Адаптационная защита сосудистой системы при гиперпродукции оксида азота тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.16, кандидат биологических наук Покидышев, Дмитрий Александрович

• Покидышев, Дмитрий Александрович
• кандидат биологических наук
• 1999

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Покидышев, Дмитрий Александрович

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОКСИД АЗОТА В СЕРДЕЧНО-СОСУДИСТОЙ СИСТЕМЕ: РОЛЬ В ПОВРЕЖДЕНИИ И ЗАЩИТЕ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)

1.1. Природа эндотелиального фактора расслабления

1.2. Биосинтез оксида азота

1.3. Регуляция активности ЫО-синтазы в организме

1.3.1. Регуляция на уровне кофакторов

1.3.2. Регуляция на уровне транскрипции

1.3.3. Регуляция на посттранскрипционном уровне

1.3.4. Регуляция по механизму отрицательной

обратной связи

1.4. Ингибиторы синтеза оксида азота

1.5. Доноры оксида азота

1.6. Физиологическое действие N0 в сердечнососудистой системе

1.6.1. Недостаточная продукция N0

1.6.2. Гиперпродукция N0

1.7. Адаптационная защита сердечно-сосудистой

системы

Глава 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Тепловой шок

2.2. Измерение артериального давления

2.3. Введение ингибитора ЫО-синтазы

2.4. Введение карбахолина

2.5. Адаптация к иммобилизационному стрессу

2.6. Введение донора N0

2.7. Введение циклогексимида

2.8. ЭПР-анализ

2.9. Эксперименты на изолированных сосудах

2.10. Статистическая обработка данных

Глава 3. ЫО-ЗАВИСИМЫЙ МЕХАНИЗМ ОСТРОЙ ГИПОТЕНЗИИ, ВЫЗВАННОЙ ТЕПЛОВЫМ ШОКОМ

(РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ)

3.1. Влияние теплового шока на продукцию N0 и сосудистые реакции

3.2. Механизм гиперпродукции N0 при тепловом шоке и

возможность ее предупреждения с помощью

ингибитора ЫО-синтазы

Глава 4. ЗАЩИТНЫЕ ЭФФЕКТЫ АДАПТАЦИИ К СТРЕССОРНЫМ ВОЗДЕЙСТВИЯМ ПРИ ГИПЕРПРОДУКЦИИ N0 (РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ)

Глава 5. РОЛЬ N0 В ЗАЩИТНЫХ ЭФФЕКТАХ АДАПТАЦИИ К СТРЕССУ ПРИ ТЕПЛОВОМ ШОКЕ (РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ)

5.1. Влияние ингибитора Г\Ю-синтазы на защитные эффекты адаптации

5.2. Выбор дозы донора N0 на основе изучения его гипотензивного действия и тканевого распределения

5.3. Воспроизведение защитных эффектов адаптации с помощью донора N0

Глава 6. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

ВЫВОДЫ

ЛИТЕРАТУРА

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Адаптационная защита сосудистой системы при гиперпродукции оксида азота»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность исследования. Оксид азота (N0) является наиболее мощным из всех известных эндогенных вазодилататоров и играет ключевую роль в поддержании нормального тонуса сосудов в физиологических условиях. Гиперпродукция оксида азота (N0) составляет важное звено патогенеза многих тяжелых состояний, сопровождающихся острой гипотензией и снижением реактивности кровеносных сосудов на констрикторные стимулы. В настоящее время доказана роль гиперпродукции N0 в развитии септического (164), анафилактического (110), кардиогенного (175), теплового (8) и других видов шока. Избыток N0, вырабатывающийся в организме, вызывает чрезмерное усиление эндотелий-зависимого расслабления гладкой мышцы сосудов и эндотелий-зависимого подавления ее сократительных ответов (8, 164).

Поиск путей предупреждения и устранения гиперпродукции N0 в последнее время привлекает все большее внимание исследователей. Единственный существующий пока подход к решению этой проблемы состоит в блокаде продукции N0 с помощью ингибиторов ЫО-синтазы. Однако, его применение имеет серьезные ограничения. Во-первых, ни один из существующих ингибиторов ЫО-синтазы не обладает достаточной избирательностью и поэтому блокирует не только индуцибельную ЫО-синтазу, которая, по-видимому, вносит основной вклад в гиперпродукцию N0 при шоках, но и другую изоформу - конститутивную ЫО-синтазу, работа которой необходима для предупреждения гипертонии, вазоспазмов, тромбозов и т.д. (6, 123). Во-вторых, ингибиторы ЫО-синтазы

обладают серьезными побочными эффектами, в частности, оказывают прямое кардиотоксическое действие (123). Поэтому проблема селективного ингибирования индуцибельной N0-синтазы без ингибирования конститутивной в условиях гиперпродукции N0 приобретает особую актуальность.

Наиболее перспективный подход к коррекции гиперпродукции N0 может состоять в применении нефармакологических методов, не имеющих таких ограничений, как использование фармакологических препаратов. Одним из таких методов является дозированная адаптация организма к факторам среды, которая является модулятором ЫО-продуцирующих систем организма (6) и одновременно давно и широко применяется в эксперименте и клинике для профилактики и лечения различных заболеваний, и, в первую очередь, сердечно-сосудистых (105). В предыдущих исследованиях было установлено, что с помощью адаптации к гипобарической гипоксии (105), коротким неповреждающим стрессам (9) или к физической нагрузке (13) можно успешно предупредить нарушения сосудистого тонуса и тяжелую гипотензию при остром экспериментальном инфаркте миокарда. Однако, связь этих защитных эффектов с коррекцией гиперпродукции N0 не доказана. Следовательно, вопрос о возможности применения адаптационной защиты организма в условиях избыточного синтеза N0 остается открытым.

Цель и задачи исследования. В соответствии с вышеизложенным, цель настоящей работы состояла в изучении возможности и механизмов предупреждения или ограничения гиперпродукции N0 и связанных с ней нарушений функции сосудистой системы с помощью дозированной адаптации к факторам среды.

В рамках поставленной цели решались следующие задачи:

1. Сопоставить вклад индуцибельной и конститутивной изоформ ЫО-синтазы в в повреждения сосудистой системы, вызванные гиперпродукцией N0 при тепловом шоке (ТШ) и оценить возможность предупреждения этих повреждений путем избирательного ингибирования изоформ КЮ-синтазы.

2. Изучить возможность применения предварительной адаптации к стрессорным воздействиям для предупреждения острой гипотензии и нарушений сосудистых реакций, вызванных гиперпродукцией N0 при ТШ.

3. Изучить влияние адаптации к стрессорным воздействиям на продукцию N0 в организме и оценить возможность применения такой адаптации для предупреждения гиперпродукции N0.

4.Оценить роль N0 в адаптационной защите сосудистой системы и изучить возможность воспроизведения защитных эффектов адаптации к стрессорным воздействиям с помощью донора N0.

Научная новизна исследования определяется следующими основными результатами.

Впервые установлено, что при ТШ гиперпродукция N0 обусловлена главным образом активностью индуцибельной и в меньшей степени - активностью конститутивной ЫО-синтазы. На основе этих данных продемонстрирована принципиальная возможность защиты сосудистой системы от повреждения при ТШ путем преимущественного ингибирования индуцибельной

ЫО-синтазы с помощью невазоактивных доз неселективного ингибитора 1\Ю-синтазы 1\Г,л-нитро-1_-аргинина.

Впервые показано, что адаптация организма к мягким стрессорным воздействиям эффективно предупреждает чрезмерное угнетение эндотелием сократительных реакций сосудов, избыточное усиление эндотелийзависимого расслабления, падение АД, а также снижает смертность животных при ТШ с 57 до 8%. Адаптация сама по себе несколько увеличивает уровень тканевой продукции N0, но, в то же время, у адаптированных животных ТШ не вызывает дополнительного прироста продукции N0. Это означает, что адаптация к стрессорным воздействиям предупреждает гиперпродукцию N0. Защитный эффект адаптации был более выраженным, чем защитный эффект ингибитора ЫО-синтазы, что указывает на преимущество нефармакологического способа защиты организма над фармакологическим.

Впервые показано, что адаптация к стрессорным воздействиям, проводимая на фоне постоянного введения малых доз ингибитора ЫО-синтазы не приводит к формированию защиты сосудистой системы от повреждений, связанных с гиперпродукцией N0. Тем самым доказана роль активации синтеза N0 в развитии адаптационной защиты сосудистой системы.

Впервые показана возможность воспроизведения защитных эффектов адаптации и ограничения гиперпродукции N0 путем предварительного введения животным донора N0 ДНКЖ. Это подтверждает гипотезу о том, что предупреждение гиперпродукции N0 на фоне адаптационного повышения мощности ЫО-синтезирующих систем может быть обусловлено

ингибированием ЫО-синтазы по механизму отрицательной обратной связи.

Теоретическое значение работы определяется тем, что в ней впервые выдвинуто и обосновано положение о ведущей роли повышения мощности ЫО-синтезирующих систем в формировании адаптационной защиты сосудистой системы от повреждений, вызванных гиперпродукцией N0.

Практическое значение работы определяется тем, что в ней продемонстрированы и сопоставлены возможности фармакологического и нефармакологического предупреждения нарушений сосудистого тонуса и острой гипотензии, вызванных шоковой гиперпродукцией N0.

Положения, выносимые на защиту.

1. Гиперпродукция N0 при тепловом шоке (ТШ) обусловлена главным образом активностью индуцибельной и в меньшей степени - активностью конститутивной ЫО-синтазы.

2. Адаптация организма к мягким стрессорным воздействиям эффективно предупреждает гиперпродукцию N0 и сопутствующие нарушения сосудистых реакций.

3. Важную роль в предупреждении гиперпродукции N0 играет адаптационное повышение мощности ЫО-синтезирующих систем

Апробация работы. Основные результаты проведенных исследований были представлены на международном симпозиуме "Кислород и свободные радикалы" (Беларусь, Гродно, 1996), V Всемирном конгрессе Международного общества адаптационной медицины (Фрамингам, США, 1997), II Международном конгрессе "N0 в сердечно-сосудистой регуляции и интенсивной терапии" (Стокгольм, Швеция, 1997),

XXXII! Международном конгрессе по физиологическим наукам (Санкт-Петербург, 1997), Международной конференции "Роль монооксида азота в процессах жизнедеятельности" (Беларусь, Минск, 1998), Международном симпозиуме "Оксид азота: от молекулярного уровня до клинического применения" (Словакия, Братислава, 1999).

Глава 1. ОКСИД АЗОТА В СЕРДЕЧНО-СОСУДИСТОЙ СИСТЕМЕ: РОЛЬ В ПОВРЕЖДЕНИИ И ЗАЩИТЕ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)

Оксид азота (N0) - небольшая, относительно нестабильная, потенциально токсичная молекула, представляющая собой двухатомный свободный радикал, стала в последние несколько лет одним из наиболее изучаемых и популярных химических соединений в биохимии и физиологии. В организме животных и человека N0 часто выполняет роль биологического мессенджера в различных физиологических процессах. N0 принимает участие в обеспечении передачи нервного импульса, свертываемости крови, регуляции артериального давления, клеточной пролиферации, а в иммунной системе NO способствует уничтожению опухолевых и бактериальных клеток (113).

N0 представляет собой принципиально новый тип биологического мессенджера, поскольку его транспортировка не зависит от специфических переносчиков и каналов; вместо этого NO, по-видимому, свободно диффундирует по всем направлениям от того места, где эта молекула образуется. Таким образом, синтез N0 является ключевым процессом в регуляции его продукции. Благодаря малым размерам молекулы N0 и ее хорошей диффузионной способности, активность N0 определяется главным образом его химическими свойствами. (158).

Один из важных физиологических процессов, который происходит с участием N0, - это регуляция артериального давления. На протяжении почти столетия врачи использовали нитроглицерин для расслабления сосудов и увеличения скорости кровотока, особенно при лечении стенокардии, связанной с сердечно-сосудистыми заболеваниями. Сравнительно недавно

было установлено, что физиологический эффект нитроглицерина опосредован N0.

Развитие представления о роли эндогенно синтезируемого N0 в регуляции тонуса сосудов было основано на работах РигсИдоК и 2а\/уас18к1 (58) которые впервые обнаружили, что расслабление предварительно сокращенной аорты и других артерий кролика под действием ацетилхолина и других агонистов мускариновых рецепторов зависит от присутствия эндотелиальных клеток. Они показали, что ацетилхолин действует на рецепторы клеток эндотелия и приводит к образованию мелких молекул, которые мигрируют в прилежащий слой гладкомышечных клеток, вызывая их расслабление. Открытие РигсИдой и га\л/ас15к1 участия эндотелия в релаксации сосудов и выделения ими мощного сосудорасширяющего фактора (эндотелиального фактора расслабления, ЭФР) явилось одним из наиболее важных этапов в развитии физиологии сосудов. Как показали дальнейшие исследования, базальный синтез и выделение ЭФР играет важную роль в поддержании дилататорного тонуса артериальных (и в гораздо меньшей степени - венозных) сосудов (170). Снижение синтеза ЭФР или ускорение его распада приводит к преобладанию констрикторных сосудистых реакций над дилататорными вплоть до развития вазоспазма (174).

1.1. Природа эндотелиального фактора расслабления

В течение ряда лет многие исследователи занимались выяснением природы ЭФР. Это была достаточно сложная задача, так как время жизни ЭФР составляет, по разным оценкам, от 4 до 50 секунд (43, 55, 64, 66, 145). В ходе выяснения природы ЭФР выдвигались предположения, что ЭФР может быть альдегидом,

кетоном или лактоном (64). Позже большое внимание как гипотетический медиатор эндотелийзависимого расслабления привлекла арахидоновая кислота и ее метаболиты. Считалось, что эндотелиальные клетки метаболизируют эндогенную арахидоновую кислоту по липооксигеназному пути (187). Оказалось, однако, что липиды, в том числе и арахидоновая кислота, не являются предшественниками ЭФР, а скорее способствуют его синтезу (146 ). 1986 году Furchgott, исходя из сходства фармакологического поведения ЭФР и N0, генерируемого при добавлении в физиологической раствор NaN02, впервые предположил, что ЭФР представляет собой N0 (58). Одновременно, независимо от Furchgott, такое же предположение выдвинули Ignarro с соавторами (78). ЭФР, высвобождаемый из эндотелия, по своим химическим свойствам оказался идентичен N0. Путем определения хемилюминесцентных продуктов реакции с озоном было показано, что количество N0, высвобождающегося из эндотелиальных клеток, достаточно для того, чтобы вызвать расслабление сосудистой гладкой мышцы. При этом была обнаружена корреляция между количеством N0, измеренным путем биоанализа и методом хемилюминесценции (130). Позднее была продемонстрирована идентичность ЭФР и N0 в их действии на агрегацию тромбоцитов (137) и расслабляющем действии на полоски сосудов (130).. На идентичность ЭФР и N0 указывало также то, что они оба расслабляют гладкую мышцу сосуда через стимуляцию гуанилатциклазы (27, 77, 120, 130, 150), имеют сходное время полужизни (77, 130) и образуют одинаковые нитратные и нитритные продукты в реакции с супероксидным радикалом (146).

В последнее время идентичность ЭФР и N0 стала подвергаться сомнениям. Во-первых: ЭФР - намного более мощный и длительно действующий вазодилататор, чем NO (120), во-вторых, ЭФР, в отличие от N0, не вызывает расслабления несосудистых гладких мышц (77, 152), в третьих, ЭФР не испаряется из водных растворов и не захватывается некоторыми смолами (120). Поскольку N0 оказывает как аутокринное, так и паракринное действие, т.е. действует не только в тех клетках, в которых синтезируется, но и в соседних, стало очевидно, что N0 может транспортироваться на значительные расстояния (91).

По всем вышеперечисленным причинам можно предположить, что N0 каким-то образом защищен от инактивации и, следовательно, ЭФР представляет собой лабильное нитрозосоединение, способное высвобождать N0 при взаимодействии с клеткой-мишенью.

Наиболее вероятными кандидатами на роль ЭФР в настоящее время считаются S-нитрозотиолы. и динитрозильные комплексы железа (ДНКЖ) с цистеином или глютатионом в качестве тиоловых лигандов (1, 157, 158). По-видимому, S-нитрозотиолы выступают в качестве основной транспортной формы N0, переносящей его между клетками. В дальнейшем, попадая в область с повышенным содержанием негемового железа и тиолов, S-нитрозотиолы инициируют образование ДНКЖ, распад которых приводит к высвобождению N0. Этот комплекс парамагнитен и обладает характерным ЭПР-сигналом. S-нитрозотиолы и ДНКЖ не только функционируют как фактор расслабления сосудов, но и выступают в качестве универсальных форм стабилизации N0 и образуют физиологически активное депо N0 (175, 176).

В то время, как S-нитрозотиолы служат главным образом для транспортировки N0, его запасание происходит в основном в виде ДНКЖ, которые существуют в двух формах: связанной с белками через их SH-группы - высокомолекулярный ДНКЖ и содержащей низкомолекулярные тиоловые лиганды - цистеин или восстановленный глютатион - низкомолекулярный ДНКЖ. Белковые комплексы более стабильны, и равновесие между этими двумя формами сильно сдвинуто в их сторону. Соответственно, N0 либо транзиторно запасается в форме макромолекулярного комплекса, либо высвобождается в форме низкомолекулярного комплекса, который предположительно, идентичен ЭФР. Действительно, было показано, что содержащие N0 низкомолекулярные комплексы с цистеином в качестве тиолового лиганда, обладают биологической активностью и стабильностью, сходными с ЭФР (144, 176).

Независимо от того, в какой форме N0 стабилизируется и транспортируется в организме, можно считать доказанным, что именно N0 является действующим началом ЭФР. Поэтому представляется целесообразным далее рассмотреть основные механизмы синтеза и физиологического действия N0 в организме.

1.2. Биосинтез оксида азота

В клетках млекопитающих N0 синтезируется тремя изоформами НАДФН-зависимых флавопротеинов, называемых синтазами оксида азота (NO-синтазами или NOS) посредством окисления гуанидиновой группы L-аргинина. В этой реакции L-аргинин, молекулярный кислород и НАДФН являются субстратами; N0, L-цитруллин, NADP и Н20 - продуктами реакции. Для протекания реакции необходимо участие пяти

кофакторов: НАДФН, ФАД, флавинмононуклеотида, гема (Fe-протопорфирин IX), тетрагидробиоптерина (Н4В) и кальмодулина (КМ) (111).

NO-синтазы можно разделить на две главных группы: конститутивная (нейрональная NOS или nNOS и эндотелиальная NOS или eNOS), активируемая Са2+/КМ комплексом, и индуцибельная (¡NOS). nNOS и eNOS были впервые выделены, соответственно, из нервных и эндотелиальных клеток, a iNOS была впервые изолирована из мышиных макрофагов, стимулированных интерфероном-у (IFN-y) и липополисахаридами (LPS) (161).

Таблица 1

Сходство и различия между тремя изоформами NO-синтазы (56).

Эндотелиальная Конст. (Ill) Нейрональная Конст. (I) Индуцибельная (II)

1 2 3

133 кДа 161 «Да 131 кДа

Мембраносвя-занная NADPH-зависимая. Содержит гемопро-теин P-450-типа Ингибируется аналогами L-аргинина Цитозольная NADPH-зависимая содержит гемо-протеин Р-450-типа. Ингибируется аналогами 1_-аргинина Цитозольная NADPH-зaвиcимaя Содержит гемопротеин Р-450-типа Ингибируется аналогами Ьаргинина

Са2+/кальмоду-лин зависимая Са2+/кальмоду-лин зависимая Кальмодулин является субъединицей, Са2+-неза-висимая. Регулируется транскрипцией

N0 высвобождается в пикомолярных количествах (мин/мг белка (базальный уровень) N0 высвобождается в пикомолярных количествах (мин/мг белка . (базальный уровень)) N0 высвобождается в наномолярных концентрациях(мин/мг белка (базальный уровень)) Долговременное высвобождение

Кратковременное высвобождение Кратковременное высвобождение (латентный период)

Нечувствительна к глюкокорти-коидам Нечувствительна к глюкокорти-коидам Индукция ингибируется Глюкокортикоидами

Активность изменяется в ответ на ацетилхолин, брадикинин, глутамат и т.д. Активность изменяется в ответ на ацетилхолин, брадикинин, глутамат и т. д. Индуцируется эндотоксинами (LPS) или цитокинами (IFN-y, TNFa, IL-1)

Ответственна за ЕОРР-эффекты в сосудистом эндотелии, тромбоцитах Локализована в сосудистом эндотелии, миокарде, эндокарде, желудке, слизистой желудка. Локализована в: мозжечке, ЦНС, эндотелиальных клетках мозга, ВНС, мозговом и корковом слое надпочечников, астроцитах, скелетных мышцах. Локализована в: печени, лёгких, аорте, кардио-миоцитах, макрофагах, Т-лимфоцитах, гепато-цитах, остеобластах, клетках Купфера, эпителиальных клетках почек, фибробластах, керати-ноцитах, эндотелии сосудов, хондроцитах, эндотелиальных клетках мозга, клетках микроглии, астроцитах, р - островках Лангерганса.

Превращение Ьаргинина в N0 происходит в два этапа. На первом этапе аргинин окисляется до гидроксиаргинина (ЫОНА) с помощью двух электронов, поступающих от НАДФН и молекулярного кислорода, Второй этап включает окислительное расщепление С=1М0Н конца гидроксиаргинина, приводящее к образованию N0 и Ьцитруллина. Механизм протекания этой реакции до сих пор остаётся мало изученным (35, 168). На рисунке 1. представлена схема превращения 1_-аргинина в N0.

Эндотелиальная клетка

Ьаргинин

4 НАДФН / НВ4

0; фмн/фад

А КМ

О,

Гладкомышечная клетка

Рисунок 1. Биосинтез и высвобождение N0 в эндотелии.

1.3. Регуляция активности МО-синтазы в организме

Регуляция активности ЫО-синтазы происходит на разных уровнях: фермент. регулируется своими кофакторами

(флавинами, Н4В, Са2+/КМ и гемом); активность фермента может изменяться на уровне транскрипции, посттранскрипционном уровне (фосфорилирование), а также на уровне субстрата (72, 168).

1.3.1. Регуляция на уровне кофакторов

В активной форме NO-синтаза является димером. Два мономера, содержащие КМ, ФАД и ФМН, взаимодействуют с двумя молекулами гема и Н4В с образованием активного димера (29, 61). Введение Н4В восстанавливает нарушенное эндотелийзависимое расслабление сосудов при экспериментальном диабете, гиперхолестеринемии, курении и реперфузионном повреждении. Снижение биологической доступности Н4В может, напротив, привести к кажущемуся дефициту L-аргинина. (160). Кальмодулин регулирует поток электронов от NADPH к гему (21,22). Существенное различие между активацией конститутивной и индуцибельной NOS заключается в следующем: nNOS и eNOS связывают кальмодулин обратимым Са2+- зависимым образом и, следовательно, чувствительны к активации с помощью агонистов, которые повышают внутриклеточную концентрацию Са2+. ¡NOS связывает кальмодулин необратимо при физиологических концентрациях Са2+, вследствие чего её активность нечувствительна к временным изменениям концентрации Са2+ (122). Все изоформы NOS также ингибируются блокаторами флавопротеинов, а конститутивные изоформы - антагонистами кальмодулина, такими как трифторперазин (73).

1.3.2. Регуляция на уровне транскрипции

Регуляция на уровне транскрипции является наиболее важной для ¡NOS. Показано, что у мышей и других грызунов активность ¡NOS изменяется под воздействием большинства известных цитокинов (89). Интерферон - у (IFNy), фактор некроза опухолей ос (TNFa), интерлейкин-1 (iL-1), интерлейкин-2 (IL-2) и производные бактериальных молекул липополисахариды (LPS), биологически-активные пептиды - производные мурамовой кислоты (180), токсин синдрома токсического шока (189) являются сигналами, индуцирующими синтез ¡NOS. Одним из наиболее универсальных индукторов синтеза ¡NOS является активация свободно-радикального окисления. Свободные радикалы активируют ядерный фактор транскрипции NFkB, который, в свою очередь, индуцирует экспрессию гена ¡NOS (186). Под воздействием интерлейкина-4 (IL-4) (32), интерлейкина-10 (IL-10) (127), интерлейкина-8 в нейтрофилах (103), трансформирующего ростового фактора (3 (TGFp) (93); а также глюкокортикоидов (62), простагландина Е2 (ЮЗ) и транс-ретиноловой кислоты (107) индукция синтеза ингибируется. Кроме того, индукции NOS II могут препятствовать некоторые факторы роста, такие как: эпидермальный фактор роста в кератиноцитах, и фактор роста фибробластов в пигментированных эпителиальных клетках сетчатки (62).

Существующая классификация NO-синтаз является достаточно условной. Так, например, хотя ¡NOS традиционно считается Са2+-независимой, в последнее время стали появляться данные о возможности Са2+-зависимой регуляции ¡NOS. По-видимому, Са2+ дестабилизирует мРНК ¡NOS и тем самым ограничивает

продукцию N0 этой изоформой (60, 80). Показано также, что в базальную продукцию эндотелиального N0 вносит вклад как Са2+-зависимая, так и Са2+-независимая (очевидно, индуцибельная) изоформы NO-синтазы (39). Установлено, что ¡NOS участвует в регуляции функции почек и артериального давления. Блокада ¡NOS с помощью селективного ингибитора аминогуанидина приводит к достоверному увеличению АД у крыс со 104 до 118 мм ртутного столба (102).

Несмотря на то, что eNOS рассматривается как конститутивная, она также может регулироваться на уровне транскрипции. Действительно, она имеет в своём промоторе участки связывания для эстрогенов. Эстрогены осуществляют свое действие на уровне транскрипции и могут индуцировать синтез Са2+-зависимой NOS в клетках эндотелия. В период беременности, а также при лечении эстрадиолом повышается уровень мРНК для nNOS и eNOS (112). Экспрессия eNOS может быть увеличена не только эстрогенами, но также некоторыми физиологическими стимулами, например, напряжением сдвига (54, 149, 180). Так, было показано, что длительные физические упражнения, которые увеличивают напряжение сдвига в эндотелии вследствие увеличения кровотока, увеличивают продукцию N0 в артериолах скелетных мышц крыс и коронарных артериях собаки, что сопровождается значительным увеличением мРНК NOS in vivo (38, 81). В настоящее время идентифицированы участки гена eNOS, которые обеспечивают регуляцию за счет напряжения сдвига и других стимулов (112).

1.3.3. Регуляция на посттранскрипционном уровне

Во всех клонированных изоформах NOS были обнаружены участки фосфорилирования для протеинкиназ А, С и КМ-зависимой киназы П.(38). Фосфорилирование всех изоформ приводит к снижению каталитической активности фермента. (36). В отличие от изоформ NOS, выделенных из мозга и макрофагов, которые в большей степени являются цитозольными, eNOS (NOS III) преимущественно локализована в плазматической мембране (36). Фосфорилирование фермента сопровождается его перемещением из мембраны в цитозоль. Так как цитозольная eNOS не обладает каталитической активностью, N0 не синтезируется во внутриклеточном пространстве эндотелиальных клеток. Каталитически активная, нефосфорилированная NOS локализована в плазматической мембране, где, предположительно, N0 синтезируется и высвобождается в межклеточное пространство (36)

Суммируя вышеизложенное, можно сделать вывод, что N0-синтаза является одним из наиболее регулируемых ферментов организма млекопитающих ввиду наличия большого числа кофакторов, а также механизмов регуляции на уровне транскрипции и посттранскрипции.

1.3.5. Регуляция NOS по механизму отрицательной обратной связи

Механизм ингибирования NOS по принципу отрицательной обратной связи является наиболее важным для ограничения избыточной продукции N0 в организме и действует для всех известных изоформ NO-синтазы (22, 28, 131, 139). Он реализуется

посредством нескольких механизмов.

1. Прямая инактивация ЫО-синтазы за счет связывания N0 с гем-содержащей группой фермента (22, 139).

2. Подавление экспрессии гена ЫО-синтазы за счет предупреждения активации ЫРкВ - фактора транскрипции индуцибельной ЫО-синтазы (6).

3. Подавление экспрессии гена ЫО-синтазы за счет ингибирования связывания ЫРкВ с ДНК (131).

4. Индукция и стабилизация 1кВ-альфа - эндогенного ингибитора ЫРкВ (133).

5. ЫО-зависимая активация синтеза антиоксидантных ферментов (125). В результате может происходить снижение количества свободных радикалов в клетке и, соответственно, снижение активации ЫРкВ.

6. ЫО-зависимая активация синтеза Н8Р70 (96, 97). Н8Р70, в свою очередь, могут подавлять экспрессию индуцибельной N0-синтазы за счет снижения активации ЫРкВ (51).

В некоторых ситуациях ингибирование эндогенного синтеза N0 по механизму отрицательной обратной связи может иметь отрицательные последствия для организма. Например, длительное лечение нитровазодилататорами или ингаляцией N0, которое применяется при таких МО-дефицитных состояниях, как стенокардия или легочная гипертензия, угнетает эндогенную продукцию N0. К сходному эффекту приводит и курение: у курящих, которые вдыхают высокие концентрации N0 с табачным дымом, существенно снижена концентрация N0 в выдыхаемом воздухе ( 134 ).

1.4. Ингибиторы синтеза оксида азота

Известные в настоящее время ингибиторы NOS подразделяют на пять классов: 1) аналоги субстрата (L-аргинина); 2) дифенилиодид и его производные, которые модифицируют NOS, связываясь с участком, с которым взаимодействуют производные флавина или НАДФН; 3) СО, взаимодействующий с гемом, входящим в состав NOS; 4) замещенные пиримидины, которые влияют на метаболизм Н4В, другого кофактора NOS; 5) также соединения, связывающиеся с КМ и препятствующие его взаимодействию с NOS (в эту группу входит известный агонист кальмодулина трифторперазин) (122).

Замещенные аналоги L-аргинина представляют собой наиболее изученные и часто применяемые блокаторы NOS. Аналоги L-аргинина являются конкурентными ингибиторами NOS в том случае, когда их добавляют совместно с субстратом. В отсутствие L-аргинина эти соединения представляют собой неэффективные субстраты, которые метаболизируются NOS до продуктов, модифицирующих фермент. Конститутивная и индуцибельная формы NOS имеют различную чувствительность к ингибиторам, являющимся аналогами L-аргинина (123). Исследуя замещенные аналоги L-аргинина, Aldir и соавторы обнаружили, корреляцию между способностью различных аналогов L-аргинина ингибировать базальное эндотелийзависимое расслабление и активность NO-синтазы из мозжечка. Ингибирующая способность этих соединений убывала в ряду: бензиловый эфир L-N-нитроаргинина (L-NABE), L-N-монометиларгинин (L-NMNA) , метиловый эфир L-N-нитроаргинина (L-NABE). Способность аналогов ингибировать стимулированное ЭЗР несколько различалась и была следующей: L-NAME, L-NABE, L-NMNA (114).

Известно, что замещенные аналоги L-аргинина не являются селективными блокаторами, осуществляя ингибирование как cNOS, так и ¡NOS. В последнее время выявлены и относительно селективные блокаторы NO-синтазы. К числу селективных блокаторов ¡NOS относят аминогуанидин и стероиды (179). Установлено также, что пирролидиндитиокарбомат, являющийся специфическим ингибитором фактора ядерной транскрипции, предотвращает экспрессию ¡NOS, практически не влияя на активность cNOS (153).

Идентифицированы и выделены эндогенные ингибиторы NOS: симметричный и асимметричный диметиларгинин (ADMA и SDMA) (171). Эти соединения сходны по своей структуре и свойствам с синтетическим ингибитором NOS L-NMMA. Как и L-NMMA, ADMA ингибирует NOS, вызывает эндотелийзависимое сокращение аорты крысы (за счет ингибирования базальной продукции N0), повышает артериальное давление у животных и уменьшает скорость кровотока. Таким образом, ADMA является специфичным и селективным ингибитором NOS in vitro и in vivo как у животных, так и у человека. Уровень эндогенных ингибиторов NOS повышается при некоторых заболеваниях, например, при уремии, гиперхолестеринемии (44), геморрагическом шоке (25, 170).

1.5. Доноры оксида азота

Существуют физиологические агенты, обеспечивающие образование N0 в организме без участия NOS и называемые донорами N0. (К таким веществам относятся органические нитраты: нитроглицерин, изосорбид динитрат, нитропруссид натрия, нитрозотиолы (в-нитрозо-М-ацетилпеницилламин), а

также комплексы N0 с нуклеофилами (X), с общей формулой X-М[0"]Ы-0.) (98)

Доноры N0 можно разделить на несколько групп .органические нитраты (тринитроглицерин вТЫ) и нитриты (амилнитрит), неорганические нитрозосоединения (нитропруссид натрия), сиднонимины (молсидомин, ) и Э-нитрозотиолы (Э-нитрозо-Ы-ацетил-О.Ц-пеницилламины) (112)

Все эти соединения являются пропрепаратами, которые проявляют своё фармакологическое действие после превращения в N0. Высвобождение N0 из органических нитратов и нитритов может быть как ферментативным, так и неферментативным процессом. Для неферментативного процесса требуются тиолы, в частности, цистеин, и в качестве промежуточных продуктов образуются Б-нитрозотиолы, которые высвобождают N0. Нитропруссид натрия высвобождает N0 спонтанно, тогда как сиднонимины генерируют N0 после активации молекулярным кислородом; одновременно образуется супероксид анион (02~), который может реагировать с N0 и уменьшать его концентрацию (50).

Сердечно-сосудистые заболевания, которые лечат с использованием доноров N0, включают стабильную и нестабильную стенокардию, коронарный вазоспазм, инфаркт миокарда и застойную сердечную недостаточность. Некоторые доноры N0, в особенности нитроглицерин и изосорбид, издавна применяются в клинике для лечения и профилактики вазоспазмов, связанных с процедурами ангиопластики. Положительные эффекты этих соединений при стенокардии обусловлены расслабляющим действием на гладкие мышцы артериол, вен, а также крупных коронарных сосудов, что приводит к увеличению

коронарного кровотока (37). Введение нитроглицерина улучшает кровоток в артериях матки у беременных женщин с риском преэклампсии, которая обусловлена более низкой продукцией N0 чем при нормальной беременности (138). Кожная аппликация тампонов, высвобождающих нитроглицерин, устраняет воспалительные симптомы тромбофлебита (121).

Наиболее низкие эффективные концентрации нитратов приводят к венодилатации, снижая сердечную преднагрузку и потребление кислорода миокардом, и к расслаблению крупных проводящих артерий. Это обусловлено тем, что сосудистые мышцы этого типа имеют наибольшую способность к превращению нитратов в N0, тогда как в артериолах и других микрососудах активность ферментов, метаболизирующих N0, незначительна. При ишемических заболеваниях сердца проводимость этих артерий обычно изменяется наиболее существенно при нарушении эндотелиальной функции и атеросклерозе. Проводимость стенозированных участков необходимо улучшать для того, чтобы увеличить потребление кислорода сердцем (31, 112).

Как в экспериментах т уИго, так и в клинических исследованиях установлено, что экзогенно введенные доноры N0 вызывают дилатацию преимущественно тех участков сосудов, где нарушена эндотелиальная функция, то есть в тех участков, где эндогенная продукция N0, уровень цГМФ в сосудах и постоянный дилататорный ответ частично редуцированы. Введение экзогенных доноров N0, таких как классические органические нитраты, в дополнение к сиднониминам и производным фуроксана эффективно повышает уровень цГМФ, особенно в поврежденных участках сосудов и в сосудах, где уровень цГМФ

понижен. В таких сосудах сочетанная стимуляция растворимой гуанилатциклазы с помощью N0 приводит к эффективной продукции цГМФ в мышцах сосудов. Существенные изменения периферического сопротивления сосудов и АД будут наблюдаться только в случае значительного увеличения концентрации нитровазодилататоров (примерно в 10 раз) (48, 112).

Однако длительное лечение донорами N0 имеет свои побочные эффекты. В частности, хроническое применение нитровазодилататоров может способствовать ускоренному атерогенезу и развитию гипертензии (116). Кроме того, при продолжительной терапии (в случае длительной нестабильной стенокардии и последующего инфаркта миокарда) мышцы сосудов становятся толерантными по отношению к органическим нитратам. Толерантность в первую очередь возникает в венах и крупных артериях, тогда как периферические сосуды продолжают отвечать на нитровазо-дилататоры. Толерантность является многофакторным явлением, которое проявляется при использовании высоких и реже низких доз дилататоров. В клинических условиях потеря чувствительности связана с нейрогормональной контррегуляцией («псевдотолерантность»). При повышении концентрации нитратов происходит нарушение биотрансформации нитратов в активные NO-высвобождающие компоненты. В клинических условиях это состояние может проявиться в отсутствие NO-индуцированного повышения уровня цГМФ. При более высоких концентрациях (в фармакологических экспериментах in vitro в области миллимолярных концентраций) наблюдается десенситизация растворимой гуанилатциклазы. Для устранения толерантности к нитровазодилататорам используют новые соединения, такие как цистеин-содержащий препарат SPM-5185 (31).

1.6. Физиологическое действие NO в сердечно-сосудистой системе.

Роль N0 в сердечно-сосудистой системе

■-'--к

Регуляция тонуса сосудов

Регуляция сократительной функции сердца

Торможение клеточной пролиферации

\

Ингибирование активации, адгезии и ^ агрегации тромбоцитов

Медиатор нитрергическич нервов

Рисунок 2. Роль N0 в сердечно-сосудистой системе.

N0 высвобождается базально, а также в ответ на многие химические стимулы: ацетилхолин, брадикинин, тромбин, простациклин, серотонин и др. Высвобождение N0 может также вызываться физическими факторами, такими как изменения напряжения сдвига на эндотелиальном клеточном слое (т.е. скоростью кровотока) или гипоксия. N0, который постоянно синтезируется и выделяется как без стимуляции (так называемое нестимулированное базальное высвобождение N0) и при стимуляции (стимулированное высвобождение), вызванной локальными и циркулирующими в крови агонистами (брадикинин, серотонин, норадреналин) и напряжением сдвига, оказывает выраженный вазомоторный эффект на сосудистый тонус. Тонкая

регуляция тонуса сосудов осуществляется за счет метаболических факторов и в меньшей степени гормональными и нейрональными факторами. Миогенные эффекты зависят также от целостности эндотелия. В физиологических условиях продолжительное расслабляющее действие эндотелиальных факторов компенсируется постоянно действующим сократительным эффектом норадреналина, выделяющегося из нервных окончаний, и эндотелиальных констрикторных факторов, например, эндотелина. (63, 94).

Эндотелий модулирует тонус сосудов не только путем базального и/или стимулированного синтеза N0 и последующего высвобождения эндотелиальных факторов, но также путем его влияния на синтез, запасание и метаболизирование многочисленных вазоактивных соединений, циркулирующих в крови, таких как норадреналин, серотонин. Кроме того, NO также модифицирует высвобождение медиаторов из нервных окончаний, модулируя и ограничивая альфа-адренергические констрикторные стимулы (108).

Сосуды малого диаметра способны продуцировать большее количество N0, чем сосуды большого диаметра (59). Эти данные позволяют предполагать, что N0 вовлечен в процесс регуляции гладкомышечного тонуса и периферического сопротивления сосудов. N0 также участвует в контроле периферического тонуса сосудов в артериолах человека, внося важный вклад в регуляцию кровяного давления (141). N0 по-видимому регулирует также кровоток, перераспределяя кровь между ветвями артерий (65, 94).

N0, по-видимому, является прямым регулятором сердечного сокращения (92). Имеются доказательства, что ¡NOS, cNOS или

обе изоформы присутствуют в миоцитах, ткани желудочка, малых кровеносных сосудах и иммунных клетках (69, 154). Более того, ответ миоцитов желудочка крысы на адренергические и холинергические стимулы регулируется по NO-сигнальному пути (30, 181).

N0 тормозит пролиферацию гладкомышечных клеток. За счет этого он оказывает антиатероскперотическое действие, поскольку замедляет образование неоинтимы и утолщение стенок сосудов при гиперхолестеринемии (156).

NO диффундирует из эндотелиальных клеток в сосуды и достигает тромбоцитов. Связываясь с гемом гуанилатциклазы тромбоцитов N0 активирует этот фермент. Повышение внутриклеточного уровня цГМФ в тромбоцитах снижает их сродство к поверхности эндотелиальных клеток (адгезия тромбоцитов) и к другим эритроцитам (агрегация тромбоцитов). Тромбоциты содержат cNOS. Этот фермент, по видимому, может активироваться контррегуляторно, поэтому факторы, которые увеличивают агрегацию и адгезию, также активируют тромбоцитарную cNOS, усиливая эффект N0 (115).

В некоторых участках сосудов N0 высвобождается из нитрергических (нехолинергических/неадренергических) нервных окончаний, увеличивая таким образом тканевую перфузию. В некоторых тканях вход Са2+ внутрь эндотелиальных клеток сосудов может контролироваться прямо через нитрергические нейроны. Вход Са2+ в эти клетки, по-видимому, зависит от скорости кровотока. Когда давление или напряжение сдвига на плазматической мембране повышается, открываются Са-каналы, через которые Са2+ входит в эндотелиальные клетки, где он, связываясь с кальмодулином, активирует NOS таким же образом,

как это происходит в нейронах (68).

Нитрергические нервы обеспечивают адаптивное расслабление стенки желудка, кишечника, эрекцию, отток мочи из мочевого пузыря и дилатацию трахеи. Однако роль нитрергических нервов в сердечно-сосудистой системе пока практически неизвестна и, по-видимому, невелика. Имеются данные о реципрокной регуляции стенок артериол адренергическими и нитрергическими вазодилататорными нервами, нарушение которой, предположительно, может играть роль в развитии гипертензии (155)

1.6.1. Недостаточная продукция N0

Базальный синтез и высвобождение ЭФР играет важную роль в поддержании дилататорного тонуса артериального (и в гораздо меньшей степени венозного) звена сердечно-сосудистой системы (169, 171). Снижение синтеза ЭФР или ускорение его распада приводит к преобладанию констрикторных сосудистых реакций над дилататорными вплоть до развития вазоспазма (174). Такая ситуация наблюдается при различных формах артериальной гипертензии (90), а также при гипертонической болезни у человека (49). При этом отмечается высокая корреляция между степенью нарушения эндотелийзависимого расслабления сосудов и тяжестью и продолжительностью заболевания гипертензией (162). Повышение базального тонуса и усиление констрикторных реакций характерно также для сосудов при атеросклерозе. Считается, что эти нарушения обусловлены снижением высвобождения ЭФР (156). Вызванная атеросклерозом утрата эндотелийзависимого расслабления устраняется при регрессии заболевания и нормализации уровня холестерина в плазме (57,

117). Нарушение эндотелийзависимого расслабления может происходить не только при развившемся атеросклерозе, но и при гиперхолестеринемии, что было продемонстрировано как в эксперименте (86), так и в клинике (41).

На рисунке 3 показаны последствия недостаточной продукции эндотелиального NO и возможные пути коррекции эхтих нарушений. Одной из важнейших причин атеросклеротических поражений сосудов является сахарный диабет. Первичным повреждением в этих условиях становится не гистологическое, а функциональное нарушение состояния эндотелия. Снижение активности NOS, обнаруживаемое при диабете как I, так и II типа, считается одной из причин развития диабетических сосудистых осложнений (136,52).

Показано, что в крупных проводящих артериях крыс эндотелий-зависимое расслабление в ответ на введение Са-ионофора А23187, гистамина или АТФ с возрастом снижается. В резистивных артериях крыс эндотелий-зависимое расслабление в ответ на ацетилхолин также уменьшается при старении. Однако сообщалось, что с возрастом наблюдается как усиление, так и снижение эндотелийзависимого расслабления в ответ на агонисты мускариновых рецепторов Поскольку расслабление, индуцированное донором оксида азота SIN-1, с возрастом не изменяется, то сниженный ответ на мускариновые агонисты должен быть обусловлен уменьшением продукции и (или) высвобождением эндотелийзависимого N0 после стимуляции ацетилхолином (23).

Показано, что одним из возможных механизмов ослабления продукции N0 при старении может быть снижение уровня L-аргинина, являющегося субстратом для NOS (140). Установлено

также, что в процессе старения в крови повышается уровень эндотелина (53).

Недостаточная продукция N0

Ускоренный распад N0

Дефицит N0

Ингаляция N0 Доноры N0 1_-аргинин

Нефармакологическая коррекция

Эссенциальная гипертензия Легочная гипертензия Атеросклероз

Ишемическая болезнь сердца Тромбоз

Диабетическая ангиопатия и т.д.

Рисунок 3. Дефицит эндотелиального N0.

Таким образом, нарушение эндотелийзависимого расслабления обнаруживается в первую очередь при наличии заболеваний и факторов риска, способствующих развитию ишемической болезни

сердца: гипертензии, атеросклерозе, гилерхолестеринемии, сахарном диабете, а также синдроме боли в груди при нормальных коронарных артериях (100). В связи с этим было предложено использовать нарушение функционального состояния эндотелия в качестве маркёра этих заболевания. Недостаточная продукция N0 или ускоренный распад N0 приводят к возникновению тяжелых сердечно-сосудистых заболеваний, связанных с патологическим повышением сосудистого тонуса и АД. Лечение таких состояний требует компенсации недостаточной продукции эндотелиального N0 (159).

В настоящее время это осуществляется в эксперименте и клинике с помощью доноров N0 или вдыхания газообразного N0. Доноры в эксперименте ограничивают размер инфаркта и степень повреждения сердца и сосудов. (44). В клинике в качестве доноров используют нитровазодилататоры типа нитроглицерина или нитропруссида натрия. Однако эти подходы имеют свои ограничения. Так эффект вазодилататоров оказывается непродолжительным, и к ним быстро развивается толерантность (31). Кроме того, нитровазодилататоры в высоких дозах токсичны, а высвобождение N0 из этих соединений при физиологическом рН плохо предсказуемо (40). При эссенциальной и вторичной гипертензии, гиперхолестеринемии и посттрансплантационном состоянии достаточно успешно применяется предшественник N0 Ьаргинин, который вводится внутрикоронарно (74). Недостаток этого подхода состоит в том, что Ьаргинин при экстравазации может вызывать локальный некроз тканей (34). Вдыхание газообразного N0 вызывает повреждение тканей дыхательных путей. Кроме того, свободный N0 способен связываться с гемоглобином, снижая его емкость по отношению к кислороду (40).

1.6.2. Гиперпродукция N0

Гиперпродукция N0 представляет собой общее звено патогенеза шоков различного происхождения. Участие гиперпродукции N0 доказано для септического (166), анафилактического (110), геморрагического (88), кардиогенного (2), теплового (8), окклюзионного (26) и травматического (184) шока. На рисунке 4 представлены основные механизмы повреждающего действия избытка N0.

Впервые явление гиперпродукции N0 было описано при действии эндотоксинов, и в настоящее время роль этого явления наиболее полно изучена для патогенеза септического шока. Эндо-и экзотоксины как прямо, так и через активацию свободнорадикального окисления вызывают индукцию iNOS. Нормализация сосудистого тонуса осложняется при этом тем, что эндотоксемия избирательно подавляет симпатические сократительные реакции резистивных сосудов (165).

В настоящее время доказано, что воспалительные стимулы могут индуцировать синтез iNOS и активировать ее во многих клетках, включая эндотелиальные и гладкомышечные клетки сосудов человека и животных. Появление iNOS является частью защитной реакции организма против инфекции. iNOS обеспечивает генерацию больших количеств N0, которые намного превышают физиологические количества N0, вырабатываемые cNOS и nNOS (186).

Первые данные о том, что воспалительные стимулы могут вызывать гиперпродукцию NO были получены в экспериментах, проведенных на изолированных препаратах аорты, выделенных после введения животным бактериальных липополисахаридов

(ЛПС). Снижение вазоконстрикторной реакции на норадреналин и сопутствующее увеличение цГМФ, которые наблюдались в этих экспериментах через несколько часов после введения ЛПС, устранялись ингибитором NOS L-NMMA, независимо от наличия или отсутствия эндотелия (6).

ЭНДО- И ЭКЗОТОКСИНЫ АКТИВАЦИЯ СВОБОДНОРАДПКАЛЬНОГО ОКИСЛЕНИЯ ; Or

ЦИТОКИНЫ ,

i

Эпилепсия, инсульт

Рисунок 4. Повреждающее действие и механизмы

гиперпродукции N0.

Вскоре подтвердилось, что ЛПС после латентного периода в несколько часов индуцирует внеэндотелиальную NOS в гладкомышечных и эндотелиальных клетках аорты крысы. Во всех этих экспериментах фермент был идентифицирован как принадлежащий к индуцибельному типу, так как он не активировался ионами Са2+, а его индукция ингибировалась как дексаметазоном, так и цикпогексимидом (6).

Повышение концентрации N0 приводит к цитотоксическим эффектам. Цитотоксичеокие свойства стойко повышенных концентраций N0, по-видимому, являются результатом сочетания нескольких эффектов. Предполагается, что по крайней мере некоторые из этих повреждающих эффектов обусловлены взаимодействием N0 с 02?, приводящим к образованию пероксинитритов (ОЫОО") и в конечном счете к образованию цитотоксического продукта их распада - ОН, Пероксинитрит является токсичным окислителем, который может ингибировать аконитазу и клеточное дыхание, а также вызывать разрывы цепей ДНК. В обычных условиях образование 01400", очевидно, невелико, поскольку эндогенная супероксиддисмутаза удаляет супреоксидрадикал (02*). Однако при воспалительных реакциях активированные лейкоциты и другие клетки могут продуцировать большие количества 02' (118)

Таким образом, увеличенная продукция N0, которая в норме имеет большое адаптивное значение, может превратиться из звена адаптации в звено патогенеза и стать не менее опасным повреждающим фактором для организма, чем дефицит N0.

Для состояний, которые сопровождаются чрезмерным усилением эндотелийзависимого расслабления сосудов, обусловленным гиперпродукцией N0, как правило, характерна значительная активация процессов свободнорадикального окисления, которые способствуют активации или экспрессии индуцибельной ЫО-синтазы. К их числу относятся тяжелые стрессорные воздействия, шок различного происхождения, острый инфаркт миокарда (67). При умеренных стрессорных воздействиях в организме происходит мобилизация резерва крови в более активную циркуляцию (101). При увеличении

продолжительности и интенсивности стресса первоначальный компенсаторный спазм периферических сосудов сменяется снижением их тонуса. Тяжелый стресс вызывает прогрессирующее падение АД, которое становится частой причиной гибели животных (4, 17, 18). Одной из причин таких нарушений при стрессе является увеличение

эндотелийзависимого расслабления сосудов и усиление ингибирующего влияния эндотелия на силу и скорость вазоконстрикторных реакций на адренергические агонисты (7, 9).

В патогенезе шока важную роль играет явление патологического депонирования - выключение большого объема крови из общей циркулИции с перераспределением ее в органы грудной клетки и спланхнической области (4, 5). Например, уже в начальные периоды травматического шока объем циркулирующей крови падает до 4/5 от первоначальной величины . По мере углубления процесса это явление еще больше прогрессирует (16). При шоковых состояниях обнаруживается прямая зависимость между величиной объема циркулирующей крови и уровнем АД (19). Ведущей причиной декомпенсации кровообращения считается нарушение способности сосудов реагировать на констрикторные стимулы (124). Введение ингибитора NOS предупреждает эти нарушения и снижает смертность животных от геморрагического шока (88, 190).

Одним из патологических состояний, которое характеризуется сосудистой недостаточностью и ведет к глубокому падению артериального давления (АД) и развитию коллаптоидных состояний, часто приводящих к фатальному исходу, является тепловой шок (ТШ) (1.51). Если на ранних стадиях ТШ реакция

сердечно-сосудистой системы развивается по

гипердинамическому типу, то при более длительных и интенсивных термических воздействиях она сменяется падением сердечного выброса, периферического сосудистого сопротивления и АД (126). Тяжелый ТШ сопровождается почечной недостаточностью, поражением печени, повышением уровня ферментов в плазме крови и нарушением процесса свёртывания крови. Для теплового шока характерна гиперпродукция N0 (10), которая приводит к генерализованной вазодилатации. Причиной этой вазодилатации является, с одной стороны, избыточное усиление эндотелийзависимого расслабление сосудистой гладкой мышцы, а, с другой стороны, подавление вазоконстрикторной симпатической активности на центральном уровне и опосредованная N0 на локальном уровне гипореактивность сосудов к вазоконстрикторным стимулам. Вся эта цепь событий приводит к стойкой генерализованной вазодилатации и глубокому падению АД, которое может стать необратимым (10).

Показано, что выраженность сердечно-сосудистых нарушений при ТШ прямо зависит от степени гиперпродукции N0. Так у крыс линии Август, которые характеризуются более высоким уровнем продукции N0 и более выраженным усилением его синтеза в ответ на ТШ, чем крысы линии Вистар, ТШ приводит к большему усилению эндотелийзависимого расслабления сосудов и падению АД. При этом смертность от ТШ крыс Август в 6 раз выше, чем у Вистар (8).

В течение первого часа шока увеличение продукции N0, по-видимому, представляет собой компенсаторный механизм, направленный на противодействие активации барорецепторного

механизма. Предполагается, что эта ранняя фаза увеличения продукции N0 обусловлена активацией cNOS. Несмотря на повреждающее действие избытка N0 (164, 166), в этот период для организма опасна не только полная, но даже частичная блокада синтеза N0. ¡NOS начинает вносить свой вклад в падение периферического сопротивления и АД несколько позже: например, в случае септического шока - приблизительно через 60 минут после введения эндотоксина (183).

Для предупреждения гиперпродукции N0 и защиты от его повреждающего действия применялись подходы, основанные на механизме ингибирования NOS по принципу отрицательной обратной связи. Так предварительное введение доноров N0 ограничивало реперфузионные нарушения сократительной функции миокарда, опосредованные локальной гиперпродукцией N0 (181); субстраты NOS в эксперименте предупреждают и устраняло последствия ишемического инсульта (40); предварительное тепловое воздействие, усиливающее продукцию N0 (10), ингибировало экспрессию мРНК ¡NOS и ограничивало у крыс гипотензию, вызванную введением эндотоксинов (70).

Для защиты от повреждающего действия избытка N0 в эксперименте и клинике неоднократно предпринимались попытки использовать блокаторы NOS. В эксперименте классические блокаторы NO-синтазы - замещенные аналоги L-аргинина метиларгинин и нитроаргинин - устраняют падение АД, сопровождающее шок различного происхождения (75, 166). Следует однако заметить, что ингибиторы NO-синтазы не улучшают работу сердца при депрессии, вызванной анафилаксией (110). Более того, в высоких дозах ингибиторы N0-

41 ' РОССИЙСКАЯ

ГОСУДАРСТЙШИ^,

^ШДОЖА

синтазы уменьшают сердечный выброс (123). Отмечается также , что блокаторы NO-синтазы вызывают нарушение антимикробной защиты, склонность к ишемии и тромбообразованию (159).

Для предупреждения ускоренного атерогенеза, вызванного гиперпродукцией NO предпринимались попытки применения антиоксидантов, в качестве которых использовались аскорбиновая кислота, ВНА и витамин Е. Однако выяснилось, что аскорбиновая кислоты in vivo может оказывать не только анти- но и прооксидантное действие, реагируя с кислородом и превращаясь в дегидроаскорбиновую кислоту. Кроме того, высокие дозы аскорбиновой кислоты вызывают оксалурию и образование оксалатных камней.(188) У антиоксиданта ВНА был обнаружен канцерогенный эффект, а витамин Е противопоказан больным, получающим лечение антикоагулянтами (84).

Интересные данные были получены Nava et al. (123). В их экспериментах введение L-N-монометиларгинина (L-NMMA) в дозе 30 мг/кг веса крысам с эндотоксин-индуцированной гипотензией приводило к полному устранению гипотензии. Более низкие дозы (3 мг/кг веса) были неэффективными, а 300 мг/кг веса ускоряли и увеличивали падение давления. Авторы пришли к заключению, что L-NMMA в дозе 30 мг/кг веса подавляет активность только индуцибельной формы, тогда как высокие дозы (300 мг/кг) ингибируют активность как ¡NOS, так и cNOS. Более перспективной представляется избирательная блокада ¡NOS, но в настоящее время селективные ингибиторы разных форм NO-синтаз находятся лишь в стадии разработки и безопасность их применения предстоит установить. Поэтому важно найти пути такой коррекции гиперпродукции N0, которая сама по себе не

будет подавлять нормальной работы сЫОЭ.

1.7. Адаптационная защита сердечно-сосудистой системы

В последнее время большое внимание уделяется нефармакологическим способам профилактики и лечения сердечно-сосудистых заболеваний. Особое место среди них занимает дозированная адаптация к факторам среды - стрессу, гипоксии, физическим нагрузкам. При формировании такой адаптации, организм приобретает новое качество - устойчивость к адаптирующему фактору. Это означает, что организм уже не может быть поврежден этим фактором, и таким образом адаптационные реакции составляют основу естественного предупреждения болезней. Важно, что при этом адаптация к одному фактору нередко защищает организм не только от одного этого фактора (прямой защитный эффект), но и от нескольких других (перекрестные защитные эффекты). Так, например, адаптация к периодической гипоксии оказалась эффективным средством терапии аллергических, нервно-психических и некоторых сердечно-сосудистых заболеваний, адаптация к физическим нагрузкам повышает резистентность к гипоксии, тормозит развитие атеросклероза, гипертонии, диабета. Адаптация к коротким неповреждающим стрессорным воздействиям предупреждает ишемические и реперфузионные повреждения сердца, ограничивает развитие постинфарктного кардиосклероза (11). Наиболее выраженным перекрестным защитным эффектом в отношении подобных нарушений обладает адаптация к стрессу (13).

Установлено, что стрессорные воздействия приводят к

существенным повреждениям сердечно-сосудистой системы. Более того, они играют важную, а иногда и решающую роль в развитии и патогенезе ряда неинфекционных заболеваний, например, ишемической болезни сердца, язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, гипертонии и других (12)

Тем не менее стрессорные повреждения и заболевания людей и животных возникают во много раз реже, чем тяжелые, а временами и безвыходные стрессорные ситуации, с которыми каждый организм неоднократно встречается в своей жизни. Показано, что многократное повторение неповреждающих стрессорных ситуаций повышает резистентность организма к тяжелым стрессорным воздействиям и предупреждает стрессорные повреждения организма (13)

В одной из первых работ такого рода установлено, что стрессорные воздействия в форме электроболевых ударов приводит к снижению содержания катехоламинов в мозге, развитию стрессорных язв желудка и гибели части животных (4). У группы адаптированных животных описанные явления отсутствовали. Таким образом, адаптация предотвратила гибель животных, причем защитный эффект сохранялся в течение длительного времени. В последующих работах выяснилось, что повторение стрессорных ситуаций и адаптация к ним закономерно снижает саму стресс-реакцию, то есть подъем в крови концентрации катехоламинов и глюкокортикоидов (12).

Возможность предупреждения повреждений сердечной мышцы, вызванной стрессом, при помощи предварительной адаптации к достаточно мягким стрессорным воздействиям,

впервые была доказана в экспериментах на изолированном предсердии предварительно адаптированных, а затем подвергнутых тяжелому стрессорному воздействию животных (12). В настоящее время показано, что предварительная адаптация крыс к неповреждающим стрессорным ситуациям предупреждает или ограничивает возникающие при тяжелом стрессе нарушения структуры, сократительной функции и метаболизма миокарда, аритмогенный эффект стресса (11), летальный эффект электроболевых воздействий (13). Эксперименты на изолированном перфузируемом сердце показали, что длительный иммобилизационный стресс вызывал значительное увеличение относительного коронарного потока наряду со снижением внутрижелудочкового давления (18). Адаптация к кратковременным иммобилизационным воздействиям предупреждала увеличение относительного коронарного протока, снижение индекса ауторегуляции и сократительной функции изолированного сердца (12). В отношении сосудов показано также, что длительный иммобилизационный стресс вызывает снижение сократительной функции воротной вены в 3 раза. Адаптация к мягким иммобилизационным воздействиям не вызывает какого-либо снижения сократительной функции воротной вены, а воспроизведение на ее фоне длительной иммобилизации не приводит к депрессии сократительной функции по сравнению с контролем (9).

На основе многолетних исследований по адаптации и ее защитным эффектам была сформулирована концепция о стресс-лимитирующих системах организма, сущность которой состоит в том, что организм располагает регуляторными медиаторными

системами, которые связаны со стресс-реализующими системами, мобилизуются при активации зтих систем и ограничивают интенсивность стресс-реакции. Активация центральных и локальных стресс-лимитирующих систем организма является одним из важных механизмов адаптации, которые обеспечивают ее защитные эффекты К числу центральных стресс-лимитирующих систем относятся ГАМКергическая, опиоидергическая, серотонинергическая, дофаминергическая, и др. К числу локальных стресс-лимитирующих систем относятся система простагландинов, аденозинергическая, антиоксидантная и др. Представление о стресс-лимитирующих системах легло в основу использования их активаторов и метаболитов для предупреждения и лечения не только стрессорных повреждений, но и заболеваний в патогенезе которых стресс играет важную роль (13).

Следует особо отметить, что в настоящее время к числу стресс-лимитирующих систем организма относят и систему генерации N0. Свойства системы генерации N0 полностью соответствуют критериям, сформулированным Ф.З.Меерсоном для стресс-лимитирующей системы, а сам N0 соответствует критериям ее метаболита (11, 12, 13): 1) стресс, вызванный действием разных факторов среды, является активатором синтеза N0; 2) N0 участвует в ограничении одного из главных компонентов стресс-реакции - выброса стресс-гормонов; 3) N0, сам по себе или через активацию локальных эндогенных защитных систем повышает устойчивость клеток, органов и организма в целом к повреждающим воздействиям среды; 4) с помощью доноров N0 и блокаторов синтеза N0 можно направленно влиять на стрессорные ответы организма (6).

Дозированная адаптация к факторам окружающей среды представляет собой мощное средство профилактики и лечения многих заболеваний и патологических состояний сердечнососудистой системы, связанных с нарушением продукции N0. Наиболее хорошо изученной и издавна применяемой в эксперименте и клинике формой адаптации является адаптация к физической нагрузке, то есть физическая тренировка. Адаптация к физической нагрузке тормозит развитие артериальной гипертензии, уменьшает выраженность коронарного атеросклероза (11), оказывает благоприятный эффект при ишемической болезни сердца, снижает факторы риска сердечнососудистых заболеваний (13). Показано, что адаптация к умеренным физическим нагрузкам (плавание), оказывает достоверное гипотензивное действие у больных гипертонической болезнью (49). По данным ЭПР адаптация к физической нагрузке вызывает увеличение мощности систем синтеза N0, которое проявляется в усилении ЭПР-сигнала ЫО-содержащих комплексов в печени, мозге, легких, сердце, селезенке и других органах (9, 11, 13).

Адаптация к периодической гипоксии тормозит развитие экспериментальной наследственной гипертензии (13), для которой характерен дефицит N0 (159). При этом наблюдается достоверное увеличение эндотелийзависимого расслабления препаратов артериальных сосудов у адаптированных животных , в плазме крови по мере формирования адаптации прогрессивно увеличивается концентрация стабильных метаболитов N0 -нитратов и нитритов (6) и во много раз повышается утилизация предшественника N0 - Ьаргинина (14).

Интересно, что адаптация предупреждает развитие патологий,

связанных не только с дефицитом, но и с избытком N0.

Адаптация к физической нагрузке или гипоксии способна ограничивать ЫО-зависимые нарушений, вызванные острыми воздействиями, такими как тепловой шок, острая гипоксия (6). Адаптация к стрессу, гипоксии или физической нагрузке предупреждает падение АД и избыточное усиление эндотелийзависимого расслабления, вызванные гиперпродукцией N0 при остром инфаркте миокарда (8, 9, 97). Однако, несмотря на большое количество косвенных данных, свидетельствующих о возможности адаптационной защиты сердечно-сосудистой системы при гиперпродукции N0, прямых данных об ограничении гиперпродукции N0 с помощью предварительной адаптации до настоящего времени не имелось.

После того, как были получены данные о значительных изменения в продукции N0 в процессе адаптации к разным факторам, возникло предположение о том, что N0 играет важную роль в адаптивных ответах организма. Современные представления о роли N0 в адаптации можно суммировать следующим образом. При различных типах адаптации к факторам среды происходит усиление продукции N0, сначала за счет активации существующих ЫО-синтаз, а впоследствии, за счет усиления экспрессии генов этого фермента. Кроме того N0 активирует ранние регуляторные гены фврЮ и протоонкогены) и факторы транскрипции некоторых поздних структурных генов, участвующих в адаптации.

Таким образом, N0 участвует в формировании трех основных этапов долговременной адаптации: на этапе срочной адаптации N0 ограничивает чрезмерную стресс-реакцию и обеспечивает направленное перераспределение энергетических ресурсов в

органы, осуществляющие адаптивную реакцию; на переходном этапе N0 активирует ранние регуляторные гены и участвует в передаче сигнала от ранних генов к поздним и, наконец, на этапе сформировавшейся долговременной адаптации N0 участвует в поддержании повышенной устойчивости организма в отсутствие стресс-реакции. (6).

Изложенные данные говорят о том, что дозированная адаптация к факторам среды может оказаться именно таким средством нефармакологического модулирования метаболизма N0, которое будет обладать защитным действием в условиях нарушения его синтеза и при этом не оказывать побочных эффектов, характерных для фармакологических методов. Поэтому адаптационная защита сердечно-сосудистой системы представляется весьма перспективным подходом для профилактики и лечения патологических состояний, связанных как с дефицитом, так и с гиперпродукцией N0.

Заключение диссертации по теме «Патологическая физиология», Покидышев, Дмитрий Александрович

ВЫВОДЫ

1. Тепловой шок (ТШ), сопровождающийся генерализованной гиперпродукцией N0 в организме, приводит к гибели 57% крыс. У выживших животных ТШ вызывает падение системного АД со 111 до 81 мм рт. ст. и гиперактивацию эндотелия, проявляющуюся в угнетении эндотелием констрикторных реакций и почти двукратном усилении эндотелийзависимых дилататорных реакций изолированных сосудов.

2. Предварительное введение животным блокатора синтеза белка циклогексимида на 73% снижало гиперпродукцию N0 и предупреждало падение АД при ТШ, что свидетельствует о ведущей роли в этом явлении экспрессии индуцибельной изоформы ЫО-синтазы при значительно меньшем вкладе активации конститутивной ЫО-синтазы.

3. Предварительное введение ингибитора 1МО-синтазы нитро-1-аргинина в невазоактивной дозе 10 мг/кг, обеспечивающей преимущественное ингибирование индуцибельной 1\Ю-синтазы, оказывает защитное действие при ТШ. ЬГ-нитро-Ьаргинин в дозе 300 мг/кг, которая тотально блокирует продукцию N0 в организме, ингибируя как индуцибельную, так и конститутивную изоформы ЫО-синтазы, таким эффектом не обладает. Это указывает на принципиальную возможность защиты сосудистой системы от повреждения при ТШ путем преимущественного ингибирования индуцибельной N0-синтазы.

4. Предварительная адаптация крыс к коротким неповреждающим стрессорным воздействиям снижает смертность животных при ТШ с 57 до 8%, а также полностью

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Покидышев, Дмитрий Александрович, 1999 год

ЛИТЕРАТУРА

1. Ванин А.Ф. Динитрозильные комплексы железа и S-нитрозотиолы - две возможные формы стабилизации и транспорта оксида азота в биосистемах. // Биохимия, - 1998. т. 63. - вып. 7. - с. 924-938.

2. Ванин А.Ф., Манухина Е.Б., Лапшин A.B., Меерсон Ф.З. Усиление синтеза оксида азота в стенке аорты при экспериментальном инфаркте миокарда. // Бюлл. экспер. биол. и мед. - 1993. - № 8. - с. 142-144.

3. Галаган М.Е., Орановская Е.В., Мордвинцев П.И., Медведев О.С., Ванин А.Ф. Гипотензивный эффект динитрозильных комплексов железа в опытах на бодрствующих животных. // Бюлл. Всесоюзного кардиологического научного центра АМН СССР. - 1988. - №2. - с.75 - 80.

4. Ковалев O.A., Шереметьевская С.К. Емкостная функция системы кровообращения в динамике ответной реакции организма на усиливающий стимул. // Физиол. журн. СССР. -1981. -т.67. -№ 1. -с.95-101.

5. Кулагин В.К., Ковалев O.A., Криворучко Б.И. и др. Стресс и емкостная функция системы кровообращения. // В кн. "Нервные и эндокринные механизмы стресса." Кишинев. - "Штиница", 1980, с. 143-156.

6. Малышев И.Ю., Манухина Е.Б. Стресс, адаптация и оксид азота. // Биохимия - 1998. - т.63. - №7. -:с. 840-853.

7. Манухина Е.Б, Удаление эндотелия устраняет стрессорное снижение адренореактивности аорты. // БЭБиМ. -1990. -т. 110. -№.8. -с. 136-138.

8. Манухина Е.Б., Азаматов 3.3., Малышева Е.В., Малышев И.Ю. Гиперактивация эндотелия при тепловом шоке у крыс разных генетических линий. // Физиол. журнал им. И.М.Сеченова - 1996. - т. 82. - № 5-6. - с.60-66.

9. Манухина Е.Б., Лапшин A.B., Устинова Е.Е., Меерсон Ф.З. Влияние экспериментального инфаркта миокарда и эмоционально-болевого стресса на эндотелийзависимые реакции изолированной аорты крысы. // Физиол. журн. СССР. -1989. - т.75, - №.10. - с.1409-1416.

10. Манухина Е.Б., Малышев И.Ю., Микоян В.Д., Кубрина Л.Н., Ванин А.Ф., (1996). Увеличение продукции оксида азота в органах крысы при тепловом шоке. // Бюлл. экспер. биол. и мед. -т.121. - № 5. - с. 520-523.

11. Меерсон Ф.З. Концепция долговременной адаптации. // М. - "Дело". - 1993. - 138 С.

12. Меерсон Ф.З. Патогенез и предупреждение стрессорных и ишемических повреждений сердца. // М. - Медицина. - 1984. -272 С.

13. Меерсон Ф.З., Пшенникова М.Г. Адаптация к стрессорным ситуациям и физическим нагрузкам // М. - Наука. -1988. -245 С.

14. Реутов В.П., Каюшин Л.П., Сорокина Е.Г. Физиологическая роль цикла окиси азота в организме человека и животных. // Физиология человека. - 1994. - т.20. - №3. - с. 165174.

15. Coiasanti, M., Persichini, Т., Menegazzi, M., Mariotto, S., Giordano, E,, Caldarera, C.M., Sogos, V., Lauro, G.M., Suzuki, H. Induction of nitric oxide synthase mRNA expression. // J. Biol. Chem. -1995. -v. 270. - p.26731-26733.

16. Селезнев С. А. Нарушения кровообращения при тепловом шоке. // В кн. "Травматический шок. Острый живот. Инфаркт миокарда". - Л. - Медицина. - 1967. - с. 25-32.

17. Судаков К.В., Юматов Е.А., Ульянинский Л.С. Гемодинамика при эмоциональных реакциях и эмоциональном стрессе. // Физиол. журн. СССР им И.М.Сеченова -1988. - т. 74. -N.11. - с. 1535-1545.

18. Ульянинский Л.С., Медведев О.С., Бунятян Л.М. и др. Изменение гемодинамики при иммобилизационном стрессе. // Бюлл. экспер. биол. и мед. - 1985. - т. 100. - №.9. - с.282-285.

19. Храброва О.П. Сопоставление гемодинамики и микроциркуляции при травмвтическом шоке. // В кн. "Травматический шок. Острый живот. Инфаркт миокарда." -Л. -Медицина. - 1967. с.37-41.

20. Шепелев А.П..Влияние острого физического перегревания животных на процессы перекисного окисления липидов. // Вопросы мед. химии. -1976. -т.22. - №1, с.47-51

21. Abu-Soud Н.М., Stuehr D.J. Nitric oxide synthases reveal a role for calmodulin in controlling electron transfer.// (1993)Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90, 10769-10772.

22. Abusoud H.M., Wang J.L.,Rousseau D.L., Fukuto J.M., Ignarro L.J., Stuehr D.J. Neuronal nitric oxide synthase self-inactivates by forming a ferrous-nitrosyl complex during aerobic catalysis. //J, Biol. Chem. - 1995. - v.270. - p.22997-23006.

23. Amrani M., Goodwin A.T., Gray C.C., Yacoub M.H. Ageing is associated with reduced basal and stimulated release of nitric oxide by the coronary endothelium. // Acta Physiol. Scand. - 1996 -v.157. - p. 79-84.

24. Andriantsitohaina R., Lagaud G.J., Andre A., Muller B., Stoclet J.C. Effects of cGMP on calcium handling in ATP-stimulated rat resistance arteries. // Amer. J. Physiol. - 1995. - v.268. - H1223-H1231.

25. Aneman A., Backman V., Snygg J. , von Bothmer C, Fandriks L, Pettersson A. Accumulation of an endogenous inhibitor of nitric oxide synthase during graded hemorrhagic shock. // Circ. Shock - 1995. - v.44. - p.111-114.

26. Aoki N., Johnson G., Lefer A.M. Beneficial effects of two forms of NO administration in feline splanchnic artery occlusion shock. //Am. J. Physiol. -1990. - v.258. - p.G275-G281.

27. Arnold W.P., Mittal O.K., Katsuki S., Murad F. Nitric oxide activates guanylate cyclase and increases guanosine 3-5-cyclic monophosphate levels in variouse tissue preparation. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA - 1977. - v.74. - p. 3203-3207.

28. Assreuy, J., Cunha, F.Q., Liew, F.Y., Moncada, S. Feedback inhibition of nitric oxide synthase activity by nitric oxide.// Br. J. Pharmacol. - 1993. - v. 108. - p.833-837.

29. Back K. J., Thiel B.A., Lucas S. Macrophage nitric oxide synthase subunits. Purification, characterisation and role of prosthetic groups and substrate in regulating their association into a dimeric enzyme. // J. Biol. Chem.-1993. - vol.268. - p.21120-21129.

30. Balligand J., Kelly R.A., Marsden P.A., Smith T.W., Michel T. Control of cardiac muscle cell function by an endogenous nitric oxide signalling system.// Proc. Natl. Acad. Sci. USA - 1993. - v.90 -p.347-351.

31. Bassenge E. Coronary vasomotor responses: Role of endothelium and nitrovasodilators. // Cardiovasc. Drugs Ther. - 1994. - v.8. - p.601-610.

32. Bogdan C., Vodovotz Y., Paik J., Mechanism of suppression of nitric oxide synthase expression of interleukin-4 in primary mouse macrophage. // J. Leuk. Biol. -1994. - v. 55. - p.227-233.

33. Bogle R.G., Macalister R.J., Whitley G.S., Vallance P. Induction of N-G-monomethyl-L-arginine uptake: A mechanism for differential inhibition of NO synthases? // Amer. J. Physiol. - 1995. -v.37. - p.H1634-H1642.

34. Bolwby HA., Elanjian SI. Necrosis caused by extravasation of arginine hydrochloride. // Ann. Pharm. Fr. - 1992. - v.26. - p.263-264.

35. Bredt D.S., Snyder S.H. Nitric oxide mediates glutamate-lined enhancement of cGMP levels in the cerebellum. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1989. - v. 86. - p.9030-9033.

36. Bredt D.S., Snyder S.H. Nitric oxide: a physiologic messenger molecule. // Annu. Rev. Biochem. - 1994. - v.63. - p. 175195.

37. Burnet J.C. Coronary endothelial function in health and disease. // Drugs - 1997. - v.53. - Suppl. 1. - p.20-29.

38. Busse R., Fleming I. Regulation and functional consequence of endothelial nitric oxide formation.// Ann. Med. - 1995. -v.27. p.331-340.

39. Busse, R., Mulsch, A., Fleming, I,, Hecker, M.Mechanisms of nitric oxide release from the vascular endothelium. // Circulation, -v.87. -, Suppl. p.V-18-V-25.

40. Carey C., Siegfried M.R., Xin-Liang Ma., Weyrich A.S., Lefer A.M., Antishock and endothelial protective actions of a NO donor in mesenteric ischemia and reperfusion. // Circ. Shock. - 1992. - v.38. -p.209-216.

41. Casino P.R., Kilcoyne C.M., Canon R.O., Quyyumi A.A., Panza Y.A. Impaired endothelium-dependent vascular relaxation in patients with hypercholesterolemia extends beyond the muscarinic receptor. //Am. J. Cardiol. - 1995. - v.75. - No.1. -40-44.

42. Cobb J. P., Natanson C., Quezado ZMN.,Hoffman W.D., Koev C.A., Banks S., Correa R., Levi R., Elin R.J., Hosseini J.M., Danner R.L. Differential hemodynamic effects of L-NMMA in endotoxemic and normal dogs. II Amer. J. Physiol. 1995. - v.37:-H1634-H1642.

43. Cocks T.M., Angus J.A., Campbell J.H., Campbell G.R. Release and properties of endotelium-derived relaxing factor (EDRF)

from endothelial cells in culture. // J. Cell. Physiol. - 1985. - v. 123, -p.310-320.

44. Cooke J.P., Tsao P.S. Arginine: a new therapy for atherosclerosis? // Circulation - 1997,- v.95 - p.311-312.

45. Cooke J.P., Tsao P.S. Cytoprotective effects of nitric oxide. //Circulation - 1993.-v.88 - No.5 - p.2451-2454.

46. Depre C., Vanoverschelde J. L., Goudemant J.F., Mottel I., Hue L. Protection against ischemic injury by nonvasoactive concentrations of nitric oxide synthase inhibitors in the perfused rabbit heart//Circulation. - 1995. - v.92 - p. 1911-1918.

47. Dobashi K., Pahan K., Chahal K., Singh I. Modulation of endogenous antioxidant enzymes by nitric oxide in rat C6 glial cells. // J. Neurochem. -1997. - v.68. - p.1806-1903.

48. Dusting G.J. Nitric oxide in coronary artery disease: roles in atherosclerosis, myocardial reperfusion and heart failure. // In: Myocardial Ischemia: Mechanisms, Reperfusion, Protection, (ed. by M.Karmazyn), Birkhauser Verlag Basel. - Switzerland. - 1996. - pp. 33-55.

49. Egashira K., Suzuki S. Hirooka Y., Kai., Sugimachi M. ,lmaizumi T., Takeshita A. Impaired endothelium-dependet vasodilatation of large epicardical and resistance coronary arteries in patients with essential hypertension: Different responses to acetylcholine and substance P. // Hypertension. - 1995. - v.25. - No.2. - p.201-206.

50. Feelisch M., Biotransformation to nitric oxide of organic nitrates in comparison to other nitrovasodilatators. // Eur. Heart J. -1993. - v.14. - p.123-132.

51. Feinstein, D.L., Galea, E., Aquino, D., Li, G.C., Xu, H, Reis, D. Heat shock protein 70 suppresses astroglial-inducible nitric-oxide synthase expression by decreasing NFkB activation. // J. Biol. Chem. -v.271. - p. 17724-17732.

52. Ferlito S., Galiina M. Nitrite plasma levels in type 1 and 2 diabetics with and without complications. Panminerva Med. - 1998. -v.40 - No.4. - p.304-308.

53. Ferro C.J., Webb D.J. Endothelial dysfunction and hypertension. // Drugs - 1997. - v.53. - Suppl. 1 - p.30-41.

54. Fleming I., Bauersachs J., Fisslthaler B., Busse R. Ca2+-Independent activation of the endothelial nitric oxide synthase in response to tyrosine phosphatase inhibitors and fluid shear stress. // Circ. Res. - 1998. - v.82. - p.686-695.

55. Forsterman U., Trogisch G., Busse R. Species-dependent differences in the nature of endothelium-derived relaxing factor. // Eur. J. Pharmacol. - 1984. - v. 106. - No.3. - p.639-643.

56. Forsterman U.,Closs E.I., Pollock J.S., Nitric oxide synthase isozymes- Characterisation, purification, molecular cloning and functions. // Hypertension.- 1994. - vol.23 .- p.1121-1131.

57. Freiman P.C., Mitchell G.M., Gagnon N.J. et al. Regression of atherosclerosis restores endothelium-dependent vascular relaxation in primates. // Fed. Proc. Am. Soc. Exp. Biol. - 1986. - v.45. p.767.

58. Furchgott R.F. Studies on relaxation of rabbit aorta by sodium nitrate: basis for the proposal that the acid-activatable component of the inhibitory factor from retractor penis is inorganic

nitrate and the endothelium-derived relaxing factor is nitric oxide. // In: Mechanisms of vasodilatation, ed. by Vanhoute P.M. - Raven Press, New York. - 1988. - p.401-414.

59. Galie J., Bauersachs J., Bassenge E., Busse R. Arterial size determines the enhancement of contractile responses after suppression of endothelium-derived relaxing factor formation. // Pflugers Arch. - 1993. - v.422 - p.564-569.

60. Geng Y.J., Libby P. Evidence for apoptosis in advanced human atheroma. Colocalization with interleukin-1 beta-converting enzyme. // Am. J. Phatol., - 1995. - v.147. - p.251-266.

61. Ghosh D.K., Stuehr D..J. Macrophage NO synthase: Characterisation of isolated oxygenase and reductase domains reveals a head-to-head subunit interaction. // Biochemistry - 1995. -v.34. - p.801-807.

62. Goureau O., Lepoive M., Becquet F. Differential regulation of inducible nitric oxide syntase by fibroblast growth factor and transforming growth factor (3 in bovine retinal pigmented epithelial cells: Inverse correlation with cellular proliferation. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA . - 1993. - v.90. - p.4276-4280.

63. Griffith T.M. Modulation of blood flow and tissue perfusion by endothelium derived relaxing factor. // Exper. Physiol. - 1994 -v. 79. -No. 6. -p.873-913.

64. Griffith T.M., Edwards D.M., Lewis M.J. The nature of endothelium-derived vascular relaxant factor. // Nature. - 1984. -V.308.- p.645-647.

65. Griffith T.M., Edwards D.M.,Davies R.L.,Harrison T.J., Evans K.T. EDRF coordinates the behavior of vascular resistance vessels. // Nature - 1987. - v.329 - p.442-445.

66. Gryglewski R.J., Palmer R.M.J., Moncada S. Superoxide anion is involved in the breakdown of endothelium-derived vascular relaxing factor. // Nature. - 1986. - v.320. p.454-456.

67. Halliwell B., Cross C.E. Oxygen-derived species: Their relation to human disease and enviromental stress. // Envirom. Health. Persp. - 1994. - v.102. - No.10. - p.5-12.

68. Han X., Shimoni Y., Giles W.R. An obligatory role for nitric oxide in autonomic control of mammalian heart rate. // J. Physiol. 1994. - v.476. - No.2. - p.309-314.

69. Hare J., Colluci W.S. Role of nitric oxide in the regulation of myocardial function. // Prog. Cardiovasc. Res. - 1995. - p.28. - p. 155166.

70. Hauser G.J., Dayao E.K., Wasserloos K., Pitt B.R., Wong H.R.// HSP inductions inhibits iNOS mRNA expression and attenuates hypotension in endotoxin-challenged rats. // Am. J. Physiol. - 1996. - vol.271. - p.H2529-H2535.

71. Heineman A., Stauber R.E. The role of inducible nitric oxide synthase in vascular hyporeactivity of endotoxin-treated and portal hypertensive rats. // Eur. J. Pharmacol. - 1995. - v.278. - p.87-90.

72. Hemmens B., Mayer B. Enzymology of nitric oxide synthases. // In: Methods in molecular biology, v. 100. Nitric oxide

protocols. Ed. By Titheradge M.A. Humana Press Inc., Totowa, New Jersey.

73. Henry Y.A., Ducastel J., Guissani A. Nitric oxide research from chemistry to biology. // In: EPR spectrosopy of nitrosylated compounds. Ed by Henry Y.A. Ducastel J., Guissani A. - R.G. Landes Company. - 1997.

74. Hishikawa K., Nakaki T., Tsuba M., Esumi H., Ohshima H., Suzuki H., Saruta T., Kato R. Effect of systemic L-arginine administration of hemodynamics and nitric oxide release in man. // Jpn. Heart J. - 1992. - v.33. - p.41-48.

75. Hotchkiss R.S., Karl I.E., Parker J.L., Adams H.R. Inhibition of NO synthesis in septic shock. // Lancet. - 1992. - v.339. - p.434-439.

76. Ignarro L.J. Endothelium-derived nitric oxide: actions and properties. // FASEB - 1989 - v.3. - p.31-36.

77. Ignarro L.J., Buga G.M.,Wood K.,Byrus R. S., Chaudhuri G. Endothelium-derived relaxing factor produced and released from artery and vein is nitric oxide. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -1987. -vol. 84. - p.9265-9269.

78. Ignarro L.J., Burns R.E., Buga G.M., Wood K.S., Chaudhuri G. Pharmacological evidence that endothelium-derived factor is nitric oxide: use of pyrogailoland superoxide dismutase to study endothelium dependent and nitric oxide-elicited vascular smooth muscle relaxation.// J. Pharmacol. Exp. Ther. - 1988. - v.244. - p. 181189.

79. Ischii K., Chang B., Kerwin J.F. N'°-Nitro-L-arginine: potent inhibitor of endothelium-derived relaxing factor formation. // Eur. J. Pharmacol. 1990. - v. 176 - p.219-223.

80. Jordan M.L., Rominski B., Jaquinsgersti A., Geller J., Hoffman R.A. Regulation of inducible nitric oxide production by intracellular calcium. // Surgery - 1995. - v.118. - p.138-146.

81. Jungersten L., Ambring A., Wall B., Wennmalm A. Both physical fitness and acute exercise regulate nitric oxide formation in healthy humans. II J. Appl. Physiol. 1998. - v.82. - No. 3. - p.760-764.

82. Kanner J., Harel S., Granit R. Nitric oxide as an antioxidant. //Arch. Biochem. Biophys. -1991. -v.289. - p. 130-136.

83. Kanner J., Harel S., Granit R. Nitric oxide, an inhibitor of lipid oxidation by lipoxygenase, cyclooxygenase and hemoglobin. // Lipids. - 1992. -v.27. - p.46-49.

84. Kappus H., Dipiock A.T. Tollerance and safety of vitamin E: A toxicological position report. // Free Radical. Biol. Med. - 1992. -v.13. - p.55-74.

85. Kilbourn R.G., Jubran A., Gross S.S., Griffith O.W., Levi R., Adams J., Lodato R.F., Reversal of endotoxin-mediated shock by №-methyl-L-arginine, an inhibitor of nitric oxide synthesis. // Biochem. Biophys. Res. Comm. - 1990. - v. 172. - p. 1132-1138.

86. Kitagawa S., Yamaguchi Y., Sameshima E., Kunitomo M. Differences in endothelium-dependent relaxation in various arteries from Watanbe heritable hyperlipidemic rabbits with increasing age. // Clinic. Exper. Pharm. Physiol. - 1994. - v.21. - p.963-970.

87. Klaubunde R.E., Ritger R.C. NG-monomethyi-L-arginine (NMA) restores arterial blood pressure but reduces cardiac output in a canine model of endotoxic shock. // Biochem. Biophys. Res. Commun. -1991. - v. 178. - p. 1135-40.

88. Koch M.A., Hasser E.M., Shadt Y.C. Influence of nitric oxide on the hemodynamic response to hemorrage in conscious rabbits. // Am. J. Physiol. - 1995. - v.37. -No.1. - p.171-182.

89. Kroncke K.D., Fehsel K., Kolb-Bacholen V. Nitric oxide: Cytotoxity versus cytoprotection - How, Why, When, and Where? // Nitric oxide: Biology and chemistry. - 1997. - v.1. - No.2. - p.107-120.

90. Kung C.F., Luscher T.F. Different mechanisms of endothelial dysfunction with aging and hypertension in rat aorta. // Hypertension - 1995. - v.25. - No.2. - p. 194-200.

91. Lancaster J.R. Stimulation of the diffusion and reaction of endogenously produced nitric oxide. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA -1994. - v.91. -p.8137-8141.

92. Lewis M.J., Shah A.M. Endothelial modulation of myocardial contraction. // Endothelium - 1994. - v.1. - p.237-243.

93. Liu Z.Z., Cui S., Billiar T.R., Dorko K., Halfter W., Geller D.A., Michalopoulos G., Beger H.G., Albina G., Nussler A.K. // J. Leuk. Biol. - 1996. - v.60. - p.382-388.

94. Losano G., Pagliaro P., Gatullo D., Marsh N.A. Control of coronary blood flow by endothelial release of nitric oxide. // Clin. Exp. Pharmacol. Physiol. - 1994 - v.21. - No. 10. - p.783-789.

95. Luscher T.F., Raij L., Vanhoute P.M. Endothelium-dependent vascular responses in normotensive and hypertensive Dah! rats. // Hypertension - 1987 - v,9. - No.2. - p. 157-163.

96. Malyshev, I.Yu., Malugin, A.V., Golubeva, L.Yu, Zenina, T.A., Manukhina, E.B., Mikoyan, V.D., Vanin, A.F. Nitric oxide donor induces HSP70 accumulation in the heart and in cultured cells. // FEBS Lett. - 1996. - v.391. - p.21-23.

97. Malyshev, I.Yu., Manukhina, E.B., Mikoyan, V.D., Kubrina, L.N., Vanin, A.F. Nitric oxide is involved in heat-induced HSP70 accumulation. // FEBS Lett. - 1995. - v.370. - p.159-162.

98. Maragos C.M., Morley D,, Wink D.A., Dunams T.M., Saavedra J.E., Hoffman A., Bove A.A., Isaac L., Hrabie J.A.,Keefer L.K. Complex of NO with nucleophiles as agents for the controlled release of nitric oxide. Vasorelaxant effects. // J. Med. Chem. -1991. v.34. - p.3242-3247.

99. Marietta M.A., Yoon P.S., Iyengar R. Macrophage oxidation of L-arginine to nitrite and nitrate: Nitric oxide is an intermediate. // Biochemistry - 1988. - vl.27. - p.8706-8711.

100. Maseri A., Crea F., Kaski J.C., Cranea T. Mechanisms of angina pectoris in syndrome x. //J. Am. Coll. Cardiol. -1991. - v. 17. -p.499-506.

101. Mason D.T., Bartter F.C. Autonomic regulation of blood volume.//Anesthesiology. - 1968. - v.29. - p.681-692.

102. Mattson D.L., Maeda C.Y., Bachman T.D., Cowley A.W. Inducible nitric oxide synthase and blood pressure. // Hypertension -1998. -v.31. - v. 15-20.

103. McCall T.B., Palmer RMJ., Moncada S. lnterleucin-8 inhibits the induction of nitric oxide synthase in rat peritoneal neutrophiles. // Biochem. Biophys. Res. Commun. - 1992. v.186. - p.680-685.

104. Meerson F.Z., Malyshev l.Yu., Zamotrinsky A.V., Kopylov Yu.N. The role of hsp70 and IP3-DAG mechanism in the adaptive stabilization of strutures and heart protection. // J. Mol. Cell Cardiol. -1996. - v.28. -p.835-843.

105. Meerson F.Z., Manukhina E.B. Stress-limiting systems of the organism and their role in prevention of ischemic damages of the heart. // In: Stress and Heart Disease, ed. by R.E. Beamish, P.K.Singal, N.S.Dhalla. Martinus Nijhoff Publishing, - Canada. - 1984. - p.422-435.

106. Meerson, F.Z., Malyshev l.Yu.: Phenomenon of adaptive stabilization of structures and protection of the heart. // Moscow -Nauka- 1993. - 163 P.

107. Metha K., McQween T., Tucket S. Inhibition by all trans-retinoic acid of tumor necrosis factor and nitric oxide production by peritoneal macrophages. // J. Leuk. Biol. -1994. - v.55. - p.336-342.

108. Minami N., Imai Y., Nishiyama H., Abe K. Role of nitric oxide in the development of vascular aradrenoreceptor desensitization and pressure diuresis in conscious rats. // Hypertension - 1997. - v.29: -p.969-975.

109. Minowa T., Miwa S., Kobayashi S., Enoki T., Zhang X.F., Komuro T,, Iwamuro Y., Masaki T. Inhibitory effect of nitrovasodilators and cyclic GMP on ET-1-activated Ca(2+)-permeable nonselective cation channel in rat aortic smooth muscle cells. // Brit. J. Pharmacol. - 1997. - v.120. - p.1536-1544.

110. Mitsuhata H., Takeuchi H., Saitoh J., Hasome N.. Horiguchi., Shimizu R. An inhibitor of nitric oxide synthase, n(omega)-nitro-l-arginine-methyl ester, attenuates hypotension but does not improve cardiac depression in anaphylaxis in dogs. // Shock. - 1995. -v.3 - No.6. - p.447-453.

111. Moncada S. Nitric oxide. // J. Hypertension - 1994. - v. 12. -Suppl. 10. - p.S35-S39.

112. Moncada S., Higgs A. Molecular mechanisms and theraupeutic strategies related to nitric oxide. // FACEB J. - 1995. -v.9. - p. 1319-1330.

113. Moncada S., Palmer R.M.J., Higgs E.A. Nitric oxide. Physiology, pathophysiology and pharmacology. // Pharmacol. Rev. -1991.-v.43. - No.2. - p.109-142.

114. Moore P.K., alSwayeh O.A., Chong N.W. L-NG-nitroarginine (L-NOARG), a novel, L-arginine-reversible inhibitor of endothelium-dependent vasodilatation in vitro. II Brit. J. Pharmacol. - 1990. - v.99: - p.408-412.

115. Moro M.A., Darley-Usmar V.M., Goodwin D.A., Read N.G., Zamora-Pino R., Feelish M., Radowski M.W., Moncada S. Paradoxical fate and biological action of peroxynitrite on human platelets. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA - 1994. - v. 91. - p.6702-6706.

116. Morton W.E. Occupational habituation to aliphatic nitrates and the withdrawal hazards of coronary disease and hypertetnsion. // J. Occup. Med. - 1977. - v. 19. - p. 197-200.

117. Mugge A. Abnormal endothelial mediated regulation of vascular tone in arteriosclerosis. // Zeit. Eur. Kardiol. - 1994. - v.83, -No. 10. - p.759-767.

118. Muijsers R.B.R., Folkerts G., Henricks P.A.J., Sadeghi-Hashjin G., Nijkamp F.P. Peroxynitrite: a two-faced metabolite of nitric oxide. // Life Sci. - 1997. - v.60. - p. 1833-1845.

119. Mulder M.F., Van Lambalgen A.A., Huisman E., Visser J.J., Van Den Bos G.C., Thijs L.G. /Protective role of NO in the regional hemodynamic changes during acute endotoxemia in rats. // Am. J. Physiol. -1994. - v.266. - p.H1558-H1564.

120. Myers P.R., Minor R.L., Guerra R., Bates J.N., Harrison D.J. Vasorelaxant properties of the endothelium-derived relaxing factor. // Nature. - 1987. - v.327. -p.524-526.

121. Nahir A.M., Shapira D., Scharf Y. Double-blind randomized trial of nitrogen TTS in the treatment of Raynauds phenomenon. // Israel J. Med. Sci. - 1998. - v.22. - p.139-142.

122. Nathan C. Nitric oxide as a secretory product of mammalian cells. // FASEB J. - 1992. - v.6. p.3051-3064.

123. Nava E., Palmer, R. M., Moncada S. Inhibition of oxide synthesis in septic shock: how much is beneficial? // Lancet -1991. -v.338. - p.1555-1557.

124. Nickerson M. Vascular adjustments during the development of shock. //Can. Med. Assoc. J. - 1970. - v. 103. - p.853-859.

125. Nunoshiba, T., deRojas-Walker, T., Wishnok, J.,S., Tannenbaum, S.R. Demple, B. Activation by nitric oxide of an

oxidative-stress response that defends Escherichia coli against activated macrophages. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA - 1993. - v.90 -p.9993-9997.

126. O Donnel J.F., Clowes G.H. The circulatory abnormalities of heat stroke. // N. Engl. J. Med. - 1972. - v.287. - p.734-737.

127. Oswald I.P., Wynn T.A., Sher A. lnterleucin-10 inhibits marophage microbical activity by blocking the endogenous production of TNF-a required as a co-stimulatory factor for IFN-y induced activation. // Proc.Natl. Acad. Sci. USA - 1992. - vol.89. - p.8676-8680.

128. Oyama Y., Kanasaki H., Hittori V., Kanno M. Attenuation of endothelium-dependent relaxation in aorta from diabetic rats. // Eur. J. Pharmacol. - 1986. - v.132. - No.1. - p.75-78.

129. Palmer R.M.J., Ashton D.S., Moncada S. Vascular endothelial cells synthesize nitric oxide from L-arginine. Nature,-1988,-vol. 333. P.664-666.

130. Palmer R.M.J., Ferrige A.G., Moncada S. Nitric oxide release accounts for the biological activity of endothelium-derived relaxing factor. // Nature - 1987. - v.327 - p.524-526.

131. Park S.K., Lin H.L., Murphy S. Nitric oxide regulates nitric oxide synthase-2 gene expression by inhibiting NF-kappa B binding to DNA. // Biochem. J. - 1997. - v.322. - p.609-613.

132. Pelham H.R.B. Speculations on the functions of the major heat shock and glucose-regulated proteins. // Cell - 1986. - v.46. -p.959-961.

133. Peng, H.B., Libby, P., Liao, J.K. induction and stabilization of I kappa B alpha by nitric oxide mediates inhibition of NF-kappa B. // J. Biol. Chem. - 1995. - v.270. - p.14214-14219.

134. Persson M.C., Zetterstrom O., Argenius V., Ihre E., Custaffson L.E., Single-breath nitric oxide measurements in asthmatic patients and smokers. // Lancet - 1994. - v.343. - p. 146147.

135. Petkov G.V., Boev K.K., The role of sarcoplasmic reticulum and sarcoplasmic reticulum Ca2+-ATPase in the smooth muscle tone of the cat gastric fundus. // Pflugers-Arch. - 1996. - v.431. - p.928-935.

136. Rabini R.A., Staffolani R., Fumelli P., Mutus B., Curalota G., Mazzanti L. Decreased nitric oxide synthase activity in platelets from IDDM and NIDDM patients. // Diabetologia - 1998. - v.41. - No.1. -p.101-104.

137. Radomski M.W., Palmer R.M.J., Moncada S. The anti-aggregating properties of vascular endothelium: interactions between prostacyclin and nitric oxide. // Br. J. Pharmacol. - 1987. - v.92. -p.639-646.

138. Ramsey B., De Belder A., Campbell S., Moncada S., Martin J. F. A nitric oxide donors improves uterine artery diastolic blood flow in normal early pregnancy and in women at high risk of preeclampsia. // Eur. J. Clin. Invest. - 1994. - v.24, - p.76-78.

139. Ravichandran L.V., Johns R.A., Rangasamy A. Direct and reversible inhibition of endothelial nitric oxide synthase by nitric oxide. //Amer. J. Physiol. - 1995. - v.37. - p.H2216-H2223.

140. Reckelhoff J.F., Kelum J.A., Blanchard E.J., Bacon E.E.,Wesley A.J., Kruckeberg W.C. Changes in nitric oxide precursor, L-arginine, and metabolites, nitrate and nitrite, with aging.// Life Sci. -v.55. No.24. - p,1895-1902.

141. Rees D.D., Palmer R.M., Moncada S., Role of endothelium-derived nitric oxide in the regulation blood pressure. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA - 1989. - v.86. - p.3375-3378.

142. Reif D.W., Mccreedy S.A. N-nitro-L-arginine and N-monomethyl-L-arginine exhibit a different pattern of inactivation toward the three nitric oxide synthases // Arch. Biochem. Biophys. 1995. - v.320. - p. 170-176.

143. Rotzinger S., Aragon C.M.G. Rogan F., Amir S., Amit Z. The nitric oxide synthase inhibitor NW-nitro-L-arginine methylester attenuates brain catalase activity in vitro. II Life Sci. - 1995. v.56. -p.1321-1324.

144. Roy B., Lepoivre M.,HenryY., Fontecare M. Inhibition of ribonucleotide reductase by nitric oxide derived from thionitrites: Reversible modification of both subunits. // Biochemistry - 1995. -v.34. - p.5411 -5420.

145. Rubanyi G.M., Lorenz R.R., Vanhoutte P.M. Bioassay of emdothelium-derived relaxing factor. // Am. J. Physiol. - 1985. -v.249. - No.1. -p.H95-H101.

146. Rubanyi G.M., Romero J.C..Vanhoutte P.M. Flow induced release of endothelium-derived relaxing factor. // Amer. J. Physiol. -1986. - v.250. - No.6. - Pt2. - p.H1145-H1149.

147. Rundfeldt C., Koch R., Richter A., Mevissen M., Gerecke U., Loscher W. Dose-dependent anticonvulsant and proconvulsant

effects of nitric oxide synthase inhibitors on seisure threshold in a cortical stimulation model in rats. // Eur. J. Pharmacol. - 1995. - v.274. - p.1-3.

148. Salvemini D., Misko T P., Masferrer J.L., Seibert K., Currie M.G., Needleman P. Nitric oxide activates cyclooxygenase enzymes. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA - 1993. - v.90. - p,7240-7244.

149. Sessa WC., Barber C.M., Lynch K.R., Mutation of N-myristoylation site converts endothelial cell nitric oxide synthase from a membrane to a cytosolic protein. // Circ. Res. - 1993. - v.72. -p.921-924.

150. Schmidt H.H., Nau H., Wittfoht W., Gerlach J., Prescher K.E., Klein M.M., Niroomand F., Bohme E. Arginine is a physiological precursor of endothelium-derived nitric oxide. // Eur. J. Pharmacol.-1988. - v. 154. - p.213-216.

151. Shibolet S., Lancaster M.C., Danon Y. Heat stroke: a review. //Aviat. Space Environ. Med. - 1976. - v.47. - p.280-301.

152. Shikano K., Long C.J., Ohlstein E.M., Berkowitz B.A. The comparative pharmacology of endothelium-derived relaxing factor and nitric oxide. // J. Pharmacol. Exp. Ther. - 1988. - v.247. - No.3. -p.873-881.

153. Shinikerth V., Bara A., Mulsh A., Busse R. Pyrrolidinic dithiocarbamate selectively prevents the expression of inducible nitric oxide synthase in the rat aorta. // Eur. J Pharmacol. - 1994. - v.265. -p.83-87.

154. Shulz R., Nava E., Moncada S. Induction and potential biological relevance of a Ca2+-independent nitric oxide synthase in the myocardium. // Br. J. Pharmacol. -1992. - v. 105. - p.575-580.

155. Simonsen U., Prieto D., Delgado J.A., Hernandez M., Resei L., De Tejada I.S., Garsia-Sacristan A. Nitric oxide is involved in the inhibitory neurotransmission and endothelium-dependent relaxations of human small penile arteries. // Clinical. Sci. - 1997. - v.92. - p.269-275.

156. Sreeharan N., Jayacody R.L., Senaratne M.P.J. Endothelium-dependent relaxation and experimental atherosclerosis in the rabbit aorta. // Can. J. Physiol. Pharmacol. - 1986. - v.64. -No.11. - p.1451-1453.

157. Stamler J.S. Redox Signaling: Nitrosylation and related target interaction of nitric oxide. // Cell - 1994. - v.78. - p.931-936.

158. Stamler J.S., Singel D.J., Loscalzo J. Biochemistry of nitric oxide and its redox-activated forms. // Science. - 1992. - v.258. -No.18. - p.1898-1902.

159. Star R.A. Nitric oxide (Southwestern Internal Medicine Conference). //Am. J.Med. Sci. - 1993. - v.306. - No.5. -348-355.

160. Stroes ESG., Kastelein J.J.,Cosentino F., Erkelens D.W.,Wever R., Koomans H.A., Lusher T.F., Rabelink T.J. Tetrahydrobiopterin restores endothelial function in hypercholesterolemia. //J. Clin. Invest. - 1997. - v.99. - p.41-46.

161. Stuehr D.J., Griffith O.W. Mammalian nitric oxide synthases. //Adv. Enzymol. Relat. Areas. Mol. Biol. - 1992. - v.65. - p.287-346.

162. Sunano S., Osugi S., Shimamura K. Blood pressure and impairment of endothelium-dependent relaxation in spontaneously hypertensive rats. // Experientia - 1989. - No..45. - p.705-708.

163. Swierkosz T.A., Mitchei! J.A., Tomlinson T.A. Relationship between different isoforms of nitric oxide synthase and cyclooxygenase in various cell types. // Pol. J. Pharmacol. - 1994. -v.46. - p.587-592.

164. Szabo C., Mitchell J.A., Thiemermann C., Vane J.R Nitric oxide-mediated hyporeactivity to noradrenaline precedes the induction of nitric oxide synthase in endotoxin shock. // Br. J. Pharmacol. - 1993. - v.108. - p.786-792.

165. Takakura K., Goto Y., Kigoshi S., Murahiatsu I. Selective inhibition of sympathetic nerve mediated contraction by L-arginine in lypopolysaccharide-treated tail artery of rats. // Eur. J. Pharm. - 1994. -v.271.-No.2-3.-p.367-370.

166. Thiemerman C., Vane J. Inhibition of nitric oxide synthesis reduces the hypotension induced by bacterial lypopolysaccharides in the rat in vivo. // Eur. J. Pharmacol. - 1990. - v. 182. - No.3. - p.591-595.

167. Uno H., Aracawa T., Fucuda T., Fujiwara H.Y.Y., Higuchi K., Inoue M., Kobayashi K. Nitric oxide stimulates prostaglandin synthesis in cultured rabbit gastric cells. // Prostaglandins - 1997. -v.53. - p.153-162.

168. Vadon-Le-Golf S., Tenu J.P., Nitric oxide biosynthesis in mammals. // In: Nitric Oxide Research: from Chemistry to Biology. EPR spectroscopy of nitrosylated compounds., ed by Henry Y.A., Ducastel J., Guissani A. - R.G. Landes Company. - 1997.

169. Vallance P., Benjamin N., Collier J. The effect of endothelium-derived nitric oxide on ex vivo whole blood platelet

aggregation in man. // Eur J Ciin Pharmacol. - 1992. - v.42. - No.1. -p.37-41.

170. Valiance P., Collier J., Moncada S. Effects of endothelium-derived nitric oxide on peripheral arteriolar tone in man. // Lancet -1989. - No.2. - p.997-1000.

171. Valiance P., Leone A., Calver A., Colier J., Moncada S. Accumulation of an endogenous inhibitor of nitric oxide synthesis in chronic renal failure. // Lancet - 1992. - v.339. - p.572-576,

172. Van Bilsen M., Engles W., van der Vusse G.J., Reneman R.S. Significance of myocardial eicosanoid production. // Mol. Cell Biochem. - 1989. - v.88. - p.113-121.

173. Vanhoute P.M. Inducible nitric oxide synthase and vascular smooth muscle. // Jap. J. Pharmacol. - 1992. - v.58. - Suppl.ll. -p.192.

174. Vanhoutte P.M. Could the abscence of mulfunction of vascular endothelium precipitate the occurence of vasospasm? // J. Moll. Cell. Cardiol. - 1986. - v.18. - No.7. - p.679-689.

175. Vanin A.F. Endothelium-derived relaxing factor is a nitrosyl iron complex with thiol ligands. // FEBS Lett. - 1991. - v.289. -No.1. -p.1-3.

176. Vanin A.F., Malenkova I.V., Serezhencov V.A. Iron catalyzes both decomposition and synthesis of S-nitrosothiols: optical and electron paramagnetic resonance studies. // Nitric oxide: Biology and Chemistry - 1997. - v.3. - p.191-203.

t

177. Vedernicov Y.P., Mordvintcev P.!., Maiencova !.V., Vanin A.F. Similarity between the vasorelaxing activity of dinitrosyl iron cystein complex and endothelium-derived relaxing factor. // Eur. J. Pharmacol. - 1992. -v.211. - p.313-317.

178. Vicroy T.V., Malphurs W.L. Inhibition of nitric oxide synthase activity in cerebral cortical synaptosomes by nitric oxide donors: evidence for feedback autoregulation. // Neurochem. Res. - 1995. -v.20. - p.299-304.

179. Weigert A.L., Higa E.M.S., Niederberger M., McMurtry I.F., Raynolds M., Schrier R.W. Expression and preferential inhibition of inducible nitric oxide synthase in aortas of endotoxemic rats. // J. Am. Soc. Nephrol. - 1995. - v.5. - p.2067-2072.

180. Weiner C.P., Lizasoain I., Baylis S.A. Induction of calcium-dependent nitric oxide synthase by sex hormones. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1994. - v.91. - p.5212-5216.

181. Welch G., Loscalzo J. Nitric oxide and cardiovascular system. // J. Cardiovasc. Surg. - 1994. - v.9. - p.361-371.

182. White A.C., Maloney E.K., Boostani M.R., Hassoun P.M., Fanburg B. L. Nitric oxide increases cellular glutathione levels in rat lung fibroblasts. // Amer. J. Resp. Cell Mol.Biol. - 1995. - v.13. -p.442-448.

183. Wright C.E., Rees D.D., Moncada S. Protective and pathological roles of nitric oxide in endotoxin shock // Cardiovasc. Res. 1992.-v.26.-p.58-55.

184. Wu W., Liuzzi F.J., Schinco F.P., Depto A.S., Li Y„ Mont J.A., Dawson T.M., Snyder S.H. Neuronal nitric oxide synthase is

induced in spinal neurons by traumatic injury. 11 Neuroscience - 1994. -V.61.-N0.4.-p.719-726.

185. Xie Q., Nathan C. The high-output nitric oxide pathway: role and regulation. // J. Leukoc. Biol. - 1994. - v.56. - p.576-582.

186. Xue C.,Rengasamy A., Lecras T.D., Koberna P.A., Dailey G.C., and Johns R.A. Distribution of NOS in normoxic vs. hypoxic rat lung: upregulation of NOS by chronic hypoxia. // Am. J. Physiol. -1994. - v.11. - p.L667-L678.

187. Yoshiyuki M., Noboru T. Possible involvment of 5-llipoxygenase products in endothelium-derived relaxing factor. // J. Pharmacol. Exp. Ther. - 1989. - v.250. - No.3. - p.1055-1060.

188. Young I.S., Torney J.J., Trimble E. R. The effect of ascorbate supplementation on oxidative stress in the streptozotocin diabetic rat. // Free Radical. Biol. Med. - 1992. - v. 13. - p.41-46.

189. Zembowitcz A., Vane J.R. Induction of nitric oxide synthase activity by toxic shock syndrome toxin-1 in a macrophage-monocyte cell line. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1992. - vol.89. - p.2051-2055.

190. Zingarelli B., Capuli A.P., Dirosa M. Dexamethasone prevents vascular failure mediated by nitric oxide in hemorrhage shock. // Shock - 1994. - v.2. - No.3. - p.210-215.