4-гидрокси-1,4-дигидроазоло[5,1-С][1,2,4]триазины: синтез и биологическая активность тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, кандидат наук Дрокин Роман Александрович

• Дрокин Роман Александрович
• кандидат наук
• 2022

Оглавление диссертации кандидат наук Дрокин Роман Александрович

Введение

Глава 1 - Литературный обзор

1.1. Пирроло[2,1-с][1,2,4]триазины

1.2 Пиразоло[5,1 -с][ 1,2,4]триазины

1.3. Имидазо[5,1 -с][ 1,2,4]триазины

1.4. Имидазо[2,1 -с][1,2,4]триазины

1.5. 1,2,3-Триазоло[5,1-с][1,2,4]триазины

1.6. 1,2,4-Триазоло[3,4-с][1,2,4]триазины

1.7. 1,2,4-Триазоло[5,1-с][1,2,4]триазины

1.8. Тетразоло[5,1-с][1,2,4]триазины

Заключение

Глава 2 - Обсуждение результатов

2.1 Виртуальный скрининг т silico 1,4-дигидразоло[5,1-с][1,2,4]триазинов в белки энтеровирусов, ретровирусов, вирусов гриппа, вируса 8АЯБ-СОУ-2

2.2 Разработка методов синтеза стабильных форм нитрокарбонильных соединений с использованием пуш-пульных енаминов, их практическое применение в органическом синтезе

2.3. Синтез 4-гидрокси-1,4-дигидроазоло[5,1-с][1,2,4]триазинов с использованием солей нитрокарбонильных соединений и пуш-пульных енаминов

2.4 Разработка метода функциализации 3-нитро-4-гидрокси-1,4-дигидроазоло[5,1-с][1,2,4]триазинов с использованием нуклеофилов различной природы

2.5. Биологическая активность и антиоксидантные свойства синтезированных 4-гидрокси-1,4-дигидроазоло[5,1-с][1,2,4]триазинов и их производных

Глава 3 - Экспериментальная часть

Заключение

Список сокращений и условных обозначений

Список литературы

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «4-гидрокси-1,4-дигидроазоло[5,1-С][1,2,4]триазины: синтез и биологическая активность»

Введение

Актуальность и степень разработанности темы исследования: Направленный поиск органических соединений, обладающих полезными биологическими свойствами, с целью создания и внедрения новых лекарственных препаратов является одной из важнейших задач, стоящих перед современной органической химией. Наиболее интересным кластером соединений, проявляющим биологическую активность, являются азагетероциклические соединения, к которым относятся как природные алкалоиды, некоторые аминокислоты, нуклеотиды и др., так и синтетические соединения, в основе которых лежит азагетероцикл. К перспективным синтетическим гетероциклическим соединениям можно отнести азоло[5,1-с][1,2,4]триазины - соединения, представляющие огромный интерес из-за их структурного сходства с известными противовирусными препаратами, применяемыми в медицинской практике (триазавирин, ацикловир, ганцикловир, абакавир, диданозин, энтекавир и др.), пуриновыми антиметаболитами (меркаптопурин, флударабин, неларабин, пеметрексед) и другими соединениями, входящими в перечень важнейших лекарственных препаратов. Таким образом, азолотриазины являются перспективным базисом для формирования на их основе соединений с полезной биологической активностью.

Синтез азолотриазинов многоступенчат и зачастую сопровождается низкой селективностью, что ведет к конечному удорожанию продукта. Дизайн недоступных ранее азолотриазинов, разработка селективных и эффективных методов синтеза, является важной, самостоятельной задачей, так как в последние годы значительно увеличилось число публикаций по их синтезу, связанных с поиском биологически активных соединений в отношении известных и новых инфекционных возбудителей.

Цели исследования: является разработка доступных методов синтеза новых азоло[5,1-с][1,2,4]триазинов, изучение возможностей их структурной функционализации, а также исследование биологической активности полученных соединений.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

•Изучить литературные данные по методам синтеза и биологической активности соединений азолотриазиновой природы;

•Провести виртуальный скрининг т silico предполагаемых азоло[5,1-с] [ 1,2,4]триазинов;

•Разработать препаративно доступные методы синтеза ключевых полупродуктов (пуш-пульных енаминов и нитрокарбонильных соединений) для синтеза целевых соединений и оценить возможности их применения в препаративном синтезе;

•Разработать универсальный метод синтеза азоло[5,1-с][1,2,4]триазинов с использованием диазоазолов и полученных СН-активных двухуглеродных синтонов

• Исследовать возможности модификации полученных азоло[5,1-с] [ 1,2,4]триазинов;

•Провести комплекс физико-химических исследований по доказательству структуры синтезированных соединений;

•Изучить биологические свойства целевых азоло[5,1-с][1,2,4]триазинов и соединений, полученных на их основе.

Научная новизна и теоретическая значимость работы:

•На основание литературного обзора предложены структуры азоло[5,1-с][1,2,4]триазиновой природы, проведен их виртуальный скрининг;

•Предложен новый подход к синтезу стабильных форм нитрокарбонильных соединений и показана возможность их применения в препаративном синтезе;

•Разработан новый метод синтеза 3-нитро-4-гидрокси-1,4-дигидроазоло[5,1-с][1,2,4]триазинов с использованием калиевой соли нитроуксусного альдегида, показана возможность модификации триазинового фрагмента, получены экспериментальные данные о предполагаемом механизме протекания реакции;

•Предложен метод синтеза новых 3-нитро-4-гидрокси-4-алкил-1,4-дигидроазоло[5,1-с][1,2,4]триазинов с использованием солей а-нитрокетонов;

•Разработан новый метод синтеза 3-нитро-4-гидрокси-1,4-дигидроазоло[5,1-с] [ 1,2,4]триазинов, 3 -циано-4-гидрокси- 1,4-дигидроазоло[5,1 -с][1,2,4]триазинов, 3 -этоксикарбонил-4-гидрокси- 1,4-дигидроазоло[5,1 -с][1,2,4]триазинов с использованием пуш-пульных енаминов, предположен механизм протекания реакции азосочетания;

•Исследованы биологические свойства полученных азоло[5,1-с][1,2,4]триазинов и их производных.

Практическая значимость работы:

Разработаны простые и доступные методы синтеза стабильных форм нитрокарбонильных соединений, показана возможность применения данных соединений в препаративном синтезе. Синтезированы 3-нитро-4-гидрокси-1,4-дигидроазоло[5,1-с] [ 1,2,4]триазины, 3 -циано-4-гидрокси- 1,4-дигидроазоло[5,1 -с][1,2,4]триазины, 3 -этоксикарбонил-4-гидрокси- 1,4-дигидроазоло[5,1 -с][1,2,4]триазины, 3 -нитро-4-алкил-4-гидрокси-1,4-дигидроазоло[5,1-с][1,2,4]триазины. Выявлено, что новые синтезированные дигидроазоло[5,1-с][1,2,4]триазины обладают противовирусной, антигликирующей и антигликоксидационной активностями. Показана возможность синтезированных соединений вступать во взаимодействие с п-избыточными ароматическими соединениями

с образованием стабильных оН-аддуктов. Для полученных оН-аддуктов 3-нитро-4-гидрокси-1,4-дигидроазоло[5,1-с][1,2,4]триазинов с полифенолами определена антиоксидантная емкость (АОЕ), что позволяет предположить двойную активность -противовирусную и антиоксидантную. Все полученные дигидроазоло[5,1-с][1,2,4]триазины являются близкими аналогами лекарственному препарату «Триазавирин» (натриевая соль 3-нитро-7-метилтио-1,2,4-триазоло[5,1-с]-1,2,4-триазин-4-она, дигидрат), который разрешён к медицинскому применению и используется для лечения гриппа, ОРВИ, клещевого энцефалита, а также применяется для профилактики SARS-CoV-2.

Методология и методы диссертационного исследования

Работа выполнялась последовательно: первоначально был выполнен анализ литературных данных по теме исследования, выявлены перспективные объекты, в отношение которых было целесообразно провести виртуальные расчеты противовирусной активности. На основе полученных материалов выполнен целевой органический синтез с использованием современных подходов и методов. Установление структуры соединений осуществлялось с помощью комплекса физико-химических методов: данных спектроскопии ЯМР 13С, 11Б, 19Р, двумерных корреляций, ИК-спектроскопии, масс-спектрометрии, рентгеноструктурного и элементного анализов.

На защиту выносятся следующие положения:

1. Методы получения стабильных форм нитрокарбонильных соединений с помощью гидролиза пуш-пульных енаминов.

2. Синтез новых 4-гидрокси-1,4-дигидроазоло[5,1-с][1,2,4]триазинов с использованием нитрокарбонильных соединений и пуш-пульных енаминов.

3. Методы и механизм функциализации триазинового фрагмента в полученных 4-гидрокси- 1,4-дигидроазоло[5,1 -с] [ 1,2,4]триазинах.

4. Данные по структуре и физико-химическим свойствам синтезированных гетероциклов.

5. Изучение биологических свойств полученных азогетероциклов.

6. Определение антиоксидантной емкости (АОЕ) ои-аддуктов 3-нитро-4-гидрокси-1,4-дигидроазоло[5,1-с][1,2,4]триазинов с полифенолами.

Личный вклад автора. Диссертант принимал участие в формулировании цели и задач исследовательской работы, в анализе литературных данных, планировании и проведении экспериментов, а также в интерпретации полученных результатов, написании и оформлении публикаций по результатам исследования, в выступлениях на конференциях.

Степень достоверности результатов обеспечена использованием современных физико-химических методов исследования, применением сертифицированного оборудования в центрах коллективного пользования УрФУ и Института органического синтеза им. И.Я. Постовского УрО РАН, а также воспроизводимостью экспериментальных результатов.

Апробация работы. Результаты проведенных исследований доложены в постерных и устных докладах на Всероссийских и международных конференциях: I Международная конференция «Современные синтетические методологии для создания лекарственных препаратов и функциональных материалов» (Екатеринбург, 2017), 3rd Russian Conference on Medicinal Chemistry (Казань, 2017), V Всероссийская конференция с международным участием по органической химии (Владикавказ, 2018), "Актуальные проблемы органической химии" (Новосибирск-Шерегеш, 2018), 4-я российская конференция по медицинской химии с международным участием (Екатеринбург 2019), Марковниковский конгресс по органической химии MC150 (Москва-Казань, 2019), «Химия нитросоединений и родственных азот-кислородных систем (АКС-2019)»(Москва 2019), Актуальные вопросы органической химии и биотехнологии(Екатеринбург, 2020), Первой школы по медицинской химии MedChemSchool-2021 (Новосибирск, 2021)

Публикации. По теме диссертационной работы опубликовано 7 статей в рецензируемых научных журналах, определенных ВАК РФ и Аттестационным советом УрФУ и входящих в международные базы Scopus и Web of Science, а также 8 тезисов и материалов докладов на всероссийских и международных конференциях, 2 патента РФ на изобритения.

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 144 страницах, состоит из оглавления, введения, трех глав: литературный обзор (глава 1), обсуждение результатов (глава 2), экспериментальная часть (глава 3), заключения, списка сокращений и условных обозначений. Диссертация содержит 118 схем, 10 таблиц, 18 рисунков. Библиографический список цитируемой литературы содержит 177 наименований.

Благодарность. Автор выражает глубокую и искреннюю благодарность руководителю работы чл.-корр. РАН профессору Русинову В.Л., доценту к.х.н. Ельцову О.Н. (Уральский федеральный университет, г. Екатеринбург) за проведения исследований спектроскопии ЯМР, к.х.н. Слепухину П.А. (Институт органического синтеза УрО РАН, г. Екатеринбург) за проведение рентгеноструктурных исследований, к.х.н. Щур И.В. (Институт органического синтеза УрО РАН, г. Екатеринбург) за проведение исследований по элементному анализу, исследовательской группе под руководством д.м.н. Зарубаева В.В. (ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера) за исследования

биологической активности ряда синтезированных структур в отношение вируса Коксаки B3 и вируса гриппа, исследовательской группе под руководством академика, д.м.н. Спасова А.А. (Государственный медицинский университет, г. Волгоград) за исследования антигликирующей и антигликоксидационной активности ряда синтезированных структур в отношении противодиабетических мишеней, д.х.н., профессору Уломскому Е.Н. за наставление и всестороннюю помощь в работе, Буторину И.И. за проведение квантово-химических расчетов, Воинкову Е.К. за помощь в проведение исследований и написании публикаций, Горбунову Е.Б. и Газизову Д.А. (Институт органического синтеза УрО РАН, г. Екатеринбург), всем сотрудникам кафедры органической и биомолекулярной химии за поддержку.

****

Результаты получены в рамках выполнения Государственных заданий Министерства науки и высшего образования Российской Федерации, № 4.6351.2017/8.9 (Н687.42Б006/17), № FEUZ-2020-0058 (Н687.42Б.223/20) и Российского фонда фундаментальных исследований (проект 19-33-90086 «Аспиранты»)

Глава 1 - Литературный обзор

В настоящем обзоре обобщены и проанализированы данные по способам синтеза и применению азоло^^-с^^^триазинов, опубликованные в течение последнего десятилетия. Благодаря широкому спектру биологической активности азоло^^-с][1,2,4]триазины представляют интерес для медицинской химии. Описаны 1,2,4-триазины, аннелированные по связи С(3a)-N(8) различными пятичленными азотсодержащими гетероциклами - пирролами, пиразолами, имидазолами, триазолами и тетразолами. В обзоре представлен не только наиболее распространенный метод получения азолотриазинов, заключающийся в азосочетании диазоазолов с различными СН-активными соединениями, но и некоторые специфические методы, например, аннелирование азольного фрагмента на основе 1,2,4-триазина или пиролиз [1,2,4]триазино[3,4-£]тиадиазинов. Рассмотрены химические превращения, с помощью которых происходит построение гетероциклической системы, указаны условия процессов и структуры образующихся продуктов, кратко описана биологическая активность азоло[1,2,4]триазинов. Представленный материал структурирован по увеличению числа атомов азота в азольном цикле - от пирроло[2,1-с][1,2,4]триазинов до тетразоло[5,1-с] [ 1,2,4]триазинов.

Азоло^^-с^^^триазины - бициклические гетероциклические соединения, состоящие из пяти- и шестичленного конденсированных колец (азольного и 1,2,4-триазинового), в которых присутствует мостиковая связь и мостиковый атом азота.

Рисунок 1.1 Рассматриваемые в настоящем обзоре соединения Разнообразие функциональных групп как в азольном кольце, так и в 1,2,4-триазиновом цикле, позволяют варьировать заместители в азолотриазиновой структуре, в том числе получать поликонденсированные азоло^^-с^^^триазины, что обуславливает широкий спектр возможной биологической активности.

Класс азоло[1,2,4]триазинов привлекает интерес из-за структурного сходства с известными противовирусными препаратами (ацикловир, ганцикловир, абакавир, диданозин, энтекавир и др.), пуриновыми антиметаболитами (меркаптопурин, флударабин, неларабин, пеметрексед) и некоторыми другими лекарственными средствами (азатиоприн, аллопуринол и др.), входящими в перечень жизненно необходимых и важнейших лекарственных препаратов. Противовирусный препарат Триазавирин успешно

Я'

используется в медицинской практике в качестве средства для лечения и профилактики гриппа и ОРВИ [1-6].

В последние годы значительно увеличилось число публикаций по синтезу азоло[1,2,4]триазинов, связанных, в основном, с поиском биологически активных соединений, что позволяет утверждать, азоло[1,2,4]триазины являются перспективными скаффолдами для создания соединений с полезной биологической активностью.

Л

О о шч

ТУТ -кт .Д. хт ^г.

но.

т

В1ёапозте ОН Егйасауп'

Рисунок 1.2. Противовирусные препараты

О'

//

ОН Р1ис1агаЬте

Рисунок 1.3. Антиметаболиты

о21ч

X > Н 1 ^

Шн

АгаЛюрппе

О

N.

N

<

А11оригшо1

н

МегсарЬриппе

Рисунок 1.4. Другие лекарственные препараты

Способы синтеза азоло^Д-с^^^триазинов сводятся к двум подходам: достройки 1,2,4-триазинового кольца на основе азольного кольца, либо аннелированию азольного фрагмента к 1,2,4-триазину. Поскольку неизменной ключевой характеристикой рассматриваемых соединений является наличие 1,2,4-триазинового кольца, то методы, основанные на аннелировании азольного цикла, существенно отличаются в зависимости от структуры азольного фрагмента. В подавляющем числе опубликованных работ азоло[1,2,4]триазины были получены путем азосочетания разнообразных диазоазолов с СН-активными двухуглеродными синтонами и последующей циклизацией гидразонов. Данные методы, напротив, схожи для аминоазолов любой структуры.

В обзоре, опубликованном в 2008 году [7], показаны превращения и способы синтеза азоло[5,1-с][1,2,4]триазинов, сгруппированные по синтонным типам: описаны методы постройки азолотриазиновой системы на основе азолов по типу [4+2] и [3+3], а также на основе 1,2,4-триазинов по типу [3+2], [4+1] и [5+0]. В данном обзоре были приведены данные исследований только противовирусной активности азоло[5,1-с] [ 1,2,4]триазинов.

В обзоре [8] представлен синтез, превращения и биологическая активность азоло[5,1-с][1,2,4]триазинов и их близких аналогов - азоло[1,5-а]пиримидинов. Работа охватывает способы синтеза азолотриазинов, авторы ссылаются, по большей части, на собственные работы.

В настоящем обзоре охвачены все способы синтеза азоло^Д-с^^^триазинов, описаны 1,2,4-триазины, аннелированные по связи С(3a)-N(8) с различными пятичленными азотсодержащими гетероциклами - пирролами, пиразолами, имидазолами, триазолами и тетразолами.

1.1. Пирроло[2,1-с][1,2,4]триазины

Ранние были опубликованы работы, в которых пирроло[2,1-с][1,2,4]триазины получали наиболее типичным для азоло[1,2,4]триазинов способом: взаимодействием диазоазолов с различными СН-активными соединениями (малонодинитрил, ацетилацетон, цианацетамид и др.) [7]. Однако в последнее десятилетие было представлено несколько работ, в которых пирроло[2,1-с][1,2,4]триазины получали лишь двумя отличными друг от друга способами. Первый способ синтеза основан на взаимодействии 1 -гидразинилхромено[3,4-с]пиррол-3,4-диона (1.1) с а-бромацетофеноном (2) с образованием пирроло[2,1-с][1,2,4]триазина 1.3 с сопряженной гетероароматической системой, содержащей кумариновый и пирролотриазиновый фрагменты (схема 1.1) [9]. Авторами было установлено, что соединения 1.3 проявляет цитотоксическое действие.

Вг ЕЮН

1.2

Схема 1.1

Второй метод получения пирроло[2,1-с][1,2,4]триазинов был осуществлен модифицированной реакцией Зандмайера. В качестве донора атома азота для внутримолекулярной циклизации триазинового кольца выступает трет-бутил нитрит 1.6, взаимодействующий с аминогруппой фрагмента анилина 1.5а-1 (схема 1.2) [10-12].

ЕЮН

120°

1.5а

1.6

1.4а

1.5Ь-1

V N 5 II3 6 1.4Ь-1

г. МеСИ, Л, 1/6-24 Ь 24-99%

Соед. 1.4,1.5 Я1 Я2 Я3 Выход, %

а н - н 83а, 78ь

Ь н н н 92а, 71е

c н 9-Вг н 56е

и н 9-ОМе н 44е

e н н Ме 99е

f н н Вг 64е

н 8-Ме н 67е

И н 10-Ме н 54е

1 н 11-Ме н 24е

СОЖРИ н н 70е

к СОЖРИ н Ме 80е

1 н н Сн2Он 66е

а - EtOH, [20°с

ь - БЮИ, П, 8И с - МеСК П

Схема 1.2

Представленные пирроло[2,1-с][1,2,4]триазины 1.4а-1 проявили активность в отношении фитопатогенных грибов [12].

1.2 Пиразоло[5,1-с][1,2,4]триазины

Наиболее распространенным способом синтеза пиразоло[5,1-с][1,2,4]триазинов является азосочетание диазопиразолов 1.7 с разнообразными синтетическими эквивалентами, позволяющими вводить в 1,2,4-триазиновый цикл различные заместители, а также получать полигетероароматические структуры. Условия проведения диазотирования и азосочетания типичны для этого типа реакций - их проводят при пониженных температурах, варьируя кислоты для диазотирования и условия для азосочетания. Основным требованием к выбору синтонов является наличие электроноакцепторных групп.

Синтонами, приводящими к получению 4-незамещенных пиразоло[5,1-с][1,2,4]триазинов 1.9, являются производные енаминов или енолятов 1.8, получаемых щелочным гидролизом соответствующих енаминов (схема 1.3) [13-23].

О

г. АсСЖа ог АсОН*Р1репс1те ог Ру

Соед. 1.7 R2 Соед. 1.8 (Het)Ar R3 Соед. 1.9 Выход, % Ссылка

Het R

а Ph H а ЕЮОС О я MeO ONa а 81 13

Ь Me Ь 88

с H с 88

а а а 89

е Ш2 е 92

а Ph H f -У У о2 ONa f 80 14

а Ph H ё /—* Ч^сГ Вг NMe2 ё 70 15

Ь 4-MeO- C4H6 И 82

с Me Ph 1 87

а H Ph И NMe2 или ONa 90 16

а Ph H к 71

е H CN 1 70

Продолжение схемы 1.3

a Ph H 1 О "V NMe2 п 75 17

a Ph H \ * « / РЬ ONa О 84 18

e H CN р 80

Het R NMe2 19

a Ph H к N0 РЬ^ТГ* К'* / Я Ph q 93

и H Ph г 93

e H CN 95

а Ph H 1 Р- Ш г 93

и H Ph и 93

е H CN V 95

а Ph H т * ___ 1 о NMe2 или ONa w 68 20

и H Ph X 76

е H CN У 68

с Me Ph п NMe2 z 80 21

а Ph H О ONa аа 75 22

ё 4- Me- C6H4 H аЬ 73

И 4-а- C6H4 H ас 71

1 2- Naph H ай 79

и H Ph ае 77

е H CN af 77

f * N—4 __(/ У-* р са NMe2 76 23

Схема 1.3

Полученные соединения обладают антимикробной, противогрибковой [13] и антиоксидантной активностью [23].

Азасочетание 3-этил-4-(4-фторфенил)-пиразол-5-диазоний хлорида с

хлорацетальдегидом 1.10 приводит к образованию 3-хлор-7-этил-8-(4-фторфенил)пиразоло[5,1-с][1,2,4]триазина 1.11 (схема 1.4). Соединение рассматривают в качестве потенциальных ингибиторов нуклеаз [24].

Дмн С1-

ЕЮН

О'

1.71 1.10 1.11 (4%)

Схема 1.4

Была продемонстрирована способность 3-нитро-8-этоксикарбонилпиразоло[5,1-с][1,2,4]триазина 1.12, полученного взаимодействием 3-диазо-4-этоксикарбонилпиразола 1.7к с калиевой солью нитроацетальдегида 1.13, к нуклеофильному присоединению молекулы воды с образованием 3-нитро-4-гидрокси-8-этоксикарбонил-1,4-дигидропиразоло[5,1-с][1,2,4]триазина 1.14 (схема 1.5) [25].

14-

к+

С1-+

НС1

N.

ЕЮОС

ОН

н,о

14-

хт

N0,

ЕЮОС

N Н

ЕЮОС

1.7к 1.13 1.12 1.14 (49%)

Схема 1.5

Енамин - 6-диметиламинометилен-6,7,8,9-тетрагидробензо[7]аннулен-5-он 1.15 -позволяет азасочетанием с 3-фенилпиразол-5-диазоний нитратом 1.7а получить 2-фенил-7,8-дигидробензо[6,7]циклогепта[1,2-е]пиразоло[5,1-с][1,2,4]триазин 1.16, содержащий циклогептадиеновый фрагмент (схема 1.6) [26].

Схема 1.6

Взаимодействие 5-диазопиразолов 1.7к,1,т с калиевой солью нитроацетонитрила 1.17а в качестве азокомпоненты приводит к получению 3-нитро-4-аминопиразоло[5,1-с][1,2,4]триазинов 1.18 после внутримолекулярной термической циклизации с участием нитрильной группы (схема 1.7) [27].

N11,

К1 С1- _ АсОК N

'2 К2 Я2

1.7к,1,т

1.17а

Я

1—(/

лг

N0,

1Г

1.18

Соед. 1.7 R2 Соед. 18 Выход, %

к H COOEt а 48

1 SMe CN Ь 45

т SMe COOEt с 42

Схема 1.7

Аналогично проходят реакции 3,4-динитро-5-диазопиразола 1.19 и 4,4'-динитро-2#,2'#-3,3'-бипиразол-5,5'-бисдиазоний сульфата 1.20 с натриевой солью нитроацетонитрила 1.17Ь (схема 1.8) [28-30]. В случае с димером пиразоло[5,1-с][1,2,4]триазина 1.22 после азосочетания выделяют димер соответствующего гидразона, который циклизуют при кипячении в смеси метанол-вода [28].

1ч1Н2

Н2804

N.

О^

N

N0

N0

О^

1.19

^ын 804

К02 4

N02 1.17Ь

О^

N0

О^

Ш2 1.17Ь

у N0, N02 АН2 1.22 (88%)

Схема 1.8

Широкое распространение для синтеза 4-аминопиразоло[5,1-с][1,2,4]триазинов 1.23 получили синтоны - производные циануксусной кислоты 1.24: этилцианацетат, цианацетамид (в том числе вторичные амиды), циантиоацетамид, малонодинитрил и др. (схема 1.9) [31-65]. Метиленовый фрагмент в молекуле (бензо)тиазолоацетонитрила или бензимидазолоацетонитрила также обладает достаточной СН-активностью для взаимодействия с солями диазопиразолов 1.7. При проведении азосочетания выделяют образующийся гидразон, который циклизуют при кипячении в уксусной кислоте. С другой стороны, в ряде случаев наблюдается самопроизвольная внутримолекулярная циклизация гидразонов с участием нитрильной группы. Разнообразные заместители в триазиновом цикле придают соединениям антиоксидантную [31-36], антимикробную [33,34,37-39,59,60], противоопухолевую [33,40-42,58,62,63], противогрибковую [33,34,60] активность, ингибирующее действие различных нуклеаз [24]. Соединения

рассматриваются авторами в качестве корректора гена СБТЯ для терапии муковисцидоза [65].

1ЧН2

п1 _/-МНСГ . Ас(Жа , /^А^*3

Гк2+ ог Ру;АсОН

Я2 ¿2

1.7 1.24 1.23

Соед. 1.7 Я1 Я2 Соед. 1.24 Я3 Соед. 1.23 Выход, % Ссылка

j Бг 4-Б-СбН4 a СОн а 70 24

П н Ь 54

Бг Ь СМ с 51

o 2-Индолил Н c ОУ и 46 31

l 8Ме СМ и о2 е 79 32

p Ме о c (ХУ f 63 33

Ь СМ 65

е СООБг И 74

f ш А 1 75

f * N—4 _п У-* ё со- ё - 34

а сон к 78

с (XV- 1 77

f ш А т 65

И -СО]МН-СбН4-о-ОН п 88

1 -СОМН-СбН4-о-МО2 0 78

o 2-Индолил Н j О .ЛАХ н р 79 35

f * n-4 _п у-* q 68

p Ме ЧХ-1 о г 82

f * N—4 _Я У-* к Н СОСЖ s 80 36

Продолжение схемы 1.9

q КН2 т Ви Ь СК t 43 37

f * N \ _(/ У-* 1 О Б-Л ) Н ССЖН2 и 80 38

/-\

Г КН-РИ О / н ссшн2 Ь СК V 55

f * N—4 _я У-* т О н w 84 39

l 8Ме СК п г! ^ о /Г N О X 53 40

* 0 СБОДг У 76

~ 1 # е сооБг z 73

s Ь СК аа 71

ч Д. А Р СОКН2 аЬ 67

^^ N С1 ч СОКНРИ ас 72

* ГтХ* 0 СБОДг аа 75

t иСЛ^ Ь СК ае 77

* 0 СБОДг af 71 41

и Г 1Г т

к Ь СК аё 73

v * о Ь СК аИ 81

w КНРИ * —N РЬ Ь СК а1 68 42

a РИ Н г (Х- Л и! РЬ 78 43

Продолжение схемы 1.9

x МНРИ Г^ГУ-О Ь СМ ак 87 44

у 1-Морфолинил СМ Ь СМ а1 88 45

z 1 -Пиперидинил ат 75

aa 1 -Пирролидинил ап 70

аЬ Ме -М=М-С6Н4-4-С1 Ь СМ ао 64 46

ac 3-Индолил Н ь СМ аР 81 47

уЪ аЧ 45

g 4-Ме-СбН4 Н г £ ° •у^г аг 66 48

пи * 6- и О N' Р11 'Хо а$ 71 49

a РИ Н V О аг 78 50

а РИ Н w •V аи 58 51

f * n-4 _(/ У-* X н av 91 52

ае * N \ -рг Вг aw 88

f * N—4 _(/ У-* у 8 н н Й ах 78

z и н н и аУ 84

f * N \ _(/ У-* аа о ш'к— az 83 53

Продолжение схемы 1.9

! 8Ме ем аЬ о Ьа 60 54

af * С¥ъ Ь ем ЬЬ 80 55

Р еокН2 Ьс 75

о С8Ж2 1x1 85

и Н РИ о С8Ж2 Ье 50 56

c Ме Ьf 54

а8 Ме е еооБг Ьц 67 57

аИ -м=м-евН4-4-мо2 ЬИ 83

а1 -М=М-СбН4-4-ОМе Ы 70

аЬ -N=N^<№-4-0 Ь| 69

а| -М=М-СбН4-4-Ме Ьк 64

ак -М=М-СбН4-3-МО2 1)1 80

а1 -М=М-СбН4-3-ОМе Ьт 74

ат -N=N^<№-3-0 Ьп 76

ап -М=М-СбН4-3-Ме Ьо 65

ао -м=:ы-СбН4-2-да2 Ьр 86

аР -М=М-СбН4-2-ОМе ья 74

аЯ -N=N^<№-2-0 Ьг 73

аг -М=М-СбН4-2-Ме Ь$ 70

f * N—4 ас о А XV н Ы 50 58

f * N"4 е еооБг Ьи 69 59

Р Ме О Ьу 43

а$ # Обсо е еооБг Ьw 60 60

а1 Н Н аи еожеооБг Ьх 77 61

аи Циклопроп ил Н Ьу 86

а РИ Н Ьz 78

ак Н еооБг са 90

ау КН2 -м=м-евН4-4-м=м-ри Ь ем сЬ 80 62

aw * ЕЮ'^О у'чЭМе ОМе ь СМ сс - 63

ах РИ СООБг ь СМ си 70 64

ае СОРИ се 65

аУ Ме 3,4-С12-С6Нэ е СООБг с1 77 65

Схема 1.9

Азосочетание 4,6-диметил-2Н-пиразоло[3,4-Ь]пиридин-3-диазоний хлорида (1.71) с М,М'-(1,2-фенилен)бис(2-цианацетамидом) 1.25 приводит к получению М,М'-(1,2-фенилен)бис(4-амино-8,10-диметилпиридо[2',3':3,4]пиразоло[5,1 -с][ 1,2,4] триазин-3-карбоксамида) 1.26 (схема 1.10). Соединение 1.26 проявляет антиоксидантную активность [34].

Я-? I +

о .о

>^N11 НМ-

СМ

N0

1.7Г

1.25

1.26 (65%)

Схема 1.10

3,8-Дифенил-4-аминопиразоло[5,1-с][1,2,4]триазин 1.27 был получен из 3-диазо-4-фенилпиразолил хлорида 1.7й и 2-фенил-3-(пиперидин-1-ил)акрилонитрила 1.28 по реакции, аналогичной реакции Яппа-Клингеманна, с отщеплением пиперидин-1-карбольдегида (схема 1.11) [66].

РЬ

+

N

ЕЮН

К-

хт

РЬ

N

РЬ

1.7(1

1.28

1.27 (87%)

Схема 1.11

Азокомпоненты с несколькими реакционными центрами позволяют получать трициклические производные пиразоло[5,1-с][1,2,4]триазинов. Так, при взаимодействии диазопиразола 1.7р с 2-аминопроп-1-ен-1,1,3-трикарбонитрилом 1.29 был получен 4-аминопиразоло[5,1-с][1,2,4]триазин 1.30, самопроизвольно зациклизовавшийся в пиразоло[5,1-с]пиридо[2,3-е][1,2,4]триазин 1.31 (схема 1.12) [33].

1.7р 1.29 1.30 1.31 (68%)

Схема 1.12

Наличие карбонильной или сложноэфирной и нитрильной групп в молекуле гидразона, образующегося на стадии азосочетания, позволяет циклизации протекать либо с участием нитрильной группы с образованием аминогруппы в положении 4, либо с участием карбонильной (сложноэфирной группы) с образованием пиразоло[5,1-с][1,2,4]триазин-4-онов (схема 1.13) [42,44,55,64,66]. Получаемые при азосочетании диазопиразолов 1.7 с этилцианацетатом 1.32 или бензоилацетонитрилом 1.33 гидразоны либо самопроизвольно замыкались с образованием пиразоло[5,1-с][1,2,4]триазинов 1.34, либо их циклизовали кипячением в уксусной кислоте или пиридине. Соединения проявили антиоксидантную активность [64].

Я4

, а- II АсСШа /^А^СМ

+ А/СК -- Я —^ | Т

уК АсОН

¿2 2 ОГРу

1.7 1.24е,1.24ае 1.32

Соед. 1.7 R1 R2 Азокомп. R3 R4 Соед. 1.32 Выход, % Ссылка

w NHPh * \---N 1.24е OEt OH а 64 42

X NHPh ^ГУ-О 1.24е OEt OH Ь 81 44

af * ^ N—4 (ТУЧ / Б СБ3 1.24е OEt OH с 68 55

ах Ph COOEt 1.24е OEt OH а 65 64

аг * N \ „ // V--* N / 1.24е OEt OH е 71 66

сИЗ

1.24ае РИ РИ f 66

Схема 1.13

Несоответствие данных, полученных в работах [42,55] заставляет усомниться в достоверности информации. Авторы утверждают, что циклизация гидразонов в уксусной кислоте, полученных при азосочетании диазопиразолов с этилцианацетатом, проходит по сложноэфирной группе с образованием 3-циано-4-гидроксипиразоло[5,1-с][1,2,4]триазинов 1.32а,с. Однако в работах [41,44,57,59,66] утверждают обратное: циклизация идет по нитрильной группе с образованием 4-аминопиразоло[5,1-с][1,2,4]триазинов 1.23. В работе [64] циклизацию проводили в пиридине, основные свойства которого действительно могут сместить равновесие реакции циклизации в сторону продуктов 1.32 (схема 1.14).

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Дрокин Роман Александрович, 2022 год

// ЯН

А N1

2.14а-к

EWG

Ц 2.18,2.19

Л

^ НС1

он

П, 6Ь

//"-»"у

К—( I II

N

н

2.20а-к,2.21а^

EWG

Соединения 2.20 Заместители Выход соединений, %

Я X EWG

a Н N CN 77

Ь Ме N CN 71

c 8Ме N CN 81

(I сооБг N CN 88

e РЬ N CN 56

{ СБэ N CN 55

2 а-ТЫепу1 N CN 45

Ь Н CCOOEt CN 70

1 N CN 79

1 8-«Рг N CN 82

к S-propargy1 N CN 68

Соединения 2.21

а Н N COOEt 80

Ь Ме N COOEt 77

с SMe N COOEt 69

I сооБг N COOEt 81

е СБэ N COOEt 49

{ SEt N COOEt 65

2 Н CCOOEt COOEt 90

Схема 2.7

1-Морфолино-2-цианоэтилен 2.18 получен по описанному в литературе методу, заключающемуся в тройной конденсации циануксусной кислоты 2.22 с морфолином 2.3 и триэтилортоформиатом 2.2а [174]. В данном случае использование морфолина в качестве вторичного амина обуславливается его доступностью и высоким выходом целевого соединения 18 (Схема 8).

1чс^соон + нс((Ш)3 +

2.22 2.2а

2.3 Н

120 °С 4Ь *

80%

Схема 2.8

1-Морфолино-2-этоксикарбонилэтилен 2.19 был получен в результате реакции присоединения с использованием морфолина 2.3 и этилпропионата 2.23 при пониженных

температурах с последующей концентрацией и хроматографической очисткой последнего (Схема 2.9).

Полученные 3-циано-4-гидрокси-1,4-дигидроазоло[5,1-с][1,2,4]триазины 2.20а-к и 3-этоксикарбонил-4-гидрокси-1,4-дигидроазоло[5,1-с][1,2,4]триазины 2.21а-£ ранее не описаны и представлены впервые.

В спектрах 1Н ЯМР соединений 2.201-к присутствуют два характеристичных сигнала соответствующих сигналу протона Н4 - атома триазинового кольца в области 5 = 6.4-6.6 м.д. в виде дублета, а также сигнал в области 5 = 8.1-8.2 м.д. в виде дублета соответствующий гидроксильной группе, а также сигналы заместителей в азольном цикле. Аналогично в спектрах 13С ЯМР присутствует характеристичный сигнал в области 5 = 7274 м.д. (С4). Структура соединений 2.20Ь подтверждена данными рентгеноструктурного анализа (Рис. 2.13).

Для спектров 1Н ЯМР соединений 2.21а-£, аналогично соединениям 15а-к и 20а-к, характерными являются сигналы -протона Н4 - атома триазинового кольца в области 5 = 6.3-6.5 м.д., а также сигнал в области 5 = 8.0-8.2 м.д. соответствующий гидроксильной группе и сигналы заместителей в азольном цикле.

Рисунок - 2.13 Молекулярная структура соединения 2.20Ь согласно данным рентгеноструктурного анализа. Атомы представлены эллипсоидами тепловых колебаний с 50% вероятностью

СООЕ!

^^СООКЛ 2.23

95%

2.19

Схема 2.9

В случае проведение реакции азосочетания солей азолилдиазония 2.14Ь с 1-морфолино-2-цианоэтиленом 2.18 в ацетатном буфере выход целевых продуктов снижался до 25-30%, а также наблюдался побочный продукт, который выделить индивидуально не удалось. Из реакционной массы был выращен кристалл и методом рентгеноструктурного анализа получены данные, подтверждающие структуру побочного соединения 2.24 (Рис. 2.14).

Рисунок - 2.14 Молекулярная структура соединения 2.24 согласно данным рентгеноструктурного анализа. Атомы представлены эллипсоидами тепловых колебаний с 50% вероятностью

Полученные данные позволяют предположить механизм реакции азосочетания, в процессе которого образуется гидразон 25. Дальнейшая внутримолекулярная циклизация гидразона 25 может протекать по двум направлениям, с участием одного из двух конкурирующих электрофильных реакционных центров (атомы углерода альдегидной либо нитрильной группы) приводя к соответствующим азолотриазинам 20 и 24 (Схема 2.10).

ОН

Схема 2.10

2.4 Разработка метода функциализации 3-нитро-4-гидрокси-1,4-дигидроазоло[5,1-с][1,2,4]триазинов с использованием нуклеофилов различной природы

Известно, что в качестве объектов нуклеофильного присоединения нитроазины обладают высокой реакционной способностью. Их склонность вступать в реакции нуклеофильного присоединения в литературе представлена широко, однако стабильность образующихся при этом оН-аддуктов не всегда очевидна. 3-Нитро-4-гидрокси-1,4-дигидроазоло[5,1-с][1,2,4]триазины 2.15с и 2.15И, в условиях кислотного катализа (трифторуксусная кислота), вступают во взаимодействие с ^-избыточными ароматическими соединениями ^-Н а-Г с образованием стабильных продуктов С4-присоединения 2.26а-1", 2.27аГ (Схема 2.11).

ОН N11 N11

^И^Лг' 2 *иН N^^^N02 [О] N^^^N02

х'А 4 -- X" | Т X > X' I Т

^^

Н н 83-94%

2.15с,2.1511 2.26а-1": ХСвМе, Y=N

2.27а-Г: Х=СН, У=ССООЕ1 [О]: БВ<2, 02) РГОА, К3[Ре(С1У)6]

2.28

ОМе

№1-Н =

V Оч, -.О-н-О

N Ме

Схема 2.11

Полученные а^аддукты оказываются стабильными системами и не подвергаются окислению действием классических дегидрирующих агентов (DDQ, O2, PШA, Kз[Fe(CN)6]) до соответствующих продуктов 2.28.

В спектрах 1Н ЯМР аддуктов 2.26-1", 2.27аГ присутствуют характеристические сигналы МН-группы в области 11.3-13.3 м.д., синглет протона при С4-атоме в области 6.87.2 м.д., а также сигналы, соответствующие протонам азольной части молекулы и нуклеофильного фрагмента.

При рассмотрении механизма взаимодействия рассматриваемых 3-нитро-4-гидрокси-1,4-дигидроазоло[5,1-с][1,2,4]триазинов 2.15с, 2.15И с нуклеофилами среди возможных вариантов логично остановиться на наиболее вероятных: по типу бимолекулярного нуклеофильного замещения ^N2) и отщепления-присоединения A)). Для присоединения нуклеофила (№) можно предположить два пути образования а^ аддукта (Путь 1 и Путь 2) (Схема 2.12).

он

он

N11

-НО- (ПуТЬ1)

н

н

-н2о

Nu

N11

У

н

Схема 2.12

(Путь 2)

Для определения приоритетного направления протекания реакции было проведено алкилирование соединения 2.15с по атому N азолотриазиновой системы. Алкилпроизводное 2.29 представляет собой неспособную к диссоциации закрепленную форму ковалентного сольвата (Схема 2.13).

Триазолотриазин 2.15с алкилировали метилиодидом в присутствии диизопропилэтиламина в ДМФА. Строение соединения 2.29 было подтверждено методами 1Н, 13С, двухмерной ЯМР спектроскопии, ИК спектроскопии, данными элементного анализа.

Установлено, что полученное соединение 2.29 не вступает во взаимодействие с нуклеофильными агентами в исследуемых условиях. Поскольку введение алкильной группы по атому N нитроазолотриазина 2.15с не должно существенно влиять на протекание реакции по механизму SN2 (Путь 1, Схема 2.12) можно сделать вывод, что взаимодействие нитроазолотриазина 2.15с с вероятнее всего осуществляется по механизму отщепления-присоединения (Б^Е-А), Путь 2, Схема 12).

Структурное сходство 3 -нитро-4-гидрокси- 1,4-дигидроазоло[5,1-с][1,2,4]триазинов с 6-нитроазоло[1,5-а]пиримидинами дает основание предполагать о возможном подобии химических свойств этих классов соединений, что находит подтверждение в стабильности и устойчивости к окислению их 1,4-дигидропроизводных. В тоже время, нами установлено, что, в отличие от ан-аддуктов, дигидропроизводные 2.26-1", 2.27а-1 в условиях восстановления нитрогруппы не претерпевают ароматизацию

| 41%

Н 2.15с

2.29

Схема 2.13

дигидротриазинового цикла. В условиях восстановления нитрогруппы нами были получены только соответствующие 3-амино-1,4-дигидро-4-К-азоло[5,1-с]триазины 2.30а-1 2.31а1 (Схема 2.14).

Nu

N11

Nu

X

*Н2 [Н]

-«—*

х I У

■»• X

N112

Х=С8Ме, Y=N Х=СН, У=ССО(Ж

2.26а-1, 2.27а-Г

Н

н 46-86%

2.30а-Г, 2.31а-Г

Схема 2.14

Для восстановления нитрогруппы в ан-аддуктах 2.26-1", 2.27а1 были использованы различные условия восстановления: для аддуктов 2.26а1 применялся дитионит натрия в водно-щелочном растворе (поскольку каталитическое гидрирование сопровождается частичным гидрогенолизом метилсульфанильной группы, что затрудняет выделение целевого продукта), для аддуктов 2.27а-Г, напротив, восстановление нитрогруппы осуществлялось водородом на палладиевом катализаторе (восстановление дитионитом в основной среде недопустимо, вследствие легкого гидролиза этоксикарбонильной группы пиразольного фрагмента молекулы). В спектрах 1Н ЯМР наблюдается: смещение сигналов КН-группы и протона при С4-атоме в область более сильного поля (при 9.5-10.2 и 5.8-6.0 м.д. соответственно), возникновение уширенного синглета в области 5.4-5.6 м.д., соответствующего аминогруппе, присутствие сигналов протонов нуклеофильного фрагмента и азольной части молекулы. Образующиеся 3-аминоазолотриазины 2.30а1 и 2.31а1 в кристаллическом состоянии представляют собой стабильные соединения; в тоже время растворы этих соединений весьма неустойчивы, что затрудняет выделение последних из реакционной массы после проведения каталитического гидрирования.

Для окисления аминопроизводных 2.30а1 и 2.31а1 наиболее приемлемым окислителем является дихлордицианобензохинон (DDQ) в спиртовой среде, поскольку в случае использования других окислителей (перманганат калия, пероксид водорода, гексацианоферрата калия, персульфат аммония, фенилйоддиацетат) процесс либо протекал чрезвычайно медленно, либо, что чаще всего наблюдалось образование многочисленных побочных продуктов и осмолением реакционной массы.

В результате проведенных превращений были выделены с высокими выходами (9098%) соответствующие ароматические производные 3-амино-азоло[5,1-с]триазины 2.32а-1 2.33а1 (Схема 2.15).

N11

N11

У

N

N Н

СН3ОН

N112

90-98%

2.30а-Г: Х=С8Ме, Y=N 2.31а-Г: Х=СН, У=ССООЕ1

2.32а-С: Х=С8Ме, Y=N 2.33а-Г: Х=СН, У=ССООЕ1

Схема 2.15

В спектрах ЯМР 1Н окисленных продуктов 2.32 а-1", 2.33а-Г наблюдается исчезновение резонансных сигналов протонов при атомах С4 и М1, а также смещение в область более слабого поля (из 5.4-5.6 м.д. до 6.2-6.6 м.д.) сигналов, соответствующих аминогруппе. Кроме того, присутствуют сигналы характерные для азольной части молекулы и введенного нуклеофильного фрагмента.

Таким образом, исследованы свойства а^аддуктов 3-нитро-1,4-дигидроазоло[5,1-с]триазинов в качестве базовых субстратов в реакции нуклеофильного замещения, на основе экспериментальных данных предположен механизм взаимодействия нитроазолотриазинов с нуклеофильными агентами.

Изучив способ модификации четвёртого положения в 3-нитро-1,4-дигидроазоло[5,1-с]триазинах 2.15а-И и в соответствии с прогнозами биологической активности, в 3-нитро-4-гидрокси-1,4-дигидроазоло[5,1-с][1,2,4]триазины 2.15а-И были введены фрагменты полифенольной природы.

Условия синтеза а^аддуктов с полифенолами не удалось унифицировать в одной процедуре, из-за разной реакционной способности последних и их стабильности в реакционной среде. Для получения желаемых аддуктов исходные 3-нитро-4-гидрокси-1,4-дигидроазоло[5,1-с][1,2,4]триазины 2.15а,с,Г кипятили с обратным холодильником или выдерживали при комнатной температуре с соответствующими полифенолами (резорцин 2.34, флороглюцин 2.35, пирогаллол 2.36, пирокатехин 2.37) в различных растворителях: ацетонитриле, этаноле или трифторуксусной кислоте. В спектрах ЯМР 1Н о-аддуктов отсутствуют сигналы, соответствующие паре Н4-ОН, вместо них появляется одиночный пик, соответствующий резонансу протона Н4, а также сигналы протонов полифенольного фрагмента (Схема 2.16).

он

rT^vOH

NO,

2.15а, 2.15с, 2.15f

N' Н

n-^n

NO,

II

N

R: а=Н, c=SMe, f=CF3

Н 2.34а-с, 60-78% 2.35а-с, 55-73% 2.36а-с, 47-84% 2.37а-с, 57-72%

Соединения *OH OH * OH A * OH Y^OH * OH (Jr *

<rrV°- Н 2.15a 2.34a 78% 2.35a 73% 2.36a 84% 2.37a 71%

* Л'Л-N н 2.15c 2.34b 63% 2.35b 63% 2.36b 59% 2.37b 57%

н 2.15f 2. 34c 60% 2.35c 55% 2.36c 47% 2.37c 72%

Схема 2.16

2.5. Биологическая активность и антиоксидантные свойства синтезированных 4-гидрокси-1,4-дигидроазоло[5,1-с][1,2,4]триазинов и их производных

2.5.1. Противовирусное действие 4-гидрокси-1,4-дигидроазоло[5,1-с][1,2,4]триазинов

Синтезированные 4-гидрокси- 1,4-дигидроазоло[5,1-с][1,2,4]триазины представляют

собой аналоги лекарственного препарата «Триазавирин», который обладает широким спектром противовирусного действия. На стадии молекулярного моделирования 4-гидрокси-1,4-дигидроазоло[5,1-с][1,2,4]триазины показали сродство к биологическим мишеням - белкам, регулирующим ключевые процессы в жизненном цикле вирусов. Соединения были испытаны на противовирусную активность в отношении вируса гриппа штамм A/Puerto Rico/8/34 (H1N1) и вируса Коксаки B3 в культуре клеток в лаборатории экспериментальной вирусологии ФБУН НИИ имени Пастера (г. Санкт-Петербург). Результаты испытаний азолоазинов 2.15, 2.16 и 2.20 в отношении вируса гриппа (клетки MDCK) и вируса Коксаки B3 (клетки Vero) представлены в таблице 2.2.

Таблица 2.2 - Результаты испытаний 4-гидрокси-1,4-дигидроазоло[5,1-с][1,2,4]триазинов _в отношении вируса гриппа и вируса Коксаки В3

Соединение Показатели биологической активности

Вирус гриппа A/Puerto Rico/8/34 (H1N1) Вирус Коксаки B3

2.15a CC50 >300 мкг/мл CC50 >300 мкг/мл

IC50 200 мкг/мл IC50 >300 мкг/мл

SI = 2 SI = 1

2.15b CC50 284 мкг/мл CC50 >300 мкг/мл

IC50 7,8 мкг/мл IC50 >300 мкг/мл

SI = 36 SI = 1

2.15c CC50 83,3 мкг/мл CC50 183 мкг/мл

IC50 10 мкг/мл IC50 100 мкг/мл

SI = 8 SI = 2

2.15i CC50 51 мкг/мл CC50 138,1 мкг/мл

IC50 8 мкг/мл IC50 1.2 мкг/мл

SI = 6 SI 115 LD50 294 мг/кг

2.15k CC50 36 мкг/мл CC50 153,7 мкг/мл

IC50 4 мкг/мл IC50 0,5 мкг/мл

SI = 9 SI 307 LD50 294 мг/кг

2.15h CC50 16 мкг/мл CC50 75 мкг/мл

IC50 >10 мкг/мл IC50 33 мкг/мл

SI = 2 SI = 2

2.15f CC50 46 мкг/мл CC50 >300 мкг/мл

IC50 >30 мкг/мл IC50 >300 мкг/мл

SI = 2 SI = 1

2.16g CC50 158 мкг/мл CC50 83 мкг/мл

IC50 >100 мкг/мл IC50 >50 мкг/мл

SI = 2 SI = 2

2.16h CC50 206 мкг/мл CC50 99 мкг/мл

IC50 53 мкг/мл IC50 >50 мкг/мл

SI = 4 SI = 2

2.161 CC50 300 мкг/мл CC50 43,1 мкг/мл

IC50 95 мкг/мл IC50 4,4 мкг/мл

SI 3 SI 10

2.16k CC50 34 мкг/мл CC50 119 мкг/мл

IC50 >30 мкг/мл IC50 >50 мкг/мл

SI = 1 SI = 1

2.16i CC50 108 мкг/мл CC50 95 мкг/мл

IC50 8 мкг/мл IC50 >50 мкг/мл

SI = 13 SI = 2

2.20a CC50 >300 мкг/мл CC50 76 мкг/мл

IC50 212 мкг/мл IC50 50 мкг/мл

SI = 1 SI = 1

2.20h CC50 38 мкг/мл CC50 97 мкг/мл

IC50 14 мкг/мл IC50 >50 мкг/мл

SI = 3 SI = 1

2.20c CC50 >300 мкг/мл CC50 50 мкг/мл

IC50 200 мкг/мл IC50 50 мкг/мл

SI = 2 SI = 1

2.20f Н/Т CC50 83 мкг/мл IC50 31 мкг/мл SI = 3

2.20j Н/Т CC50 35 мкг/мл IC50 33 мкг/мл SI = 1

2.20d Н/Т CC >300мкг/мл IC >300мкг/мл SI = 1

Осельтамивира карбоксилат CC50 >200 мкг/мл IC50 0.3 мкг/мл SI = 667 Н/Т

Расчет значений 50% цитотоксической концентрации (СС50) и 50% эффективной концентрации (ГС50) проводили при помощи пакета программ GraphPad. За рабочую

модель для анализа принимали 4-параметрическое уравнение логистической кривой (пункты меню «Нелинейная регрессия» - «логарифм ингибитора - ответ»). На основании полученных данных для каждого соединения и каждого вируса рассчитывали индекс селективности (SI) - отношение CC50 к IC50.

Два соединения 3 -нитро-4-гидрокси- 1,4-дигидро-7-пропаргилтио-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин 2.15k и 3-нитро-4-гидрокси-1,4-дигидро-7-этилтио-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин 2.15i обладают выраженным противовирусным действием в отношении энтеровируса Коксаки группы B3, размножающегося в клетках миокарда и вызывающего миокардиты у человека. На сегодняшний день химиопрепаратов и вакцин от вируса Коксаки нет. Данные соединения представляют значительный интерес для дальнейшего изучения.

Токсичность соединений была изучена в отношении клеток Vero. Значения СС50 для изучаемых соединений составили 153,7 и 138,1 мкг/мл соответственно. Полученные данные свидетельствуют о низкой цитотоксичности полученных соединений для культуры клеток.

Противовирусную активность соединений изучали в культуре клеток Vero в отношении вируса Коксаки B3. Полученные в результате экспериментов значения IC50 для соединений составили 0,5 и 1,2 мкг/мл. Таким образом, величины индексов селективности оказались соответственно 307 и 115. Эти показатели намного превосходят пороговое значение SI=10, на основании которого делается заключение о перспективности того или иного соединения как потенциального противовирусного средства, что убедительно доказывает высокие вирусингибирующие характеристики соединений.

Для 3-нитро-4-гидрокси-1,4-дигидро-7-пропаргилтио-1,2,4-триазоло[5,1-

с][1,2,4]триазина 2.15k и 3-нитро-4-гидрокси-1,4-дигидро-7-этилтио-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазина 2.15i была определена острая токсичность при внутрибрюшинном введении мышам. Для этого навески соединений растирали в ступке в 0,5% карбоксиметилцеллюлозе и вводили внутрибрюшинно белым беспородным мышам в объёме 0,4 мл. Животным из группы плацебо внутрибрюшинно вводили 0,5% раствор карбоксиметилцеллюлозы в том же объёме. Наблюдение за животными проводили в течение трёх дней, ежедневно учитывая смертность в каждой из групп животных. По истечении этого срока рассчитывали процент смертности в каждой из групп и вычисляли значение 50% летальной дозы (LD50) для каждого соединения по методу Рида и Менча. Полученные данные приведены в таблице 2.3.

Таблица 2.3 - Токсикологические показатели соединений при однократном внутрибрюшинном введении белым беспородным мышам.

Показатели смертности животных Концентрация 2.15k , мг/кг

500 170 50

Погибло, шт. 6 0 0

Выжило, шт. 0 6 6

Смертность, % 100 0 0

Концентрация 2.15i , мг/кг

500 170 50

Погибло, шт. 6 0 0

Выжило, шт. 0 6 6

Смертность, % 100 0 0

Плацебо

Погибло, шт. 0

Выжило, шт. 6

Смертность, % 0

Как видно из приведенных результатов, неспецифической смертности в группе плацебо не наблюдалось. Все животные, получившие любое из соединений в дозе 500 мг/кг, погибли, тогда как ни в одной из остальных групп, получивших меньшие дозы веществ, смертности не отмечалось. На основании полученных данных значение LD50 для обоих соединений составляет 294 мг/кг, что позволяет отнести соединения к умеренно токсичным (3 класс, 40-1250 мг/кг, «Правила организации и проведения доклинических исследований лекарственных средств - GLP», ФГБУ НЦЭСМП Минздрава России).

2.5.2. Исследование антигликирующей и антигликоксидационной активности

Для полученных соединений были исследованы in vitro антигликирующей и

антигликоксидационной активности [175]. Исследование проводили в фосфатном буферном растворе с рН 7.4 (гликирование) и в среде HEPES буфера рН 4.9, обогащенном 10 мг/л пентагидрата сульфата меди (II) (гликоксидация). Длительность и условия реакции: 24 ч., 60°С. Все вещества растворяли в DMSO (конечная концентрация - 3%). В исследуемые образцы добавляли изучаемые вещества в конечной концентрации 1000 мкМ, растворенные в 99% DMSO (конечная концентрация в реакционной среде 3%), в контрольные образцы добавляли соответствующий объем растворителя. После протекания реакции белок осаждали при помощи трихлоруксусной кислоты (10% в конечной реакционной среде при осаждении), и центрифугирования при 15000 об./мин. (4 мин, 4°С). Супернатант удаляли, осадок отмывали фосфатным буферным раствором. Повторное растворение проводили в фосфатном буферном растворе (0.05 М, рН 10.5). Спектр возбуждения/испускания детектируемых конечных продуктов гликирования (КПГ) (370/440 нм соответственно) рассматривается как диапазон длин волн флуоресценции, характерный для многих КПГ. В качестве вещества сравнения использовали известный ингибитор неферментативного гликозилирования -

аминогуанидин. Антигликирующую активность рассчитывали по отношению к показателю флуоресценции контрольных образцов. Вычисляли относительный показатель флуоресценции с учетом холостых проб BSA, проинкубированных с соединениями в отсутствии индуктора гликирования. Использовали формулу:

Fly= 10(log10(Exp)-log 10(blank)) где Fly - относительный показатель флуоресценции, log10(Exp) и log10(blank) -фактические уровни флуоресценции образцов, содержащих индуктор гликирования, и соответствующих им проб, не содержащих таковой.

Величины относительных коэффициентов флуоресценции контрольных и опытных проб сравнивали статистически. Для количественного представления уровня проявленной активности определяли показатель Д%:

Д%=(1 -Fly(exp)/Fly(contr)).

Результаты оценки биологической активности проанализированы с применением ANOVA, пост-тест Туке, при уровне значимости p<0,05 и условии соблюдения нормальности распределения и равенства дисперсий подгрупп выборок, корреляционный анализ проведен с применением критерия Спирмана, при уровне значимости p<0,05 (GraphPad Prism 7.0). Кластерный анализ проведен методом k-средних (Statistica 12). Полученные результаты представлены в таблице 2.4 и таблице 2.5.

Таблица 2.4 - Антигликирующая активность соединений в реакционной среде,

содержащей фосфатный буферный раствор

Соединение Активность, 1000 мкМ Активность, 100 мкМ IC50

2.15a 40.4±2.0* 17,7±5,2 -

2.15b 33.6±5.9* 8,8±1,7 -

2.15c 23.0±3.5 13,4±2,6 -

2.15g 55.6±2.5* 76,8±1,4 -

2.15h 63.5±0.4* 49,1±1,8 -

2.15i 53.4±2.2 26,1±3 -

2.15k 38.5±0.7* 21,8±2,2 -

2.20a 71.6±2* 59,2±1,8 -

2.20b 58.7±2.1* 8,8±1,7 -

2.20c 37.9±3.3* 29±1,6 -

2.20e 40.2±1.7 15.2±8.5 -

2.20h 30.1±2.5* 49,1±1,8 -

2.20i 96.9±1.3 52.0±2.1 82.6

2.21a 48.8±2.7 20.9±3.3 -

2.21b 28.6±5.7 18.9±4.7 -

2.21c 55.7±5.3 15.2±6.5 408.7

2.21f 57.5±2.7 24.9±5.6 573.2

2.21g 86.5±0.9 32.5±1.7 209.9

Таблица 2.5 - Антигликоксидационная активность соединений в реакционной среде,

содержащей катионы ^(П)

Соединение Активность, 1000 мкМ Активность, 100 мкМ IC50

2.15i 89.6±9.3 72.9±6.3 15.1

2.20e 43.9±10.2 24.2±4.1 -

2.20i 53±1.7 28.9±2.7 297.5

2.21a 45.9±8.1 -18.1±11.6 -

2.21b 64.6±3 29.3±1.3 569.0

2.21c 49.5±5.2 14.2±8.5 -

2.21f 43±1.2 21.5±1.2 -

2.21g 83.2±2.6 16.7±17.7 369.3

Как было предсказано на этапе моделирования, структура 2.20а вошла в тройку лидеров среди соединений, проявивших наибольшую активность и для него были проведены углубленные исследования, в качестве аппарата сравнения выступал аминогуанидин:

Известно, что множество факторов вносит вклад в гликирование, в частности, фосфат-анионы и рН. В данной реакционной среде при описанных условиях установлено, что активность аминогуанидина в максимальной концентрации составила величину 30% и не достигла значений полуингибирования реакции. В то же время соединение 2.20а показало в 2 раза более высокую активность в максимальной изученной концентрации и было более чем в 3 раза активнее по показателю ГС50, чем выбранный референт (табл. 2.6).

Таблица 2.6 - Влияние соединения 2.20а и аминогуанидина на образование флуоресцирующих при длинах волн возбуждения / испускания 370/440 нм веспер-лизин-подобных КПГ при инкубации БСА с глюкозой и нормальной рН (антигликирование)

Активность, % IC50, мкМ

Соединение 1000 мкМ 100 мкМ

2.20a 64,0±0,2 31,3±6,9 345,0

Аминогуанидин 30,3±1.2 7,9±4.5 >1000

Примечание:* - статистически значимые различия, ANOVA, Туке (р<0,05)

Согласно литературным данным [177], гликирование в cреде, обогащенной медью, благодаря свойствам данного катиона, может быть расценено как гликооксидация.

В результате постановки гликооксидации установлено, что соединение 2.20а проявляет активность, в 4,9 раза превосходящую дополнительный референт эпросартан и в 2,3 раза - основной референт аминогуанидин по показателю ГС50 (табл. 2.7).

Таблица 2.7 - Влияние соединения 2.20а, аминогуанидина (основной референт) и эпросартана (дополнительный референт) на образование флуоресцирующих при длинах волн возбуждения / испускания 370/440 нм веспер-лизин-подобных КПГ в условиях преинкубации БСА с ^2+и кислой рН (основная методика гликоксидации)

Активность, % IC50, мкМ

Соединение 1000 мкМ 100 мкМ

2.20a 69,5±0,9 31,7±2,2 341,5

Эпросартан 33,2±2,7 31,7±2,1 1661,8

Аминогуанидин 55,5±2,5 17,6±3,3 797,0

Фракции коллагена составляют основу сухожильного материала. Согласно литературным данным, гликирование коллагена вносит значительный вклад в формирование многих КПГ-ассоциированных патологий, например микрососудистых поздних осложнений сахарного диабета, в частности нефропатии [176]. Состав коллагена отличен от модельного альбумина-белка - традиционно рассматриваемого в качестве мишеней для гликирования. В коллагене присутствуют в меньшем количестве: аргинин и лизин, кроме этого, он не содержит триптофан. Данные о результатах исследования приведены в таблице 2.8. Данное исследование подтверждает способность соединения 2.20а подавлять образование КПГ в коллагене, как в релевантном субстрате для сосудистых патологий, связанных с накоплением КПГ.

Таблица 2.8 - Влияние соединения 2.20а и аминогуанидина на образование флуоресцирующих при длинах волн возбуждения / испускания 370/440 нм веспер-лизин-подобных КПГ и флуоресцирующих при длинах волн возбуждения/испускания 335/385 нм пентозидин-подобных КПГ при гликировании растворимого гидролизата сухожилий

хвоста крыс в фосфатном буферном растворе при рН 7,4

Соединение Подавление веспер-лизиновых КПГ, активность, % Подавление пентозидиновых КПГ, активность, %

2.20a 57,4±0,5 46,8±0,3

Аминогуанидин 14,0±14,2 39,6±5,4

Примечание:

* - статистически значимые различия, ANOVA, Туке (р<0,05)

Установленная в настоящем исследовании активность препарата сравнения аминогуанидина соответствует литературным данным. Из которых следует, что аминогуанидин в большей степени подавляет образование пентозидин-подобных КПГ, чем веспер-лизин-подобных КПГ [ 177]. Для 2.20a установлена более высокая активность в отношении обоих типов КПГ, чем для аминогуанидина, однако динамика распределения активностей указывает на более выраженную способность подавлять образование веспер-

лизина. ГС50 соединения 2.20а подтверждает данное заключение, составляя 1733,9 мкМ в отношении пентозидин-подобных КПГ, и 798,0 мкМ в отношении весперлизин-подобных КПГ.

Хрусталики содержат фракции кристаллина в количестве более 90%. Кристаллин является биологически релевантной мишенью для гликирования при изучении потенциала соединения подавлять образование КПГ в хрусталиках. Известно, что гликирование принимает участие в механизме формирования катаракты, в частности возрастной и диабетической форм(табл 2.9).

Таблица 2.9 - Влияние соединения 2.20а и аминогуанидина на образование флуоресцирующих при длинах волн возбуждения / испускания 370/440 нм веспер-лизин-подобных КПГ и флуоресцирующих при длинах волн возбуждения/испускания 335/385 нм пентозидин-подобных КПГ при гликировании растворимого гидролизата хрусталиков

крыс в фосфатном буферном растворе при рН 7,4

Соединение Подавление веспер-лизиновых КПГ, активность, % Подавление пентозидиновых КПГ, активность, %

2.20а 81,0±1,2 74,1±2,1

Аминогуанидин 31,1±1,7 40,3±1,1

Установлено, что на модели гликирования кристаллин-содержащего гидролизата глюкозой в условиях нормальной рН в фосфатной буферной системе соединение 2.20а обладает активностью значительно превосходящей аминогуанидин по способности подавлять образование обоих изучаемых типов КПГ, как веспер-лизиновых, так и пентозидиновых. При этом соединение 2.20а препятствует образованию обоих типов КПГ эквиэффективно, тогда как аминогуанидин несколько менее активен в отношении веспер-лизиновых КПГ. ГС50 соединения 2.20а составили 235,6 мкМ в отношении пентозидин-подобных КПГ, и 202,7 мкМ в отношении весперлизин-подобных КПГ.

В исследовании установлено, что соединение 2.20а проявляет высокую антигликирующую и антигликоксидационную активности, превосходя аминогуанидин и эпросартан. 3 -Циано-4-гидрокси- 1,4-дигидро- 1,2,4-триазоло[5,1 -с] [ 1,2,4]триазин 2.20а активен в основном модельном белке БСА, а также на белках фракций коллагенов и кристаллинов, входящих в качестве доминирующего компонента в состав гидролизатов соединительных тканей хвоста и хрусталиков крыс соответственно.

Для 3 -Циано-4-гидрокси- 1,4-дигидро- 1,2,4-триазоло[5,1 -с] [ 1,2,4]триазина 2.20а была определена цитотоксичность, выяснено, что количественные показатели цитотоксичности 3 -Циано-4-гидрокси- 1,4-дигидро[ 1,2,4]триазоло[5,1 -с]-1,2,4-триазина 2.20а и аминогуанидина являются эквивалентными, оба вещества могут быть

охарактеризованы как не имеющие значимой цитотоксической активности в отношении рассматриваемой клеточной культуры.

2.5.3. Определение АОЕ синтезированных а-аддуктов 3-нитро-4-гидрокси-1,4-дигидроазоло[5,1-с][1,2,4]триазинов с полифенолами

Возникновение вирусных заболеваний сопровождается избыточной генерацией

активных форм кислорода радикальной и нерадикальной природы. Окислительный стресс, индуцированный вирусным заболеванием, играет важную роль в патогенезе вирусных инфекций. Окислительный стресс включает не только вмешательство в ведущие метаболические процессы организма, но и регулирует репликацию вируса. Отмечается также угнетение антиоксидантной защиты организма у больных вирусными заболеваниями.

Поэтому синтез препаратов, обладающих одновременно противовирусным и антиоксидантным действием, и их исследование по отношению к окислителям

радикальной природы является актуальной задачей(табл. 2.10).

Таблица 2.10 - Результаты определения АОЕ 2.34-2.37 (104 М-экв, п=5, Р=0,95)

ОН Л ОН Л ОН 1........1..... ОН 1..............0,1

".......^......он * но^^Чж * V-« * У *

2.34 2.35 2,84±0,23 (0,08) 2.36 5,15±0,11 (0,02) 2.37 5,91±0,26 (0,04)

2.15а 2.34а 2.35а 1,49±0,03 (0,02) 2.36а 2,93±0,03 (0,01) 2.37а 3,56±0,07 (0,02)

2.15с 2.34Ь 1,23±0,02 (0,02) 2.35Ь 1,37±0,03 (0,02) 2.36Ь 4,21±0,09 (0,02) 2.37Ь 2,85±0,23 (0,08)

2.151 2.34с 0,97±0,07 (0,07) 2.35с 1,32±0,05 (0,04) 2.36с 3,18±0,03 (0,01) 2.37с 4,31±0,04 (0,01)

Практически все аддукты, за исключением резорцина и некоторых его

производных, проявляют антиоксидантные свойства. Снижение АОЕ аддуктов относительно фенолов согласуется с литературными данными. Как и предполагалось ранее, соединения с фрагментами пирокатехина, пирогаллола проявляют большую АОЕ относительно аддуктов, содержащих резорциновый и флороглюциновый фрагмент.

Глава 3 - Экспериментальная часть

ИК спектры записаны на спектрометре Bruker Alpha, ZnSe (НПВО). Спектры ЯМР

1Н, 13C и 19F записаны на приборе Bruker Avance NEO 600 instrument (600, 151 и 565 МГц, соответственно) и Bruker Avance II spectrometer (400, 101 и 376.5 МГц соответственно), внутренний стандарт ТМС. Элементный анализ выполнен на приборе C, H, N, S-анализаторе Perkin Elmer 2400 Series II. Температуры плавления определены на приборе «Electrothermal IA 9100». Рентгеноструктурный анализ выполнен на автоматическом дифрактометре «Xcalibur 3» по стандартной методике (МоКа-излучение 0,71073 Â, графитовый монохроматор, «омега» сканирование с шагом 1о при Т=292 (2) К. Контроль чистоты соединений осуществляли при помощи ТСХ на пластинках Silufol UV-254.

Вирус гриппа A/Puerto Rico/8/34 (H1N1) культивировали в клетках MDCK, вирус Коксаки B3 - в клетках Vero. Клетки рассеивали в 96-луночнью планшеты в количестве 104 кл./лунку и объеме 100 мкл/лунку полной среды MEM. Инкубацию проводили в течение суток в С02-инкубаторе при 36°С в 5% атмосфере CO2. Непосредственно перед экспериментом клетки промывали средой МЕМ, дальнейшие манипуляции проводили в бессывороточной среде.

При оценке антигликирующей активности проводили измерение флуоресценции КПГ на спектрофлуориметре TECAN M 200 Pro, Х(возбуждения) 370 нм, Х(испускания) 440 нм. Спектр возбуждения/испускания детектируемых КПГ (370/440 нм соответственно) рассматривается как диапазон длин волн флуоресценции, характерный для многих КПГ. В качестве вещества сравнения использовали известный ингибитор неферментативного гликозилирования - аминогуанидин. Антигликирующую активность рассчитывали по отношению к показателю флуоресценции контрольных образцов. Результаты оценки биологической активности проанализированы с применением ANOVA, пост-тест Туке, при уровне значимости p<0,05 и условии соблюдения нормальности распределения и равенства дисперсий подгрупп выборок, корреляционный анализ проведен с применением критерия Спирмана, при уровне значимости p<0,05 (GraphPad Prism 7.0). Кластерный анализ проведен методом k-средних (Statistica 12).

1-нитро-2-морфолин-пропилен-1 (2.4Ь).Смесь 17.23 мл (0.2 моль) морфолина, 73.06 мл ^^^ГТОг (0 4 моль) триэтил-орто-ацетата, 53.60 мл (1.0 моль) нитрометана и 1.72 г

0(0.01 моль) пара-толуолсульфокислоты кипятили в течение 3 часов при и 140оС, упарили на ротационном испарителе, отфильтровали и промыли

изопропиловым спиртом. Выход 23.05 г (67%), желтое кристаллическое вещество, т.пл. 124-126оС (лит. 126-127 оС) (EtOH). Спектр ЯМР 5, м. д.: 2.54 с (3Н, СН3), 3.38 - 3.51 м (4Н, 2СН2), 3.62 - 3.72 м (4Н, 2СШ), 6.88 с (1Н, СН). Спектр ЯМР 13С, 5, м. д.: 15.33, 47.14, 65.51, 114.00, 160.08. Найдено, %: С 48.97; H 7.08; N 16.41. Вычислено, %: 48.83; H 7.02; N 16.27. ИК спектр, V, см-1: 1644, 1529, 1330, 990.

1-нитро-2-морфолин-бутилен-1 (2.4с).Смесь 17.23 мл (0.2 моль) морфолина, 86.00 мл (0.4 моль) триэтил-орто-пропионата, 53.60 мл (1.0 моль) нитрометана и

К02

N 172 г (0.01 моль) пара - толуолсульфокислоты кипятили в течение 3 часов

I I при 140оС, упарили на ротационном испарителе, отфильтровали и

О

промыли изопропиловым спиртом. Выход 28.30 г (76%), желтое кристаллическое вещество, Тпл. 114-116оС (EtOH). Спектр ЯМР 1Н, 5, м. д.: 1.09 т (3Н, СН3, 3= 7.4 Гц), 3.01 к (2Н, СН2, 3=7.4 Гц), 3.42- 3.51 м (4Н, 2*СШ,), 3.60 - 3.69 м (4Н, 2*СШ), 6.89 с (1Н, СН). Спектр ЯМР 13С, 5, м. д.: 11.83, 20.89, 47.17, 65.74, 113.33, 164.63. Найдено, %: С 51.78; H 7.62; N 15.24. Вычислено, %: 51.60; H 7.58; N 15.04. ИК спектр, V, см-1: 1645, 1537, 1344, 1007.

Калиевая соль нитроацетальдегида (2.5а). К раствору 2.35 г (0,042 моль) 2 КОН в 20 мл этанола при перемешивании прибавляют 6 г (0,038 моль) 1-

к

морфолино-2-нитроэтилена. Смесь перемешивают при комнатной температуре 1 час, осадок отфильтровывают, промывают последовательно этанолом и диэтиловым эфиром, сушат на воздухе. Продукт хранят в атмосфере аргона. Выход (4,69 г) 98%, порошок бело-розового цвета, Тпл=194-196 (разл.). Спектр ЯМР 1Н, 5, м. д.: 6.26 3 = 8.6 Гц, 1Н, СН-Ш2), 9.61 3 = 8.6 Гц, 1Н, СН=О). Спектр ЯМР 13С, 5, м. д.: 116.51 (02№СНК-СН=0), 181.55 (02№СНК-СН=0). Найдено, %: С 18.74; Н 1.57; N 10.84. Вычислено, %: С 18.89; Н 1.59; N 11.02. ИК спектр, V, ст-1: 557, 732, 765, 1022, 1197, 1261, 1346, 1376, 1450, 1593.

Раствор А Калиевой соли нитроацетальдегид (1 экв.). К раствору 0.672 г (0.012 моль) КОН в 15 мл воды при охлаждении прибавляют 1.58 г (0.01 моль) 1-морфолино-2-нитроэтилена. Смесь перемешивают до полного растворения осадка. О Натриевая соль 1-нитро-2-пропанона (2.5Ь).К суспензии 3.44 г (0.02

моль) 1-нитро-2-морфолин-пропилена-1 (1а) в 15 мл ЕЮН прилили

+N3

раствор 0.8 г №ОН в 15 мл ЕЮН и перемешивали при комнатной

температуре 30 минут. Осадок отфильтровали, промыли МТБЭ. Выход 2.0 г (81%), белый порошок, Тпл. 176 - 178оС (EtOH). Спектр ЯМР 5, м. д.: 2.02 с (3Н, СН3), 6.37 с (1Н, СН). Спектр ЯМР 13С, 5, м. д.: 28.69, 113.55, 186.32. Найдено, %: С 26.83; H 3.71; N 9.62.

Вычислено, %: 26.87; H 3.76; N 10.45. ИК спектр, v, см-1: 1612 , 1459, 1288.

Я Натриевая соль 1-нитро-2-бутанона (2.5с).К суспензии 3.72 г (0.02 моль)

+Na 1-нитро-2-морфолин-бутилена-1 (IIa) в 15 мл EtOH прилили раствор 0.8 г NaOH в 15 мл EtOH и перемешивали при комнатной температуре 30 минут. Осадок отфильтровали, промыли МТБЭ. Выход 2.7 г (96%), белый порошок, Тпл. 213 - 215оС (EtOH). Спектр ЯМР 1Н, 5, м. д.: 0.94 т (3Н, СН3 J= 7.5 Гц), 2.25 к (2Н, СН2, J=7.5 Гц), 6.51 c (1H, CH). Спектр ЯМР 13C, 5, м. д.: 9.89, 33.06, 111.95, 188.83. Найдено, %: С 34.42; H 4.66; N 9.35. Вычислено, %: 34.54; H 4.35; N 10.07. ИК спектр, v, см-1: 1648, 1443, 1244. Общий метод синтеза 5-нитро-4-замещенных-3,4-дигидропиримидин-2(1Н)-онов 2.8a-e.0.52 г (0.0041 моль) соли нитроацетальдегид или нитрокетонов суспендируют в 10 мл этилового спирта и прибавляют 1.025 мл HCl 12М (0.0123 моль), далее последовательно вносят 0.493 г (0.0082 моль) мочевины и 0.498 мл (0.0041 моль) бензальдегида. Смесь кипятят в течение 4 часов, охлаждают до комнатной температуры, фильтруют. Осадок перекристаллизовывают из этилового спирта.

Jj^ 5-нитро-4-фенил-3,4-дигидропиримидин-2(1Н)-он (2.8a). Выход 0.72г ^ (80%), желтый порошок, Тпл. 212-214оС (EtOH). Спектр ЯМР 1Н,

(ацетонитрил-Jj) 5, м. д. 5.53 (d, 1H, CH J = 2.9 Гц), 7.35 (m, 5H, Ph), 8.15(d, 1H, NH, J = 5 Гц), 8.25(d, 1H, NH, J = 2.9 Гц), 78.15(d, 1H, CH, J = 5 Гц). Спектр ЯМР 13C, 5, м. д.: 54.01., 125.16, 126.80, 128.20, 128.75, 137.73, 142.02, 149.84. Найдено, %: С 54.63; H 4.03; N 19.00. Вычислено, %: C, 54.79; H, 4.14; N, 19.17. ИК спектр, v, см-1: 3330 (N - H), 1698 (C = O), 1452 (NO2), 1315 (NO2). 6-метил-5-нитро-4-фенил-3,4-дигидропиримидинон (2.8b). Выход 0.74г (86%), желтый порошок, Тпл. 198-203оС (лит. 199-202 оС) (EtOH). Спектр ЯМР 1Н, (ацетонитрил-Jj) 5, м. д. 2.50 (s, 3H, CH3), 5.53 (d, 1H, CH J = 3.3 Гц,), 6.47(s, 1H, NH), 7.38 (m, 5H, Ph), 7.92 (s, 1H, NH). Спектр ЯМР 13C, 5, м. д.: 19.45, 54.24, 123.22, 126.59, 128.06, 128.79, 142.42, 150.37, 151.10. Найдено, %: С 56.63; H 7.75; N 18.0. Вычислено, %: C, 56.65; H, 4.75; N, 18.02. ИК спектр, v, см-1: 3300 (N - H), 1685 (C = O), 1452 (NO2), 1306 (NO2). 6-этил-5-нитро-4-фенил-3,4-дигидропиримидинон (2.8с Выход 0.86г (87%), светло желтый кристаллический порошок, Тпл. 157-162 ^(EtOH). ЯМР 1Н, (ацетонитрил-Jj) 5, м. д.: 1.24 (t, 3H, CH3, J = 7.4 Гц,), 2.83 (m, 2H, CH2), 5.53 (d, 2H, CH, J = 3.4 Гц), 7.32 (m, 5H, Ph),

8.32 (б, 1Н, ОТ), 10.06 (б, 1Н, ОТ). Спектр ЯМР 13С, 5, м. д.: 12.18, 25.19, 54.19, 122.60, 126.47, 128.03,128,79 142.39, 150.56, 155.62. Найдено, %: С 58.17; Н 5.30; N 17.01. Вычислено, %: С, 58.29; Н, 5.30; N, 16.99;. ИК спектр, V, см-1: 3349 (К - Н), 1682 (С = О), 1444 (N02), 1309 (N02).

О 5-нитро-4-(4-метоксифенил)-3,4-дигидропиримидин-2(1Н)-он НМ^^Ш! (2.8ф. Смесь кипятят в течение 4 часов, охлаждают до комнатной температуры, фильтруют. Осадок перекристаллизовывают из О^^о этилового спирта. Выход 0.86г (84%), желтый порошок, Тпл. 217-218оС ' (БЮН). ЯМР 1Н, (ацетонитрил-^) 5, м. д.: 2.69 (б, 3Н, СНэ), 5.53 (ё,

1Н, СН J = 2.9 Гц), 7.10 (^ 2Н, 2*СН, J = 8.0 Гц), 7.43 (^ 2Н, 2*СН, J = 8.0 Гц), 8.15(d, 1Н, ОТ, J = 5 Гц), 8.25^, 1Н, ОТ, J = 2.9 Гц), 78.15^, 1Н, СН, J = 5 Гц).; Спектр ЯМР 13С, 5, м. д.: 53.60, 55.19, 114.18, 123.55, 127.75, 128.64,134.58, 147.38, 148.70. Найдено, %: С 54.57; Н 5.03; N 15.89. Вычислено, %: С, 54.75; Н, 4.98; К, 15.96. ИК спектр, V, см-1: 3325 (К - Н), 1700 (С = О), 1444 (N02), 1323 (N02), 1244 (РЬ - ОМе). О 6-метил-5-нитро-4-(4-метоксифенил)-3,4-дигидропиримидинон ну N11 (2.8е). Выход 0.87г (81%), желтый порошок, Тпл. 229-234оС (лит. 227-228оС) (БЮН). ЯМР 1Н, (ацетонитрил-^) 5, м. д.: 2.59 (б, 3Н, СНэ), 0**4) 3.89 (б, 3Н, СН3), 5.69 (ё, 1Н, СН, У = 3.1 Гц), 6.46 (б, 1Н, ОТ), 7.02 (ё, 2Н, 2*СН, У = 8.7 Гц), 7.39 (d, 2Н, 2*СН, У = 8.7 Гц), 7.86 (б, 1Н, ОТ); Спектр ЯМР 13С, 5, м. д.: 19.46, 53.65, 55.20, 114.08, 123.55, 127.85, 134.59, 150.48, 150.77, 159.05. Найдено, %: С 54.57; Н 5.03; N 15.89. Вычислено, %: С, 54.75; Н, 4.98; К, 15.96. ИК спектр, V, см-1: 3318 ^ - Н), 1695 (С = О), 1452 (N02), 1314 (N02), ^ 1240 (РЬ - 0Ме). Н^ ун 6-этил-5-нитро-4-(4-метоксифенил)-3,4-дигидропиримидинон

(2.81). Выход 1.01г (89%), желтый порошок, Тпл.132-137 °С(БЮН).

n ' ,

О* *0 Спектр ЯМР 1Н, 5, м. д.:1.21 - 1.24 т (3Н, С№, У=7,4 Гц), 2.77-2.85 м (2Н, СН2), 3,73 с (3Н, 0Ме), 6.91 - 6.92 м (2Н, 2СН), 7.19 - 7.20 м (2Н, 2СН), 8,24 с (1Н, NH), 10.02 с (1Н, NИ). Спектр ЯМР 13С, 5, м. д.: 12.17, 25.16, 53.55, 55.16, 114.10, 122.90, 127.70, 134.55, 150.59, 155.21, 158.99. Найдено, %: С 56.23; Н 5.54; N 14.74.

Вычислено, %: С, 56.31; Н, 5.45; N 15.15; ИК спектр, V, см-1: 3333 ^ - Н), 1695 9 (С = 0), 1510 (N02), 1317 (N02), 1222 (РЬ - 0Ме).

|| Р-2-фенилгидразоно-Р-нитроацетальдегид (2.11а). Предварительно готовят раствор 0.229г (0.0018 моль) калиевой соли нитроуксусного альдегида и 1.5 мл 3.9М ацетата натрия. К раствору 0.165 мл (0.0018 моль) анилина в 5 мл воды и 0.45 мл конц. соляной кислоты (0.0054 моль) порциями прибавили раствор 0.138

г (0.002 моль) NaNO2 в 1 мл воды при 0^5оС. Реакционную массу выдержали 10 минут и прилили к заранее приготовленному раствору калиевой соли нитроуксусного альдегида. Смесь выдержали 30 минут при комнатной температуре и отфильтровали. Осадок промыли 15 мл водно-спиртового раствора. Выход 0.24 г (68%), светло-желтый порошок, Тпл.150-151оС (лит. 151 - 152 оС) (ЕЮИ). Спектр ЯМР 1Н, 5, м. д.: 7.13 - 7.17 м (1Н, СИ), 7.35 - 7.41 м (4Н, 4СН), 9.88 с (1Н, СН), 11.65 с (1Н, ОТ). Спектр ЯМР 13С, 5, м. д.: 114.0, 120.23, 131.34, 133.95, 158.98. Найдено, %: С 49.63; И 3.53; N 21.42. Вычислено, %: С, 49.74; Н, 3.65; N, 21.75. ИК спектр, V, см-1: 1620 с (С=О), 1524, 1304 с (N02).

1-нитро-1-(2-фенилгидразоно)пропан-2-он (2.11Ь).

Метод 1: предварительно приготовили раствор 0.243 г (0.0018 моль) натриевой соли 1-нитро-2-пропанона и 1.5 мл 3.9М ацетата натрия. К раствору 0.165 мл (0.0018 моль) анилина в 5 мл воды и 0.45 мл конц. соляной кислоты (0.0054 моль) порциями прибавили раствор 0.138 г (0.002 моль) NN02 в 1 мл воды при 0^5оС. Реакционную массу выдержали 10 минут и прилили к заранее приготовленному раствору натриевой соли 1-нитро-2-пропанона. Смесь выдержали 30 минут при комнатной температуре и отфильтровали. Осадок промыли 15 мл водно-спиртового раствора. Метод 2: предварительно приготовили раствор 0.31 г (0.0018 моль) 1-нитро-2-морфолин-пропилена-1, 0.072 г №0И (0.0018 моль) и 1.5 мл 3.9М ацетата натрия в 3 мл воды. К раствору 0.165 мл (0.0018 моль) анилина в 5 мл воды и 0.45 мл конц. соляной кислоты (0.0054 моль) порциями прибавили раствор 0.138 г (0.002 моль) NN02 в 1 мл воды при 0^5оС. Реакционную массу выдержали 10 минут и прилили к заранее приготовленному раствору 1-нитро-2-морфолин-пропилена-1. Смесь выдержали 30 минут при комнатной температуре и отфильтровали. Осадок промыли 15 мл водно-спиртового раствора.Выход 0.26 г (69%), светло-желтый порошок, Тпл. 96-98оС (лит. 98 оС) (ЕЮИ). Спектр ЯМР 1Н, 5, м. д.: 3.33 с (3Н, СН3), 7.17 - 7.20 т (1Н, СИ, /=7.3 Гц), 7.41 - 7.45 т (2Н, 2СН, 3=7.7 Гц), 7.51 - 7.53 д (2Н, 2СН, 3=7.7 Гц), 11.85 с (1Н, ОТ). Спектр ЯМР 13С, 5, м. д.: 25.08, 117.38, 127.44, 127.44, 129.64, 140.52, 158.15. Найдено, %: С 52.13; И 4.53; N 20.32. Вычислено, %: С, 52.17; Н, 4.38; N 20.28. ИК спектр, V, см-1: 1632 с (С=О), 1539, 1294 с (N02).

1-нитро-1-(2-фенилгидразоно)бутан-2-он (2.11с).

Метод 1: предварительно приготовили раствор 0.252 г (0.0018 моль) натриевой 1-нитро-2-бутанона и 1.5 мл 3.9М ацетата натрия. К раствору 0.165 мл (0.0018 моль) анилина в 5 мл воды и 0.45 мл конц. соляной кислоты (0.0054 моль) порциями прибавляли раствор 0.138 г (0.002 моль) NN02 в 1 мл воды при 0^5оС.

Реакционную массу выдержали 10 минут и прилили к заранее приготовленному раствору натриевой соли 1-нитро-2-бутанона. Смесь выдержали 30 минут при комнотной температуре и отфильтровали. Осадок промыли 15 мл водно-спиртового раствора. Метод 2: предварительно приготовили раствор 0.335 г (0.0018 моль) 1-нитро-2-морфолин-бутилена-1, 0.072 г №0И (0.0018 моль) и 1.5 мл 3.9М ацетата натрия в 3 мл воды. К раствору 0.165 мл (0.0018 моль) анилина в 5 мл воды и 0.45 мл конц. соляной кислоты (0.0054 моль) порциями прибавили раствор 0.138 г (0.002 моль) NN02 в 1 мл воды при 0^5оС. Реакционную массу выдержали 10 минут и прилили к заранее приготовленному раствору 1-нитро-2-морфолин-бутилена-1. Смесь выдержали 30 минут при комнатной температуре и отфильтровали. Осадок промыли 15 мл водно-спиртового раствора. Выход

0.29 г (73%), светло-желтый порошок, Тпл. 96-98 оС (ЕЮН). Спектр ЯМР 1Н, 5, м. д.: 1.13 -1.17 т (3Н, СНэ , J=7.3 Гц) 2.90 - 2.96 к (2Н, СН2 , J=7.3 Гц), 7.10 - 7.14 т(1Н, СН, 1=7.3 Гц), 7.34 - 7.38 т (2Н, 2СН, J=7.7 Гц), 7.46 - 7.48 д (2Н, 2СН, J=8.0 Гц),11.68 с (1Н, МН). Спектр ЯМР 13С, 5, м. д.: 6.80, 30.55, 117.37, 127.42, 129.63, 140.52,158.23. Найдено, %: С 54.26; Н 5.25; N 19.08. Вычислено, %: С, 54.29; Н, 5.01; N 19.00. ИК спектр, V, см-1 : 3239

мл ацетонитрила и 4.1 мл конц. HCl (0.05 моль) порциями прибавляют раствор 0.936 г (0.011 моль) KNO2 в 3 мл воды при -7^-10 °С. Реакционную массу выдерживают при этой температуре 10 мин и прибавляют к ней один эквивалент свежеприготовленного раствора А. Смесь выдерживают при комнатной температуре 1 час, выпавший осадок отфильтровывают и промывают охлажденной смесью ацетонитрил: вода = 1:1, сушат на воздухе. Продукт очищают хроматографически на силикагеле, элюент - этилацетат, отделяют наиболее подвижную фракцию, растворитель отгоняют досуха. Остаток перекристаллизовывают из воды, фильтруют и сушат на воздухе. Выход 0.65 г (32%). Метод 2: к смеси 0.84 г (0.01 моль) 3-амино-1,2,4-триазола, 3 мл воды, 2 мл ацетонитрила и 4.1 мл конц. HCl (0.05 моль) порциями прибавляют раствор 0.936 г (0.011 моль) KNO2 в 3 мл воды при -7^-10 °С. Реакционную массу выдерживают при этой температуре 10 мин и прибавляют к ней 1.27 г (0.01 моль) калиевой соли нитроацетальдегида в 10 мл воды. Смесь выдерживают при комнатной температуре 1 час. Выделение и очистку проводят как в методе 1. Выход 0.65 г (32%).

Метод 3 к смеси 0.84 г (0.01) моль 3-амино-1,2,4-триазола, 5 мл воды, 5 мл ацетонитрила и 10 мл конц. HCl (0.12 моль) порциями прибавляют раствор 0.94 г (0.011 моль) KNO2 в 3 мл

ОН

сл (N-H),1691 с (С=О), 1522, 1236 с (NO2).

3-Нитро-4-гидрокси-1,4-дигидро-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин моногидрат (2.15а).

Метод 1: к смеси 0.84 г (0.01 моль) 3-амино-1,2,4-триазола, 3 мл воды, 2

воды при -7+-10 С. Реакционную массу выдерживают при этой температуре 10 мин и прибавляют к ней раствор 1.58 г (0.01) 1-морфолин-2-нитроэтилена в 50 мл ацетонитрила. Смесь выдерживают при температуре 0 оС 1 час, после при комнатной температуре 12 часов. Выпавший осадок отфильтровывают и промывают охлажденной смесью ацетонитрил: вода = 1:1. Влажный осадок перекристаллизовывают из воды, фильтруют и сушат на воздухе. Выход 1.63 г (81%). Порошок бледно-желтого цвета, Тпл. 232-235 (разл.). Спектр ЯМР 1Н, 5, м. д.: 6.99 (^ У = 7.9 Гц, 1Н, СН), 8.03 & 1Н, СН), 8.15 (d, У = 7.9 Гц, 1Н, ОН), 13.38 (br.s., 1Н, ЯН). Спектр ЯМР 13С, 5, м. д.: 72.50, 142.29, 146.03, 151.44. Спектр ЯМР DEPT-135° 13С, 5, м. д.: 72.50 (С4), 151.44 (С7). Найдено, %: С 23.66; Н 2.79; N 41.45. Вычислено, %: С 23.77; Н 2.99; N 41.58. ИК спектр, V, см-1: 566, 657, 699, 751, 847, 904, 986, 1071, 1166, 1201, 1250, 1276, 1326, 1531, 1571, 1634, 2737, 2845, 3091, 3361, 3527.

ОН

3-Нитро-4-гидрокси-1,4-дигидро-7-метил-1,2,4-триазоло[5,1-—^ Л N с][1,2,4]триазин (2.15Ь). Аналогично 15а Метод 3. Выход 1,52 г (77%), н порошок бледно-желтого цвета, Тпл. 200-202 (разл.). Спектр ЯМР 1Н, 5, м.

д.: 2.30 (^ 3И, CHз), 6.87 (d, У = 7.5 Гц, 1Н, СН), 7.93 (^ У = 7.5 Гц, 1Н, ОН), 13.14 (Ъ™., 1Н, NH). Спектр ЯМР 13С, 5, м. д.: 13.91, 72.03, 142.20, 146.14, 160.11. Найдено, %: С 30.19; Н 3.05; N 42.44. Вычислено, %: С 30.31; Н 3.05; N 42.41. ИК спектр, V, см-1: 572, 706, 734, 836, 918, 1056, 1177, 1251, 1340, 1391, 1444, 1540, 1589, 1632, 2859, 3098, ?н 3135.

\ N-N^N02

8—(( I II 3-Нитро-4-гидрокси-7-метилтио-1,4-дигидро-1,2,4-триазоло[5,1-

Н с][1,2,4]триазин (2.15с). Аналогично 15а Метод 3. Выход 1.75 г (75%),

порошок оранжевого цвета, Тпл. 194-196 (разл.). Спектр ЯМР 1Н, 5, м. д.: 2.56 3Н, SCHз), 6.89 У = 7.6 Гц, 1Н, СН), 7.99 (^ У = 7.6 Гц, 1Н, ОН), 13.22 (^ 1Н, ЯН). Спектр ЯМР 13С, 5, м. д.: 13.53, 72.29, 142.44, 146.71, 161.31. Найдено, %: С 25.96; Н 2.44; N 36.45. Вычислено, %: C 26.09; H 2.63; N 36.51. ИК спектр, V, см-1: 678, 700, 723, 753, 824, 904, 1066, 1113, 1181,

1240, 1276, 1328, 1389, 1536, 2804, 2862.

ОН

I ^ 3-Нитро-7-этоксикарбонил-4-гидрокси-1,4-дигидро-1,2,4-ЕЮОС—^ триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин (2.15d). Аналогично 15а Метод 3.

н Выход 1.72 г (67%), порошок светло-оранжевого цвета, Тпл. 224-227

(разл.). Спектр ЯМР 1Н, 5, м. д.: 1.38 (^ У = 7.1 Гц, 3Н, СН3), 4.36 (^ У = 7.1 Гц, 2Н, СН2) 7.02 У = 7.4 Гц, 1Н, СН), 8.30 (^ У = 7.4 Гц, 1Н, ОН), 13.42 (^ 1Н, ЯН). Спектр ЯМР 13С, 5, м. д.: 14.18, 61.75, 73.40, 142.60, 146.84, 153.40, 159.24. Найдено, %: С 32.97; Н 3.19; N 32.72. Вычислено, %: C 32.82; H 3.15; N 32.81. ИК спектр, V, см-1: 667, 846, 911, 1026, 1074, 1197, 1337, 1788, 1541, 1576, 1733, 3211, 3222, 3231, 3243.

3-Нитро-4-гидрокси-7-фенил-1,4-дигидро-1,2,4-триазоло[5,1-с|[1,2,4]триазин (2.15е).

Аналогично 15а Метод 3. Выход 1.56 г (60%), порошок бледно-желтого цвета, Тпл. 214-216 (разл.). Спектр ЯМР 1Н, 5, м. д.: 7.01 (^ У = 7.8 Гц, 1Н, СН), 7.39-7.49 (т, 3Н, 3СН), 8.02 (ё, У = 1.5 Гц, 1Н, СН), 8.04 (d, У = 1.9 Гц, 1Н, СН), 8.10 У = 7.8 Гц, 1Н, ОН), 13.34 (s, 1Н, N^1. Спектр ЯМР 13С, 5, м. д.: 72.55, 125.86, 128.72, 129.76, 130.06, 142.35, 146.69, 160.60. Найдено, %: С 46.27; Н 3.05; N 32.46.. Вычислено, %: С 46.16; Н 3.10; N 32.30. ИК спектр, V,

см-1: 694, 720, 910, 1070, 1196, 1247, 1332, 1357, 1435, 1479, 1532, ?Н 1556, 1590, 2849, 2871, 3138.

Р3С—^ Т *Н20 3-Нитро-7-трифторметил-4-гидрокси-1,4-дигидро-1,2,4-

Н триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин моногидрат (2.151). Аналогично 15а

Метод 3. Выход 1.29 г (69%). Порошок бледно-желтого цвета, Тпл. 185-187 (разл.). Спектр ЯМР 1Н, 5, м. д.: 7.06 (^ У = 7.2 Гц, 1Н, СН), 8.50 (^ У = 7.2 Гц, 1Н, ОН), 13.75 (1Н, с, КН). Спектр ЯМР 13С, 5, м. д.: 73.32, 118.84 (^ У = 270.1 Гц, 142.76, 147.22, 151.72 (^ У = 39.2 Гц).

Спектр ЯМР 19Р, 5, м. д.: 64.89 Найдено, %: С 22.30; Н 1.74; N 30.99. °н Вычислено, %: С 22.23; Н 1.87; N 31.11. ИК спектр, V, см-1: 704, 753,

II УЧ7 1 II 909, 1007, 1080, 1156, 1206, 1224, 1340, 1531, 1557, 1582, 2815, 3246, н 3610.

3-Нитро-7-(а-тиенил)-4-гидрокси-1,4-дигидро-1,2,4-триазоло[5,1-с][1,2,4]триазин (2.15g).

Аналогично 15а Метод 3. Выход 1.3 г (49%), порошок светло-оранжевого цвета, Тпл. 223-225 (разл.). Спектр ЯМР 1Н, 5, м. д.: 7.00 (^ У = 3.8 Гц, 1Н, СН), 7.18 У = 4.8, 3.8 Гц, 1Н, СН), 7.67 (ёё, У = 7.7, 4.3 Гц, 2Н, 2СН), 8.24 (^ У = 5.7 Гц, 1Н, ОН), 13.48 & 1Н, КН). Спектр ЯМР 13С, 5, м. д.: 72.64, 126.93, 128.13, 128.16, 132.77, 142.48, 146.56, 156.96. Найдено, %: С 35.94;

он Н 2.33; N 31.67. Вычислено, %: С 36.09; Н 2.27; N 31.57. ИК спектр, V,

см-1: 721, 744, 1073, 1251, 1344, 1376, 1543, 1569, 1590, 2844, 2956,

(/ , II

3128, 3148.

ЕЮОГ Н

3-Нитро-4-гидрокси-7-этоксикарбонил-1,4-дигидропиразоло[5,1-с][1,2,4]триазин (2.15И). Аналогично 15а Метод 3. Выход 2.12 г (83%), порошок бледно-желтого цвета, Тпл. 199-201 (разл.). Спектр ЯМР 1Н, 5, м. д.: 1.30 (^ У = 7.0 Гц, 3Н, СНэ), 4.29 (Я, У = 7.0, 2Н, СН2), 6.89 (ё, У = 7.8 Гц, 1Н, СН), 8.00 (^ 1Н, СН), 8.11 (^ У = 7.8 Гц, 1Н, ОН), 12.73 & 1Н, КН). Спектр ЯМР 13С, 5, м. д.: 14.36, 59.95, 71.05, 96.47, 137.54, 141.60, 142.77, 161.34. Найдено, %: С 37.64; Н 3.63; N 27.31. Вычислено, %: С 37.65; Н 3.55; N 27.44. ИК спектр, V, см-1: 653, 673, 716, 776, 829, 905, 1032, 1086, 1169, 1204, 1294, 1327, 1416, 1446, 1479, 1535, 1587, 1626, 1677, 3228, 3267. ОН