Активность и теплоустойчивость некоторых ферментов amoeba proteus при изменении температуры культивирования амеб тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.25, кандидат биологических наук Подлипаева, Юлия Игоревна

• Подлипаева, Юлия Игоревна
• кандидат биологических наук
• 2000

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Подлипаева, Юлия Игоревна

Оглавление 2

Введение

1.Обзор литературы 6

1.1.Биохимические изменения при смене температурного режима 7

1.1.1. Теплоустойчивость белков

1.1.2. Количественный способ регуляции работы ферментов при изменении температуры среды

1.1.3. Изменение каталитической эффективности ферментов при смене температурного режима

1.2. Влияние температуры среды на одноклеточные организмы 21

1.2.1. Теплоустойчивость простейших

1.2.2. Биохимические особенности реакции одноклеточных организмов на изменение температурного режима

2. Цель и задачи исследования

3. Материал и методика 41

3.1. Амебы - объект исследования 41

3.1.1. Происхождение амеб, использованных в работе

3.1.2. Культивирование амеб

3.2. Гомогенат и супернатант 42

3.2.1. Получение гомогената

3.2.2. Получение супернатанта

3.3. Определение активности ферментов 43

3.3.1. Определение активности суммарных водорастворимых эстераз

3.3.2. Определение активности ферментов фосфоглюконатного пути

3.4. Определение теплоустойчивости ферментов 46

3.4.1. Определение теплоустойчивости суммарных водорастворимых эстераз

3.4.2. Определение теплоустойчивости глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы (Г6ФДГ)

3.4.3. Статистическая обработка данных

3.5. Анализ электрофоретических форм ферментов 48

3.5.1. Проведение нативного электрофореза

3.5.2. Обработка гелей после электрофореза

3.6. Выявление белков теплового шока Н8Р70 у амеб 49

3.6.1. Воздействие тепловым шоком и получение гомогената и супернатанта

3.6.2.Проведение8В8-электрофореза 50 3.6.3 .Иммуноблоттинг 51 3.6.4. Очистка белка ШР70 51 4. Результаты и обсуждение 52

4.1. Суммарные водорастворимые эстеразы (СВЭ) 52

4.1.1. Активность и теплоустойчивость СВЭ у двух штаммов амеб, культивируемых при 25 °С

4.1.2. Активность и теплоустойчивость СВЭ у амеб, акклимированных к пониженной температуре 10 °С

4.2. Глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа (Г6ФДГ) 68

4.2.1. Активность Г6ФДГ у амеб и особенности ее определения методами спектрофотометрии и электрофореза в ПААГ

4.2.2. Теплоустойчивость водорастворимой Г6ФДГ двух штаммов амеб, культивируемых при 25 °С

4.2.3. Активность Г6ФДГ у амеб, акклимированных к относительно низкой температуре 10 °С

4.2.4. Теплоустойчивость Г6ФДГ амеб штамма акклимированных к 10 °С

4.2.5. Теплоустойчивость Г6ФДГ амеб штамма Ба, акклимированных к повышенной температуре 28 °С

4.3. Белок теплового шока семейства Н8Р70 у амеб штамма Ба 105

4.3.1. Выявление белка ШР70 методом иммуноблоттинга

4.3.2. Выделение белка Н8Р70 методом хроматографии 113 Выводы 114 Список литературы 115

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Активность и теплоустойчивость некоторых ферментов amoeba proteus при изменении температуры культивирования амеб»

Среди многочисленных абиотических факторов внешней среды, оказывающих влияние на жизнедеятельность организмов, одно из основных мест принадлежит температуре. Проблема приспособления к изменяющимся температурным условиям среды важна как с практической (акклиматизация животных и растений к новым местам обитания), так и с теоретической (экология отдельных видов и их адаптивная радиация ) точек зрения. Приспособления животных и растений к температурным условиям внешней среды осуществляются на разных уровнях организации - популяционном, организмен-ном, тканевом, клеточном и молекулярном.

У эктотермных организмов имеются многообразные биохимические приспособления, направленные на минимизацию повреждений, вызванных изменениями температуры. Среди биологических структур (белков, нуклеиновых кислот, липидов), являющихся «мишенями», на которые может быть направлено повреждающее действие температуры, особое внимание уделялось белкам, а среди белков - ферментам. Это связано с тем, что именно ферментные системы обеспечивают необходимую интенсивность метаболизма при различных температурах и, кроме того, их активность представляет собой удобный для регистрации маркерный признак. Различные способы компенсации повреждающего действия температуры направлены на коррекцию активности ферментов и их каталитической эффективности. Кроме того, в качестве критерия протекания адаптивных процессов принято использовать изменение теплоустойчивости белков, в частности, белков-ферментов.

Количество сведений, иллюстрирующих различные биохимические способы температурной компенсации работы ферментных систем у простейших крайне невелико (Сопина, 1987,1991, 1997). Так же, как и в случае с многоклеточными организмами, активность и теплоустойчивость белков простейших исследовалась как в сравнительном плане - на представителях разных видов (популяций, клонов), так и в процессе акклимации представителей одного вида к разным температурам. Однако следует заметить, что, в отличие от данных по многоклеточным организмам, сведения, касающиеся простейших крайне немногочисленны.

Данные о теплоустойчивости ферментов одноклеточных организмов позволяют проследить положительную корреляцию между теплоустойчивостью фермента и теплолюбивостью вида (7апоуу, 1972) или внутривидовых группировок (Лозина-Лозинский, 1961; Сопина, 1986). Однако каких-либо общих закономерностей в поведении этого признака при акклимации животных одного вида к различным температурам культивирования выявить не удавалось (Серавин и др., 1965; Березина, 1970; Сопина, 1991). Не исключено, что поведение ферментов, различных по своей структуре, термолабильности, конфор-мационным потенциям и другим свойствам, и не подчиняется общей схеме при смене температурного режима. Для накопления фактов в этой области более эффективным было бы проведение адекватного анализа теплоустойчивости как можно большего числа ферментов у разнообразных организмов.

Свободноживущие пресноводные амебы, не имеющие в своем жизненном цикле полового процесса, представляют особый интерес для исследования их приспособлений к температурному фактору, так как отсутствие полового процесса позволяет четко отделить модификационные изменения, вызванные сменой температуры, от наследственных вариаций.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ Термином «адаптация» принято обозначать любые свойства и признаки организма, обеспечивающие его жизнеспособность (НосЬасЫса, 1998). Важнейшим элементом адаптационного процесса является акклимация, которая представляет собой компенсаторное изменение, возникающее в организме в ответ на длительное отклонение какого-либо фактора внешней среды от первоначального уровня, или «.фенотипический сдвиг, происходящий в лабораторных условиях в ответ на экспериментальное варьирование какого-либо одного параметра среды» (Проссер, 1977, стр. 19). Иногда акклимация может выглядеть инадаптивной, что, скорее всего, свидетельствует о незавершенности процесса (Прехт, 1964), который в своем завершенном виде всегда адаптивен (Хлебович, 1981).

Очень важными для анализа комплекса реакций исследуемого организма на изменения температуры среды являются сведения о диапазоне температурной толерантности (ДТ) данного организма и его температурном оптимуме. У разных объектов приняты разные критерии для определения этих понятий. Иногда ДТ характеризуется как диапазон активности 100% особей (Бергер, 1971), иногда - как диапазон, в пределах которого возможно «полноценное существование организма» (Александров, 1985). Понятие диапазона температурной толерантности и его определение имеет также большое значение при характеристике воздействия, которое та или иная температура оказывает на изучаемый организм. Температуры, лежащие в пределах и на границах ДТ (субоптимальные температуры), оказывают более мягкое действие, чем стрессовые, лежащие вне его и являющиеся часто сублетальными и летальными. Механизмы компенсаторных реакций организмов будут различны в первом и втором вариантах (Korhonen, Lagerspetz, 1996).

Воздействие повышенной температуры на любые клетки или организмы стимулирует транскрипцию высококонсервативного набора генов и синтез белков теплового шока (heat-shock proteins - HSP), относимых к разным семействам в зависимости от их молекулярного веса (Lindquist, Craig, 1988). Наряду с HSP, синтезирующимися при действии теплового шока (индуци-бельными), имеются гомологичные им белки, нормально присутствующие в интактных клетках (конститутивные). В отсутствие стрессовой ситуации количество конститутивных стрессовых белков в клетках может существенно варьировать (Lindquist, Craig, 1988).

В процессе интенсивного изучения приспособлений животных и растений, направленных на компенсацию повреждающего действия температуры, было сформировано понятие «теплоустойчивость», ставшее неотъемлемым элементом экспериментальных исследований и теоретических построений. Под «первичной теплоустойчивостью» подразумевается устойчивость клеток или организмов, определяемая сразу после краткосрочного интенсивного нагрева (см.: Александров, 1985, стр. 170). Уровень теплоустойчивости организмов и их клеток традиционно служил критерием их адаптации к температурным условиям. Многими работами классиков цитоэкологии было показано, что теплоустойчивость многоклеточного организма весьма лабильна, и что она изменяется при сдвигах температуры среды в пределах ДТ, обеспечивая существование организма в условиях колебания температуры (Ушаков, 19 73). Это положение оказалось справедливым для большого количества видов разнообразных эктотермных животных, позвоночных и беспозвоночных (Жирмунский, 1959; Арронет, 1960; Ушаков, Кусакина, 1960; Жирмунский, Шляхтер, 1963).

Напротив, теплоустойчивость отдельных клеток многоклеточных организмов, в отличие от теплоустойчивости организма в целом, оказалась консервативной величиной. Различный уровень теплоустойчивости клеток, характерный для каждого вида, возник и закрепился в процессе эволюции и является, по мнению Б. П. Ушакова, одним из критериев вида (Ushakov, 1964). По результатам многих исследований был сформулирован вывод о том, что «в природе.имеет место соответствие между температурной экологией вида и теплоустойчивостью клеток.организма» (Александров, 1985, стр. 187).

Что же касается модификационных изменений теплоустойчивости клеток в процессе акклимации организма к изменяющимся температурным условиям, то, за некоторыми исключениями (Камшилов, 1960; Дрегольская, 1963), у большинства многоклеточных организмов изменения окружающей температуры, не выходящие за пределы их ДТ, не вызывают сдвигов в уровне теплоустойчивости их клеток. Таким образом, клетки многоклеточного организма обладают более низкой акклимационной подвижностью, чем организм в целом (Ушаков, 1973).

Супероптимальный нагрев может способствовать возникновению временной термотолерантности (повышению теплоустойчивости) клеток (1л, 1989). Наряду с фактами, говорящими о том, что в приобретении клетками такой повышенной теплоустойчивости участвуют НБР (Копке1 е1 а1., 1998; МсКесИ-ш а1., 1998), имеются данные, не подтверждающие ключевой роли НБР в процессе повышения терморезистентности клеток после гипертермии (На11Ье^, На11Ье^, 1996). В. Я. Александров и И. М. Кислюк в обзоре, посвященном физиологическому аспекту реакции клеток на тепловой шок, делают заключение, что вопрос о механизме реактивного повышения теплоустойчивости клеточных функций и белков при тепловом шоке «пока остается без ответа» (Александров, Кислюк, 1994).

Особенно зависимы от колебаний температуры эктотермные (пойкило-термные) организмы, температура тела которых непостоянна и близка к температуре окружающей среды. Эктотермные животные обладают минимальной способностью физиологически регулировать температуру тела (Хочачка, Сомеро, 1977). Для эктотермных животных характерны два типа, или, точнее, уровня регуляции в ответ на колебания температуры. Первый - это поведенческий, направленный на то, чтобы при кратковременных колебаниях температуры среды найти подходящую микросреду для под держания температуры тела, близкой к оптимальной. Регуляция второго уровня связана с адаптация-ми биохимических систем организма при длительных, например сезонных, колебаниях температуры.

В основе компенсации температурных влияний на обмен лежат количественный и качественный способы регуляции работы ферментов. Первый способ - это изменение содержания ферментов в клетках. Второй способ, направленный на коррекцию каталитической эффективности ферментов, включает в себя конформационные изменения белков-ферментов, поддержание постоянства константы Михаэлиса для субстратов и кофакторов и выработку различных изо- и аллоформ фермента, более пригодных для функционирования в соответствующих температурных условиях (Хочачка, Сомеро, 1988). Показателем того, состоялись или нет адаптивные процессы, принято считать также изменение теплоустойчивости белков, в частности, белков-ферментов.

Поскольку основные понятия, затронутые в настоящей главе, были разработаны применительно к многоклеточным, в дальнейшем обзоре литературы мы подробнее остановимся на каждом из вышеперечисленных способах биохимической компенсации воздействия температуры на многоклеточный организм. Кроме того, будет сделана попытка проанализировать особенности температурных приспособлений одноклеточных организмов (простейших) в терминах, обозначенных выше.

Заключение диссертации по теме «Гистология, цитология, клеточная биология», Подлипаева, Юлия Игоревна

ВЫВОДЫ

1. В гомогенатах амеб Amoebaproteus, культивируемых при 25°С, методами колориметрии и спектрофотометрии выявляется высокая зсте-разная активность и активность глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы

Г6ФДГ). Активность фермента является у амеб штаммоспецифичным признаком.

2. Электрофоретические спектры Г6ФДГ двух штаммов амеб, различающихся по теплолюбивости, не отличаются друг от друга и состоят из 4 фракций, которые различаются по кинетике своей термоинактивации.

3. Теплоустойчивость как термостабильных эстераз, так и термолабильной Г6ФДГ положительно коррелирует с теплолюбивостью штамма амеб.

4. Активность и теплоустойчивость Г6ФДГ повышаются при аккли-мации амеб к относительно низкой температуре 10 °С и не изменяются при акклимации к 28 °С - температуре, являющейся верхней границей диапазона температурной толерантности исследованного штамма.

5. В клетках амеб конститутивно содержится белок теплового шока семейства НЗР 70. После экспозиции культуры амеб при температуре, превышающей верхнюю границу диапазона температурной толерантности исследуемого штамма, происходит повышение уровня содержания (индукция) этого белка.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Подлипаева, Юлия Игоревна, 2000 год

1. Александров В. Я., Кислюк И. М. 1994. Реакция клеток на тепловой шок: физиологический аспект. Цитология 36(1): 5-60.

2. Арронет Н. И. 1959. Клеточная и организменная теплоустойчивость Rana temporaria L. и Unió crassus Philipsson в разные сезоны года. Цитология 1(4): 443-449.

3. Бейер Т. В., Сидоренко Н. В. 1973. Цитохимическое исследование гемо-грегарин из рептилий Армении. III. Активность дегидрогеназ у гемогрегарин из периферической крови скальных ящериц и в зараженных эритроцитах. Цитология 15(5): 598-606.

4. Бергер В. Я. 1971. Адаптации к изменениям солености среды беломорского моллюска Hydrobia ulvae (Pennant), обработанного ингибиторами синтеза РНК и белка. В кн.: Отчетная научная сессия по итогам работ 1970 г. Зоол. ин-та АН СССР. Л., Наука: 3-4.

5. Березина И. Г. 1969. Определение глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы и -глицерофосфатдегидрогеназы у Spirostomum ambiguum, адаптированных к различным температурам. Матер. II научн. конф. молодых специалистов Инта цитологии АН СССР. Л.: Наука: 5.

6. Березина И. Г. 1970а. Цитохимическое исследование клеточного метаболизма некоторых свободноживущих простейших, культивируемых при разных температурах. Автореф. канд. дис. Л.

7. Березина И. Г. 19706. Цитохимическое исследование некоторых дегидро-геназ у Amoebaproteus, адаптированных к высокой и низкой температуре. Acta protozool., 7: 277-286.

8. Виноградова А. Н. 1963. Теплоустойчивость и температурный оптимум аденозинтрифосфатазной активности актомиозина черноморских и баренце-воморских скатов и крабов. В сб.: Проблемы цитоэкологии животных М., Л.: 189-195.

9. Глазко В. И., Созинов И. А. 1993. Генетика изоферментов животных и растений. Киев, Урожай.

10. ГлушанковаМ. А. 1965. Теплоустойчивость аденилаткиназы травяной и озерной лягушек. В сб.: Теплоустойчивость клеток животных М., JL: 200-202.

11. Глушанкова М. А., Кусакина А. А. 1967. Теплоустойчивость некоторых белков у представителей различных популяций такырной круглоголовки. В сб.: Изменчивость теплоустойчивости клеток животных в онто- и филогенезе. Л.:Наука: 114-118.

12. Дрегольская И. Н. 1963. Теплоустойчивость мерцательного эпителия жабр черноморских мидий в разные сезоны года. В сб.: Проблемы цитоэкологии животных М., Л.: 43-50.

13. Еремин А. Н., Метелица Д. И. 1986. Стабильность глюкозо-6-фосфат-дегидрогеназы и пероксидазы хрена в системах фермент-ПАВ-вода-гептан, моделирующих мембранные липид-белковые ансамбли . Биохимия 51(10): 1612-1623.

14. Зайдель А. Н. 1985 Погрешности измерений физических величин. JL: Наука.

15. Иваненков В. В., Коробцов Г. Н. 1976. Теплоустойчивость ацетилхолин-эстеразы и неспецифических эстераз в развитии гибридов морских ежей Strongylocentrotus droebachiensisи S. intermedius. Онтогенез 7(4): 341-347.

16. Ирлина И. С. 1960. Изменение теплоустойчивости некоторых свободножи-вущих простейших под влиянием предшествующего температурного режима. Цитология 2(2): 227-234.

17. Калинина JI. В. 1967. Наследственные изменения, вызываемые у амеб рентгеновским облучением. Цитология 9(12): 1543-1549.

18. Калинина JI. В. 1968. Наследуемые изменения у амеб, вызываемые действием актиномицина D. Цитология 10(12): 1589-1597.

19. Калинина JI. В., Горюнова JI. Б. 1975а. Изменения наследственных свойств амеб при микрургическом воздействии во время деления (метафаза ранняя анафаза). Цитология 17(4): 474-476.

20. Калинина Л. В., Горюнова Л.Б. 19756. Изменения наследственных свойств амеб при микрургическом воздействии во время деления (анафаза ранняя телофаза). Цитология 17(5): 580-582.

21. Камшилов М. М. 1960. О «системном» и «клеточном» приспособлении. Труды Мурманского морского биологического института 2(6): 226-235.

22. Ковалева Н. Е. 1968. Зависимость активности некоторых дегидрогеназ у Paramecium caudatum, адаптированных к пониженной и повышенной температуре, от возраста массовой культуры. Цитология 10(9): 1171-1179.

23. Константинова М. Ф. 1983. Влияние температуры выращивания на активность и теплоустойчивость карбоксилэстеразы озимой пшеницы Мироновская 808. Физиол. биохим. культ, растений 15(1): 28-32.

24. Константинова М. Ф., Григорьева Г. М. 1969. Теплоустойчивость ацетил-холинэстеразы двух видов лягушек. ДАН СССР 184(4): 972-974.

25. Кусакина А. А. 1961. Зависимость скорости снижения холинэстеразной активности гомогенатов печени травяной и озерной лягушки от темепературы. ДАН СССР 139(5): 1258-1261.

26. Кусакина А. А. 1962. О соответствии теплоустойчивости мышц и холинэ-стеразы температурным условиям обитания вида у некоторых рыб. Цитология 4(1): 68-71.

27. Кусакина А. А. 1965. Теплоустойчивость гемоглобина и холинэстеразы мышц и печени у представителей трех подвидов серой жабы (Bufo bufo L.). В сб.: Теплоустойчивость клеток животных. JI.: Наука: 208-211.

28. Кусакина А. А. 1967. Теплоустойчивость альдолазы и холинэстеразы у близких видов пойкилотермных животных. В сб.: Изменчивость теплоустойчивости клеток животных в онто- и филогенезе. JL: Наука: 142-148.

29. Кусакина А. А. 1973 . Сопряженные уровни теплоустойчивости альдолазы и холинэстеразы мышечных гомогенатов близких видов пойкилотермных животных. Экология (4): 89-93.

30. Кусакина А. А., Глушанкова М. А., Васянин С. И. 1971. Теплоустойчивость некоторых белков у представителей внутривидовых групп байкальских омулей и хариусовю. Цитология 13(8): 994-1004.

31. Лозина-Лозинский Л. К. 1961. Устойчивость к различным внешним агентам парамеций, адаптированных к жизни в горячем радиоактивном источнике. Цитология 3(2): 154-166.

32. Осипов Д. В. 1966. Теплоустойчивость клонов Paramecium caudatum, выделенных из разных природных популяций. Вестн. ЛГУ 3(1): 107-115.

33. Подлипаева Ю. И. 1987. Активность глюкозо-6-фосфатдегидрогена-зы в гомогенатах амеб. В сб.: Современные проблемы протозоологии. Л.: Наука: 45.

34. Подлипаева Ю. И. 1991. Активность и теплоустойчивость глюкозо-6фосфатдегидрогеназы (Г6ФД) в гомогенатах амеб. Цитология 33(5): 125. >j

35. Подлипаева Ю. И. 1992а. Активность и теплоустойчивость глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы у двух штаммов амеб Amoeba proteus. Цитология 34(3): 89-96.

36. Подлипаева Ю. И. 19926. Активность глюкозо-6-фосфатдегидроге-назы у амеб, культивируемых при различных температурах Цитология 34(4): 120.

37. Подлипаева Ю. И. 1994. Активность теплоустойчивость и электро-форетические формы глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы у амеб, культивируемых при разных температурах. Цитология 36(4): 378-383.

38. Полянский Ю. И. 1957. Температурные адаптации у инфузорий. I Зависимость теплоустойчивости Paramecium caudatum от температурных условий существования. Зоол. ж. 36(11): 1630-1646.

39. Полянский Ю. И. 1978. Формы фенотипической изменчивости простейших, их адаптивное значение и биологические механизмы. В кн.: Вопросы экологии простейших. JL: Наука: 5-25.

40. Полянский Ю. И., Орлова А. Ф. 1948. Об адаптивных изменениях и длительных модификациях у инфузорий Paramecium caudatum, вызванных действием высоких и низких температур. ДАН СССР 59(5): 1025-1028.

41. Полянский Ю. И., Суханова К. М., Сопина В. А. и Юдин A. JL 1967. Устойчивость Amoeba proteus к действию летальной температуры и этилового спирта. В сб.: Изменчивость теплоустойчивости клеток животных в онто- и филогенезе. М., Л., Наука: 43-62.

42. Правдина К. И. 1970. Теплоустойчивость водорастворимых эстераз пойки-лотермных животных. Цитология 12(12): 1541-1549.

43. Прехт Г. (Precht Н.). 1964. Обзор экспериментальных данных по адаптивным изменениям устойчивости. В кн.: Клетка и температура среды. М.; Л., Наука: 206-213.

44. Проссер К. Л. (Prosser К. L.). 1977. Сравнительная физиология животных. М.,Мир, т. 1.

45. Серавин Л. Н., Скобло И. И. и Осипов Д. В. 1965. Влияние температурной адаптации на теплоустойчивость ферментов инфузорий Paramecium cauda-tum. В сб.: Теплоустойчивость клеток животных. М., Л., Наука: 161-170.

46. Серов О. Л., Корочкин Л. И., Манченко Г.П. 1977. 1965. Генетика изофер-ментов. М.: Наука.

47. Соколовский В. В. 1984. Окислительно-восстановительные процессы в биохимическом механизме неспецифической реакции организма на действие экстремальных факторов внешней среды. В кн.: Антиоксиданты и адаптация Л.: 5-19.

48. Сопина В. А. 1968. Межклоновые различия по теплоустойчивости у амеб. Цитология 10(2): 207-217.

49. Сопина В. А. 1973. Эстеразы трех штаммов амеб. Цитология 15(10): 13081312.

50. Сопина В. А. 1976. Зависимость теплоустойчивости амеб от температуры их культивирования. Экология 4: 74-77.

51. Сопина В. А. 1978. Роль ядра и цитоплазмы в наследовании спектра эсте-раз у амеб. XIV Междунар. генетич. конгресс. М.: Наука: 25.

52. Сопина В. А. 1986. Теплоустойчивость клеток, суммарных эстераз и отдельных электрофоретических фракций эстераз у двух штаммов Amoeba proteus. Цитология 28(11): 1211-1221.

53. Сопина В. А. 1987. Спектр и теплоустойчивость отдельных электрофоре-тических форм тритонорастворимых эстераз у амеб, культивируемых при различных температурах. Цитология 29(3): 321-330.

54. Сопина В. А. 1989. Внутривидовой полиморфизм глюкозо-6-фосфатде-гидрогеназы у амеб Amoebaproteus. Цитология 31(2): 237-244.

55. Сопина В. А. 1991. Спектр электрофоретических форм глюкозо-6-фосфат-дегидрогеназы, 6-фосфоглюконатдегидрогеназы и глюкозо-дегидрогеназы у амеб, культивируемых при различных температурах. Цитология 33(7): 104109.

56. Сопина В. А. 1995а. Теплоустойчивость амеб и термостабильность их тритонорастворимых эстераз. Цитология 37(4): 339-344.

57. Сопина В. А. 19956. Эстеразы у Amoeba proteus. Цитология 37(4): 345-355.

58. Сопина В. А. 1997. Эстеразы у амеб Amoeba proteus, культивируемых при различных температурах. Цитология 39(9): 763-774.

59. Сопина В. А., ПодлипаеваЮ. И. 1984. Теплоустойчивость эстеразной активности гомогенатов амеб, культивируемых при различных температурах. Цитология 26(2): 143-149.

60. Сопина В. А., Подлипаева Ю. И. 1989. Ферменты фосфоглюконатно-го пути у амеб. Цитология 31(1): 85-96.

61. Сопина В. А., Юдин A. JI. 1993. Индуцируемые наследуемые изменения в спектрах электрофоретичеких форм глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы у амеб Генетика 29(3): 435-443.

62. Суханова К. М. 1959. Температурные адаптации у паразитических простейших амфибий. Цитология 1 (5): 587-600.

63. Суханова К. М. 1963. Исследование температурных адаптации и особенностей морфологии некоторых видов инфузорий Astomata из олигохет Восточного Мурмана. В сб.: Морфол. и физиол. простейших М., Л., Наука: 75-90.

64. Суханова К. М. 1968. Температурные адаптации у простейших. Л., Наука.

65. Ушаков Б. П. 1973. Лабильность и эволюционная консервативность теплоустойчивости организма, клеток и белков пойкилотермных животных при изменении температуры среды. Успехи соврем, биологии 76(2)(5): 264-278.

66. Ушаков Б. П., Кусакина А. А. 1960. О лабильности и консервативности адаптации клеток животных, обнаруживаемой на белковом уровне. Цитология 2(4): 428-441.

67. Ушаков Б. П., Виноградова А. Н., Глушанкова М. А., Кусакина А. А., Правдина К. И. 1966. Зависимость между уровнями теплоустойчивости разных белков у одного и того же вида в ряду пойкилотермных животных. Цитология 8(3): 358-364.

68. Фельдман Н. Л., Константинова М. Ф. 1979. Сравнение теплоустойчивости главной фракции растворимых белков и изозимов эстеразы из листьев двух видов Leucojum (Amaryllidaceae). Ботан. журнал 64(6): 890-894.

69. Фельдман Н. Л., Денько Е. И., Каменцева И. Е., Константинова М. Ф. 1981. Теплоустойчивость клеточных функций и белков двух сортов пшеницы с разной агробиологической характеристикой. Цитология 23(11): 1275-1283.

70. Фельдман Н. Л., Каменцева И. Е. 1982. Теплоустойчивость изоферментов малатдегидрогеназы из листьев огурца и дыни. Физиол. растений 29(6): 10371044.

71. Хлебович В. В. 1981. Акклимация животных организмов. Л.: Наука.

72. ХочачкаП., Сомеро Дж. 1977. Стратегия биохимической адаптации. М.: Мир.

73. ХочачкаП., Сомеро Дж. 1988. Биохимическая адаптация. М.:Мир.

74. Щербакова А. М. 1972. Теплоустойчивость глюкозо-6-фосфатде-гидрогеназы из листьев озимой пшеницы, закаленной теплом и холодом. ДАН СССР 205(4): 993-997.

75. Юдин А. Л. 1975. Амеба (Amoeba). В кн.: Объекты биологии развития, М.: Наука:5-12.

76. Юдин А. Л. 1979. Механизмы дестабилизации наследственных признаков у амеб. II. Наследуемые изменения, индуцированные некоторыми антибиотиками. Acta protozool. 18(4): 571-579.

77. Юдин A. JI. 1982. Ядерно-цитоплазматические взаимоотношения и клеточная наследственность у амеб. JL: Наука.

78. Alahiotis S., Miller S., Berger E. 1977. Natural selection at the GDH locus in Drosophila. Nature 269: 144-145.

79. Andersen K. A., Britigan В. E., Wilson M. E. 1996. Short report regulation of inducible heat shock protein 70 genes in Leishmania chagasi. Amer. J. Tropic. Med. Hyg. 54(5): 471-474.

80. Argos P., Rossman M. G., Grau U. M., Zuber H., Frank G., Tratschin J. D. 1979 Thermal stability and protein structure. Biochemistry 18: 5698-5703.

81. Baldwin E. 1970. An introduction to comparative biochemistry. Cambridge, Cambridge University Press.

82. Baldwin J., Hochachka P. W. 1971. Functional significance of isoenzymes in thermal acclimatization: Acetylcholinesterase from trout brain. Biochem. J. 116: 883-887.

83. Bangs J. D., Uyetake L., Brickman M.J., Balber A E., Boothroyd J. C. 1993. Molecular cloning and cell localization of BiP homologue in Trypanosoma brucei. J. Cell Sci. 105: 1101-1113.

84. Beutler E., Morrison M. 1967. Localization and characteristics of hexose-6-phosphate dehydrogenase (glucose dehydrogenase). J. Biol. Chem. 242: 52895293.

85. Bianco A. E., Favaloro J. M., Burkot T. R., Culvenor J. G., Crewther P. E., Brown G. V., Anders R. F., Coppel R. L., Kemp D. J. 1986. A repetitive antigen of

86. Plasmodium falciparum teat is homologous to heat shock protein 70 of Drosophila melanogaster. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83: 8713-8717.

87. Blanquet R. S. 1972. Temperature acclimation in the medusa, Chrysaora quinquec-irrha. Comp. Biochem. Physiol. 43B: 717-723.

88. Budin K., Philippe H. 1998. New insights into the phylogeny of eukaryotes based on ciliate Hsp70 sequences. Mol. Bio. Evol. 15(8): 943-956.

89. Campbell C. M., Davies P. S. 1978. Temperature acclimation in the teleost Blennius folis: changes in enzyme activity and cell structure. Comp. Biochem. Physiol. 618: 165-167.

90. Ciardiello M. A., Camardella L., Carratore V., Diprisco G. 1997. Enzymes in antarctic fish glucose-6-phosphate dehydrogenase and glutamate dehydrogenase. Comp. Biochem. Physiol. 118A(4): 1031-1036.

91. Demidov O. N., Tyrenko V. V., Svistov A. S., Komarova Ye.Yu., Karpishenko A. I., Margulis B. A., Shevchenko Yu. L. 1999. Heat shock proteins in cardiosur-gery patients. Europ. J. Cardio-thor. Surg. 16: 444-449.

92. Deutch J. 1983. Glucose-6-phosphate dehydrogenase. Meth. Enzym. Anal. 3: 190-198.

93. Drzymalla C., Schroda M., Beck C.F. 1996. Light-inducible gene HSP70B encodes a chloroplast-localized heat shock protein in Chlamydomonas reinhardtii. Plant Mol. Biol. 31(6): 1185-1194.

94. Dziewulska-Szwajkowska D., Lozinska-Gabska M., Dzugai A. 1997. Rana esculenta L. liver FRU-1,6-P(2)ase and G-6-Pase activity and FRU-2,6-P-2concentration after acclimation at 5 and 25 °C. Comp. Biochem. Physiol. 118A(3): 745-751.

95. Eggleston L. V., Krebbs H. A. 1974. Regulation of the pentose-phosphate cycle. Biochem. J. 138: 425-435.

96. Ekberg D. R. 1962. Anaerobic and aerobic metabolism in gills of the crucian carp adapted to high and low temperatures. Comp. Biochem. Physiol. 5: 123-128.

97. Fan J. Y., Davidson E. A. 1996. Molecular cloning and antigenic mapping of heat-shock protein 70 from the malaria species Plasmodium berghei. Amer. J. Tropic. Med. Hyg. 55(5): 570-576.

98. Feller G., Arpigny J. L., Gerday C. 1997. Molecular adaptations of enzymes from psychrophilic organisms. Comp. Biochem. Physiol. 118A(3): 495-499.

99. Flickinger Ch. J. 1977. Relationships between membranous organelles in amoebae studied by electron microscopic cytochemical staining. Cell Tissue Res. 180: 139-154.

100. Frandsen J. C. 1976. Partial purification and some properties of glucoses-phosphate dehydrogenase from Eimeria steidai. Comp. Biochem. Physiol. 54B: 537-541.

101. Fudge D. S., Stevens E. D., Ballantyne J. S. 1997. Enzyme adaptation along a heterothermic tissue the visceral retia mirabilia of the blufin tuna. Amer. Journ. Physiol. 41(6): R1834-R1840.

102. Garcia-Alfonso C., Repetto G., Sanz P., Repetto M., Lopez-Barea J. 1998.

103. Direct determination of gluthatione S-transferase and glucose-6-phosphate dehydrogenase activities in cells cultured in microtitre plates as biomarkers for oxidative stress. ATLA 26(3): 321-330.

104. Germot A., Philippe H. 1999. Critical analysis of eukaryotic phylogeny: a case study based on the HSP70 family. J. Eukaryot. Microbiol. 46(2): 116-124.

105. Ghosh D. K., Honigberg B. M. 1976. Activities of glucose-6-phosphate, 6-phosphogluconate and isocitrate dehydrogenases from Leishmania donovani cultivated at 25 and 37 C. J. Protozool., 23: 450-455.

106. Gomori G. 1953. Human esterases. J. lab. clin. med., 42: 335-453.

107. Graves J. E., Somero G. N. 1982. Electrophoretic and functional enzymic evolution in four species of eastern Pacific barracudas from different thermal environments. Evolution 36: 97-106.

108. Grigor M. 1984. Multiple molecular forms of rat mammary glucose-6-phosphate dehydrogenase: proposed role in turnover of the enzyme. Arch. Biochem. Biophys. 229: 612-622.

109. Hallberg E. M., Hallberg R. L. 1996. Translational thermotolerance in Saccharomyces cerevisiae. Cell Stress and Chaperones 1(1): 70-77.

110. Hand S. C., Somero G. N. 1983. Phosphofructokinase of the hibernator, Citellus beecheyr. Temperature and pH regulation of activity via influences on the tetramer-dimer equilibrium. Physiol. Zool. 56: 380-388.

111. Harman D. 1992. Free radical theory of aging. Mutat. Res. 275: 257-266.

112. Hazel J. 1969. The effect of thermal acclimation upon brain acetylcholinesterase activity of Carassius auratus and Fundulus heteroclitus. Life Sci. 8: 775-784.

113. Hilker D. M., White A. G. 1959. Some aspects of the carbohydrate metabolism of Entamoeba histolytica. Exp. Parasitol. 8: 539-548.

114. Hut R. P., Healy B., Vossbrinck C. R., Canning E. U., Embley T. M. 1997. A mitochondrial Hsp70 orthologue in Vairimorpha necatrix. molecular evidence that microsporidia once contained mitochondria. Curr. Biol. 7(12): 995-998.

115. HochachkaP. W. 1998. Mechanism and evolution of hypoxia-tolerance in humans. J. Exp. Biol. 201(8): 1243-1254.

116. Hochachka P. W. and Hayes F. R. 1962. The effect of temperature acclimation on pathways of glucose metabolism in the trout. Can. J. Zool. 40: 261-270.

117. HochachakaP. W., Clayton-Hochachka B. 1973. Glucose-6-phosphate dehydrogenase and thermal acclimation in the mullet fish. Mar. Biol. 18: 251-259.

118. Hubel A., Krobitsch S., Horant A., Clos J. 1997. Leishmania majorHSP100 is required chiefly in the mammalian stage of the parasite. Mol. Cell Biol. 17(10): 5987-5995.

119. Johnston I. A., Walesby N. J., Davison W., Goldspink G. 1975. Temperature adaptation in myosine of Antarctic fish. Nature 254: 74-75.

120. Jurss K., Bittorf Th., Volker Th and Waske R. 1987. Effects of temperature, food deprivation and salinity on growth, RNA/DNA ratio and certain enzyme activities in rainbow trout (SaJmo gairdneriRichardson). Comp. Biochem. Physiol. 87B: 241-253.

121. Kalinina L. V., Khrebtukova I.A., Podgornaya O. L., Wasik A., Sikora J. 1988. Heat shock proteins in Amoeba. 1. Effect of high temperature on Amoeba proteus and Amoeba borokensis. Europ. J. Protistol. 24: 64-68.

122. Katiyar S. S., Tapas K. D. 1990. Solubilization and activation of yeast glucose-6-phosphate dehydrogenase in reverse micelles of mixed surfactants in organic solvents. Biochem. Int. 20: 1127-1134.

123. Konkel M. E., Kim B. J., Klena J. D., Young C. R., Ziprin R. 1998. Characterization of the thermal stress response of Campylobacter jejuni. Infection and Immunity 66(8): 3666-3672.

124. Korhonen I. A., Lagerspetz K. Y. H. 1996. Heat shock response and thermal acclimation in Asellus aquaticus. J. Therm. Biol. 21(1): 49-56.

125. Kornberg A., Horecker B. L. 1955. Assay of glucose-6-phosphate dehydrogenase and 6-phosphogluconate dehydrogenase. Methods in enzymology. New York: Acad. Press 1: 323-325.

126. Marek M. 1982. Influence of cooling on the profile of proteins and esterases in tissues of some endopterygote insects. Comp. Biochem. Physiol. 73B: 951-956.

127. Margulis B. A., Welsh M. 1991. Isolation of hsp70-binding proteins from bovine muscle. Biochem. Biophys. Res. Com. 178(1): 1-7.

128. Margulis B. A., Nacharov P. V., Tsvetkova O. L., Welsh M., Kinev A. V. 1991. The characterization and use of different antibodies against the HSP70 major heat shock protein family for the development of an immunoassay. Electrophoresis 12(9): 670-673.

129. MatsuokaN., Hori S. 1980. Immunological relatedness of hexose-6-phosphate dehydrogenase and glucose-6-phosphate dehydrogenase in echinoderms. Comp. Biochem. Physiol. 65B: 191-198.

130. McMullin Th. W., Hallberg R. L. 1987. A normal mitochondrial protein is selectively synthesized and accumulated during heat shock in Tetrahymena thermophila. Mol. Cell Biol. 7(12): 4414-4423.

131. Mg-Naughton S. J. 1974. Natural selection at the enzyme level. Amer. Natur. 108: 616-625.

132. Ord M. J. 1973. Chemical mutagenesis. In: The biology of Amoeba. N.Y., London, Acad. Press: 349-369.

133. Page F. C., Kalinina L. V. 1984. Amoeba leningradensis n. sp. (Amoebidae): a taxonomic study incorporating morphological and physiological aspects. Arch. Protistenkd. 128: 37-53/

134. Podlipaeva J. I. 1992. The activity and thermoresistance of glucose-6-phosphatedehydrogenase (G6PD) in Amoeba proteus. Proc. 1 Europ. Congress of Protozoology, Reading, England: 30.

135. Podlipaeva Yu. I. 1997. Hereditary and environmentally determined changes in some characteristics of glucose-6-phosphatedehydrogenase in Amoeba proteus (Pallas, 1766), Leidy, 1878. Доповад Нацюнально! Ака-демП Наук УкраГни. : 184-188.

136. Podlipaeva Yu. I., Kinev A. V. 1996. The major inducible heat shock protein of 70 kDa in Amoeba proteus. Molecular Biology of the Cell 7:1038.

137. Podlipaeva Yu. Gromov D. 1998. 70 kDa heat shock protein content in Amoeba proteus cells. Molecular Biology of the Cell. 9: 129a.

138. Peyretaillade E., Broussole V., Peyret P., Metenier G., Gouy M., Vivares C. P. 1998. Microsporidia, amitochondrial protists, possess a 70-kDa heat shock protein gene of mitochondrial evolutionary origin. Mol. Biol. Evol. 15(6): 683-689.

139. Pierce V. A., Crawford D. L. 1997. Phylogenetic analysis of thermal acclimation of the glycolytic enzymes in the genus Fundulus. Physiol. Zoology 70(6): 597-609.

140. Place A. R., Powers D. A. 1979. Genetic variation and relative catalytic efficiencies: Lactate dehydrogenase В allozymes of Fundulus heteroclitus. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 76: 2354-2358.

141. PollaB. S. 1991. Heat shock proteins in host-parasite interactions. Parasitology Today 7(3): A38-A41.

142. Prescott D. M., Carrier R.F. 1964. Experimental procedures and cultural methods for Euplotes eurystomus and Amoebaproteus. In: Methods in cell physiology. New York; London: Acad. Press 1: 85-95.

143. Requena J. M., Jimenez-Ruiz A., Soto M., Assiego R., Santaren J. F., Lopez M., Patarroyo E., Alonso C. 1992. Regulation of hsp70 expression in Trypanosoma cruziby temperature and growth phase. Mol. Biochem. Parasitol. 53: 201-211.

144. Requena J. M., Lopez M. C., Jimenez-Ruiz A., de la Torre J. C., Alonso C. 1988. A head-to-tail tandem organization of the hsp70 genes in Trypanosoma cruzi. Nucleic acid Research 16(4): 1393-1405.

145. Requena J. M., Soto M., Guzman F., Maekelt ANoya O., Patarroyo M. E. A. 1993. Mapping of antigenic determinants of the T. craz/hsp70 in chagasic and healthy individuals. Mol. Immunol. 30: 1115-1121.

146. Sanchez-Moreno M., Rodriguez-Cabezas N., Feraandez-Becerra C., Mesavalle C., Osuna A. 1997. Induction of stress proteins in the plant trypanosome Phytomo-nas characias. Parasitol. Res. 83(8): 771-775.

147. Schmukler M. 1970. The heterogeneity and molecular transformation of glucose-6-phosphate dehydrogenase of the rat. Biochim. Biophys. Acta 214: 309317.

148. Seddon W. L. 1997. Mechanisms of temperature acclimation in the channel catfish Ictaluruspunctatus isoenzymes and quantitative changes. Comp. Biochem. Physiol. 118(3): 813-820.

149. Shaklee J. B., Christiansen J. A., Sidell B. D., Prosser C. L., Whitt G. S. 1977.

150. Molecular aspects of temperature acclimation in fish: Contributions of changes in enzyme activities and isozyme patterns to metabolic reorganization in the green sunfish. J. Exp. Zool. 201: 1-20.

151. Silva N. M., Gazzinelli R. T., Silva D. A., Ferro E. A., Kasper L. H., Mineo J. R. 1998. Expression of Toxoplasma gondii-spQcific heat shock protein 70 during in vivo conversion of bradyzoites to tachyzoites. Infect. Immun. 66(8): 3959-3963.

152. Singleton R., Jr., Middaugh C. R., MacElroy R. D. 1977. Comparison of proteins from thermophilic and nonthermophilic sources in terms of structural parameters inferred from amino acid composition. Int. J. Peptide Protein Res. 10: 39-50.

153. Sopina V. A. 1976. The multiplication rate of amoebae related to the cultivation temperature. J. Thermal Biology 1: 199-204,

154. Sopina V. A. 1989.Polymorphism of glucose-6-phosphate dehydrogenase in free-living Amoebidae. Arch. Protistenkd. 137: 131-141

155. Sopina V. A. 1991. The electrophoretic patterns of glucose-6-phosphate, 6-phosphogluconate and glucose dehydrogenases in Amoebaproteus (Pallas, 1766; Leidy, 1878), cultured at different temperatures. Comp. Biochem. Physiol. 100B: 605-615.

156. Steele M., Young W., Childs B. 1968. Glucose-6-phosphate dehydrogenase in Drosophila melanogaster: starch gel electrophoretic variation due to molecular instability. Biochem. Genet. 2: 159-175.

157. Sustr V., Block W. 1998. Temperature dependence and acclimatory response of amylase in the high arctic springtail Onychiurus arcticus (Tullberg) compared with the temperate species Protaphorura armata (Tullberg). J. Insect Physiol. 44(10): 991-999.

158. Swezey R. R., Somero G. N. 1982. Polymerization thermodinamics and structural stabilities of skeletal muscle actins from vertebrates adapted to different temperatures and hydrostatic pressures. Biochemistry 21: 4496-4503.

159. Ulmasov Kh. A., Shammakov S., Karaev K., Evgen'ev M. 1992. Heat shock proteins and thermoresistance in lizards. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89: 16661670.

160. Ushakov B. P. 1964. Thermostability of cells and proteins of poikilotherms and its significance in speciation. Physiol. Revs. 44(3): 518-560.

161. Van der Ploeg L., Giannini S., Cantor Ch. 1985. Heat shock genes: regulatory role for differentiation in parasitic protozoa. Science 228: 1443-1446.

162. Wallace G. R., Ball A. E„ MacFarlane J., el Safi S. H., Miles M. A., Kelly J. M. 1992. Mapping of a visceral leishmaniasis-specific immunodominant B-cell epitope of Leishmania donovaniHsplO. Infection and Immunity 60: 2688-2693.

163. Ward A. P. 1985. Electrophoretic assessment of taxonomic relationships within the genus Acanthamoeba (Protozoa, Amoebida). Arch. Protistenk. 130: 329-342.

164. Weiss L. M., Ma Y. F., Takvorian P. M., Tanowitz H. B., Wittner M. 1998. Bradyzoite development in Toxoplasma gondii and the hsp70 stress response. Infect. Immun. 66(7): 3295-3302.138

165. Welch W. J., Feramisco J. R. 1985. Rapid purification of mammalian 70.000-dalton stress proteins: affinity of the proteins for nucleotids. Mol. Cell Biol. 5: 1226-1229.

166. Wilson F. R., Somero G. N., Prosser C. L. 1974. Temperature metabolism relations of two species of Sebastes from different thermal environments. Comp. Biochem. Physiol. 47B: 485-491.

167. Yamauchi T., Stegeman J. J., Goldberg E. 1975. The effects of starvation and temperature acclimation on pentose phosphate pathway dehydrogenases in brook trout liver. Arch. Biochem. Biophys. 167: 13-22.

168. Zavodsky P., Kardos J., Svingor A., Petsko G. A. 1998. Adjustment of conformational flexibility is a key event in the thermal adaptation of proteins. Proc. Natl Acad. Sci. USA 95(13): 7406-7411.

169. ZietaraM. S., Skorowski E. F. 1995. Thermostability of lactate dehydrogenase LDH-A(4) isoenzyme effect of heat shock protein DnaK on the enzyme activity. Int. J. Biochem. Cell Biol. 27(11): 1169-1174.

170. Я признательна Сергею Орестовичу Скарлато за ценные советы и всем сотрудникам Лаборатории цитологии одноклеточных организмов, дружеское отношение и поддержку которых высоко ценю.

171. Хочу с благодарностью вспомнить наших учителей Юрия Ивановича Полянского и Игоря Борисовича Райкова.