71.

118. Soda H. Raymond E. Sharma S. Lawrence R. Davidson К. Oka M. Kohno S. Izbicka E. Von Hoff DD. Effects of androgens on telomerase activity in normal and malignant prostate cells in vitro. Prostate 2000 May 15;43(3): 161-8.

119. Sokoll LJ, Chan DW, Mikolajczyk SD. Proenzyme PSA for the early detection of prostate cancer in the 2.5-4.0 ng/ml total PSA range: preliminary analysis. Urology 2002;59:261-5.

120. Sommerfeld HJ. Meeker AK. Piatyszek MA. Bova GS. Shay JW. Coffey DS.Telomerase activity: a prevalent marker of malignant human prostate tissue.Cancer Res 1996 Jan l;56(l):218-22.

121. Stanley ТА, Yang N, Hay AR, McNeal JE, Freiha FS, Redwine E. Prostate specific antigen as a serum marker for adenocarcinoma of the prostate. N Engl J Med 1987;317:909-16.

122. Stamey ТА. Pathogenesis and treatment of Urinary Tract Infections. Baltimore, Williams and Wilckins 1980;342-429.

123. Stamey ТА, Yemoto СЕ. Examination of the 3 molecular forms of serum prostate specific antigen for distinguishing negative from positive biopsy: relationship to transitional zone volume. J Urol 2000; 163:119-24.

124. Steuber T, Nurmikko P, Haese A, Pettersson K, Graefen M, Hammerer P, et al. Discrimination of benign from malignant prostatic disease by selective measurements of single chain, intact free prostate specific antigen. J Urol 2002;168:1917-22.i

125. Straub B. Muller M. Krause H. Goessl C. Schrader M. Heicappell R. Miller K. Molecular staging of surgical margins after radical prostatectomy by detection of telomerase activity. Prostate 2001 Oct 1 ;49(2): 140-4.

126. Takahashi C. Miyagawa I. Kumano S. Oshimura M. Detection of telomerase activity in prostate cancer by needle biopsy. Eur Urol 1997;32(4):494-8.

127. Taylor, R.S., Ramirez, R.D., Ogoshi, M., Chaffins, M., Piatyszek, M.A., Shay, J.W. Detection of telomerase activity in malignant and nonmalignant skin conditions. Journal of Investigative Dermatology, 1996, 106,759-765.

128. Tchengen MB, Oesterling JE. The effect of prostatitis, urinary retention, ejaculation and ambulation on the serum prostate specific antigen concentrations. Urol Clin North Amer 1997;24:283-291.

129. The American Cancer Society. Cancer Facts & Figures. 1998. pp 14-15, 20-24j

130. Tinzl M, Djavan B, Marberger M. uPM3 test. A new molecular assay detecting prostate cancer in urine samples: a new future perspective. AUA Program Abstract 2003; 169(Suppl):121.

131. Uemura H. Lin Y. Kubota Y. Telomerase activity in association with the pathological differentiation of prostate cancer. Nippon Rinsho 1998 May;56(5): 1287-91.

132. Ulaner, G.A., Giudice, L.C. Developmental regulation of telomerase activity in human fetal tissues during gestation. Mol. Hum. Reprod., 1997, 3, 769-773.

133. Veltri RW, Miller MC. Free/total PSA ratios improve differentiation of benignтand malignant disease of the prostate: critical analysis of two different test populations. Urology 1999;53:736-745.

134. Verhaegh GW, van Bokhoven A, Smit F, Schalken JA, Bussemakers MJ. Isolation and characterization of the promoter of the human prostate cancer-specific DD3 gene. J Biol Chem 2000;275:37496-503.

135. Weng, N., Levine, B.L., June, C.H., Hodes, R.J. Regulated expression of telomerase activity in human T lymphocyte development and activation. J. Exp. Med., 1996, 183,2471-2479.

136. Weng, N., Levine, B.L., June, C.H., Hodes, R.J. Regulation of telomerase RNAitemplate expression in human T lymphocyte development and activation. The Journal of Immunology, 1997, 158,3215-3220.

137. WHO. The World Health Report, http://www.who.orq/whr.1999.

138. WHO. The World Health Report, http://www.who orq/whr.2000.

139. Wolk A, Mantzoros CS, Andersson SO, Bergstrom R, Signorello LB, Lagiou P, et al. Insulin-like growth factor 1 and prostate cancer risk: a population-based, case-control study. J Natl Cancer Inst 1998; 90:911-5.

140. Wright, W.E., Piatyszek, M.A., Rainey, W.E., Byrd, W., Shay, J. Telomerase activity in human germline and embryonic tissues and cells. Dev. Genet., 1996, 18, 173-179.

141. Wullich В. Rohde V. Oehlenschlager B. Bonkhoff H. Ketter R. Zwergel T. Sattler HP.Focal intratumoral heterogeneity for telomerase activity in human prostate cancer. J Urol 1999 Jun; 161 (6): 1997-2001.171. www.netoncoloqy.ru/view.php?id=859

142. Wymenga LF. Wisman GB. Veenstra R. Ruiters MH. Mensink J IJ. Telomerase activity in needle biopsies from prostate cancer and benign prostates. Eur J Clin Invest 2000 Apr;30(4):330-5.

143. Yamamoto M, Hibi H, Miyalce K. Prostate-specific antigen levels in acute and chronic bacterial prostatitis. Hinyokika-Kiyo 1993;39 (Suppl. 5):445-449.

144. Zackrisson B, Aus G, Lilja H. Follow-up of men with Elevated Prostate-Specific Antigen and One Set of Benign Biopsies at Prostate Cancer Screening. Eur Urol 2003;43:327-332.

145. Zhang JS, Duncan EL, Chang AC, Reddel RR. Differential display of mRNA. Mol Biotechnol 1998;10:155-65.

146. Zhang W. Kapusta LR. Slingerland JM. Klotz LH. Telomerase activity in prostate cancer, prostatic intraepithelial neoplasia, and benign prostatic epithelium. Cancer Res 1998 Feb 15;58(4):619-21.

147. Zhang WM, Leinonen J, Kalkkinen N, Dowell B, Stenman UH. Purification and characterization of different molecular forms of prostate specific antigen in human seminal fluid. Clin Chem 1995;41: 1567-73.