Некоторые особенности механизмов апоптоза при ВИЧ-инфекции тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.36, кандидат биологических наук Колесникова, Ирина Николаевна

• Колесникова, Ирина Николаевна
• кандидат биологических наук
• 2000

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Некоторые особенности механизмов апоптоза при ВИЧ-инфекции»

Актуальность проблемы.

Стремительное развитие исследований по проблеме СПИД и достигнутые успехи медицинской науки и практики, до настоящего времени все же не позволили остановить развитие пандемии ВИЧ-инфекции и разработать эффективные методы профилактики (Покровский В.И., 1999, Fauci A.Z., 1999).

Эта проблема самым серьезным образом обострилась сегодня как в целом по России, так и в отдельных ее регионах. Вспышка 1988-1989г.г. на Юге России, во время которой были инфицированы парентеральным путем группы детей, на сегодняшний день сменилась быстрым ростом числа ВИЧ-инфицированных среди взрослого контингента как наркоманов, так и относительно социально благополучных людей, что несомненно приведет к значительному увеличению количества внутриутробных заражений.

Несмотря на интенсивные исследования многие вопросы в расшифровке интимных механизмов патогенеза ВИЧ-инфекции не нашли своего однозначного решения (Шемшура А Б. 1997, Сизякина Л.П., 1998, Fauci A.Z., 1999).

Основная модель Т-клеточного истощения как ключевого патогенетического момента ВИЧ-инфекции, предложенная Ameisen J. и Capron А. еще в 1991 году, предполагает, что ВИЧ повышает чувствительность CD4 Т-клеток к активационно-индуцированному апоптозу. Последующие исследования Romero-Alvira D. с соавт. (1998), Brown S.B. с соавт. (2000), Yoshino N. с соавт. (2000) подтвердили, что именно гиперактивация апоптоза иммунокомпетентных клеток, является основным фактором непосредственного формирования иммуносупрессии при ВИЧ-инфекции. Однако, несмотря на многочисленные исследования, механизм, посредством которого ВИЧ вызывает усиление апоптоза, все еще не расшифровал окончательно. Одно из объяснений данного феномена основывается на перекрестном связывании gpl20 мембранных молекул CD4 на поверхности Т-лимфоцитов хелперов, что делает их чувствительными к индукции апоптоза при последующей антигенной стимуляции (Jaworowski А. с соавт. (1999). Badjey A.D. (1999) установил, что Т-клетки ВИЧ-инфицированных пациентов подвержены спонтанному апоптозу, неадекватно восприимчивы к активационно-индуцированной клеточной смерти в ответ на связывание Fas-рецептора, а также вследствие цитокинового дисбаланса. Таким образом, ведущая роль процессов апоптоза в иммунопатогенезе ВИЧ-инфекции признается сегодня большинством ученых (Idziorek et al., 1989, Bagetta G. et al., 1999, Chang K.N. et al.,2000).

Поэтому чрезвычайно важно исследование процессов апоптоза в различных стадиях ВИЧ-инфекции, определение роли апоптоза в формировании быстрого и замедленного типов течения заболевания, что дает возможность также оценивать эффективность проводимой терапии (Simon N. et al., 1999, Gougenon M. et al., 1999).

Являются актуальными исследования в области взаимоотношений параметров иммунного статуса и процессов апоптоза. До конца не выяснены закономерности формирования запрограммированной клеточной смерти в различных популяциях и субпопуляциях лимфоцитов при ВИЧ-инфекции, во многом дискуссионным остается вопрос о влиянии степени инфицированности лимфоцитов на интенсивность процессов апоптоза (Gougenon М. et al., 1999, Regame N., 1999)

Таким образом, изучение процессов апоптоза при ВИЧ-инфекции является актуальным в рамках комплексной программы исследований патогенеза ВИЧ-инфекции и СПИДа.

Цель исследования. Изучить динамику процессов апоптоза лимфоцитов у больных ВИЧ-инфекцией. Определить роль процессов апоптоза лимфоцитов в формировании быстрого и медленного вариантов течения ВИЧ-инфекции, а также установить взаимосвязь между степенью инфицированности лимфоцитов и интенсивностью процессов апоптоза лимфоцитов. Задачи исследования.

1. Исследовать динамику процессов апоптоза лимфоцитов в различных стадиях ВИЧ-инфекции в исследуемой группе ВИЧ-инфицированных.

2. Определить роль и оценить прогностическую значимость апоптоза лимфоцитов в формировании различных вариантов клинического течения ВИЧ-инфекции.

3. Оценить соотношение пролиферации и апоптоза лимфоцитов и его прогностическую значимость в установлении степени тяжести и скорости течения ВИЧ-инфекции.

4. Выявить корреляционные связи между степенью инфицированности лимфоцитов и выраженностью процессов апоптоза.

Научная новизна работы. Выявлена динамика процессов апоптоза лимфоцитов в различных стадиях ВИЧ-инфекции. Установлена роль апоптоза лимфоцитов в формировании быстрого и медленного варианта течения заболевания. Изучена ассоциированность процессов апоптоза лимфоцитов со степенью инфицированности лимфоцитов в различных стадиях заболевания ВИЧ-инфекцией.

Основные положения выносимые на защиту:

Анализ соотношения процессов апоптоза лимфоцитов и показателей иммунного статуса свидетельствует об увеличении скорости и степени выраженности процессов апоптоза лимфоцитов по мере прогрессирования ВИЧ-инфекции.

Интенсивность процессов апоптоза лимфоцитов ассоциируется с формированием быстрого и медленного вариантов течения ВИЧ-инфекции.

Соотношение процессов пролиферации и апоптоза лимфоцитов является прогностическим критерием развития ВИЧ-инфекции.

Установлена корреляция между степенью инфицированности ВИЧ и интенсивностью процессов апоптоза лимфоцитов.

Практическая значимость работы. Полученные результаты позволяют рекомендовать определение интенсивности процесса апоптоза для оценки тяжести и стадии ВИЧ-инфекции. Данные по изучению процессов апоптоза могут быть использованы при прогнозировании развития инфекционного процесса и анализе эффективности специфической противовирусной терапии.

Внедрение результатов в практику. Материалы диссертации включены в лекции и семинарские занятия курса "Клиническая иммунология" ФПК РГМУ, а также используются при диагностике, прогнозировании, диспансерном наблюдении, стационарном лечении ВИЧ-инфицированных в первом инфекционном отделении БСМП №1 им. Н.А.Семашко г.Ростова-на-Дону, в областном и региональном центрах по борьбе с ВИЧ-инфекцией.

Структура и объем работы. Диссертация представлена на 125 страницах машинописного текста. Состоит из введения, обзора литературы, материалов собственных исследований, заключения, выводов и списка литературы, включающего 182 источника, в том числе 147 зарубежных. Работа иллюстрирована 40 таблицами и 72 рисунками.

Заключение диссертации по теме «Аллергология и иммулология», Колесникова, Ирина Николаевна

выводы.

1. Повышение экспрессии специфического рецептора апоптоза CD95, а также увеличение степени деградации ядерной ДНК клеток Т-лимфоцитов на ранней стадии ВИЧ-инфекции и усиление данных процессов при прогрессировании заболевания свидетельствует о нарастающей интенсификации процессов апоптоза при развитии ВИЧ-инфекции. Выраженность процессов апоптоза коррелирует с динамикой содержания как Т - лимфоцитов, так и с количеством CD4 и CD8 субпопуляций, играя важную роль в изменении иммунорегуляторного индекса при ВИЧ-инфекции.

2. Экспрессия CD95 и количество клеток с гиподиплоидным набором ДНК во всех стадиях заболевания достигает максимальных значений при быстром варианте течения заболевания, что свидетельствует о патогенетической значимости процессов активационного апоптоза в развитии различных вариантов течения ВИЧ - инфекции.

3. Выявленное снижение пролиферативной активности на фоне усиления процессов апоптоза лимфоцитов, обусловливают уменьшение коэффициента пролиферация/апоптоз, коррелирующего со степенью иммуносупрессии и тяжестью клинической картины, что позволяет рекомендовать его как прогностический при установлении стадии и скорости течения ВИЧ-инфекции.

4. Выраженность процессов активационного апоптоза при ВИЧ - инфекции находится в прямой корреляции со степенью инфицированности лимфоцитов вирусом иммунодефицита, а также с формированием аутоиммунного компонента.

Заключение

Основанием для проведения данных исследований послужило разнообразие и противоречивость литературных данных о роли процессов апоптоза в развитии ВИЧ-1 инфекции, а также недостаточная изученность динамики процессов апоптоза лимфоцитов при ВИЧ-инфекции.

Комплексная программа исследований патогенеза и особенностей клинического течения ВИЧ-инфекции и СПИДа проводилась среди взрослого контингента инфицированных в нозокомиальных очагах Юга России, находящихся в различной стадии заболевания ВИЧ-инфекцией (ГЛАП, пре-СПИД, СПИД).

Результатом исследований процессов апоптоза лимфоцитов в группе инфицированных ВИЧ-1, является определение повышенного содержания, по сравнению с донорами, лимфоцитов экспрессирующих специфический маркер апоптоза CD95, а также лимфоцитов с гиподиплоидным набором ядерного ДНК, что подтверждает мнение Chif W.K. (1999) об активации данного процесса при ВИЧ-инфекции.

Анализ распределения лимфоцитов, экспрессирующих CD95, в различных стадиях заболевания ВИЧ-инфекцией при спонтанном культивировании выявил повышенное их содержание, по сравнению с донорами, уже в стадии ГЛАП и дальнейшее увеличение в стадиях пре-СПИД и СПИД. При стимулированном культивировании наблюдается активация данного процесса во всех стадиях заболевания, однако при этом наблюдалось снижение коэффициента стимуляции, поскольку на более поздних стадиях заболевания (пре-СПИД, СПИД) отмечается высокий уровень экспрессии CD95 при спонтанной культивации и дополнительная стимуляция не давала такого усиления эффекта, как в стадии ГЛАП (рис.64).

-г 3

30

20

10

CD95 сп. CD95 стим. К ст.

ГЛАП пре-СПИД СПИД

Рис.64 Динамика содержания CD95+ Т-лимфоцитов при спонтанной и стимулированной культивации в различных стадиях ВИЧ-инфекции; * -достоверные различия по сравнению с контролем или предыдущей стадией В результате анализа экспрессии CD95 на лимфоцитах в группах с быстро и медленно прогрессирующим течением ВИЧ-инфекции зафиксировано наличие в обеих группах повышенное содержание лимфоцитов несущих CD95, во всех стадиях заболевания.

30

СПИ быстр. CD95 СП.

20

10

S3 медл. CD95 сп. 5—Кст. быстр. §— Кст. медл.

ГЛАП пре-СПИД СПИД

Рис.65 Динамика содержания CD3+CD95+ в группах с различным вариантом течения ВИЧ-инфекции; - достоверные различия по сравнению с контролем или предыдущей стадией Однако более выражено данный процесс наблюдался при неблагоприятном течении ВИЧ-инфекции, что указывает на повышенную готовность лимфоцитов к Fas-зависимому апоптозу (рис.65). Таким образом, полученные данные позволяют предположить, что степень экспрессии лимфоцитами CD95 является значимой в определении как стадии, так и скорости течения ВИЧ-инфекции.

Одним из наиболее значимых патологических эффектов ВИЧ при развитии заболевания является истощение CD4+ субпопуляции Т-лимфоцитов (Ogaizu.N, Me Closkey Т W 1999). В связи с этим представляет большой интерес анализ CD4+ Т-лимфоцитов, экспрессирующих CD95-рецептор верифицирующий степень готовности клеток к апоптозу. Установлено, что у ВИЧ-инфицированных пациентов в стадии ГЛАП на фоне тенденции к увеличению экспрессии CD95 среди Т-лимфоцитов в спонтанных культурах, отмечается достоверное увеличение таких клеток в стимулированных культурах, что указывает на активацию данного процесса после дополнительного стимулирования.

Данные закономерности в полной мере проявляются в стадии пре-СПИД, где в результате интенсификации различных стимулирующих факторов, достоверно повышается экспрессия CD95 в CD4+ субпопуляции Т-лимфоцитов как при спонтанном, так и при стимулированном культивировании, что проявляется в снижении коэффициента стимуляции в сравнении с ГЛАП (рис.66).

40

30 .

20 .

10 . 3 CD4CD95 ст. ! CD4CD95 сп. 2 -о-Кст.

ГЛАП пре-СПИД

СПИД

Рис.66 Динамика экспрессии CD95 на CD4+ Т-лимфоцитах в различных стадиях ВИЧ-инфекции; * - достоверные различия по сравнению с контролем или предыдущей стадией

С последующим утяжелением ВИЧ-инфекции в стадии СПИД количество CD4+ CD95+ Т-лимфоцитов при спонтанной культивации имело тенденцию к снижению по сравнению с пре-СПИД, однако оставалось на высоком уровне по сравнению с ГЛАП. При этом стимулированная экспрессия CD95 на CD4+ Т-лимфоцитах в стадии СПИД продолжала возрастать, что обусловливало увеличение коэффициента стимуляции (рис.67).

В результате анализа экспрессии CD95 на CD4+ Т-лимфоцитах в группах с быстрым и медленным течением ВИЧ-инфекции отмечалась более выраженная интенсивность экспрессии CD95 при быстром варианте течения заболевания, что определяет повышенную степень готовности CD4+ Т-лимфоцитов к апоптозу.

20

15 .

10 быстрое сп. медленное сп. —О— Кст.быстр. —Кст.медл. 2

ГЛАП

СПИД

4+, пре-СПИД

Рис.67 Динамика содержания CD4^CD95+ лимфоцитов в группах с различными вариантами течения ВИЧ-инфекции; * - достоверные различия в группах с различным вариантом течения

По мнению Pantaleo С., Fauci А. (1995), процесс апоптоза интенсифицируется не только среди CD4+, но и среди CD8+ субпопуляций Т-к леток.

Полученные показатели содержания лимфоцитов с фенотипом CD8+CD95+ у ВИЧ-инфицированных пациентов в стадии ГЛАП до и после стимуляции в сравнении с донорами свидетельствуют о повышенной готовности данной субпопуляции к апоптозу, наиболее отчетливо проявляющейся после дополнительной стимуляции, однако не имел такой выраженности как в CD4+ субпопуляции, что отражается в сравнительно низком коэффициенте стимуляции. По мере утяжеления стадии ВИЧ-инфекции (пре-СПИД, СПИД) отмечается повышение экспрессии CD95 на CD8+ Т-лимфоцитах как в спонтанных культурах клеток, так и в стимулированных, что также проявляется в увеличении коэффициента стимуляции и отражает повышение готовности CD8+ Т-лимфоцитов к апоптозу в результате усиливающейся их активации при развитии заболевания. При этом увеличение экспрессии CD95 на CD8+ Т-лимфоцитах при быстром течении ВИЧ-инфекции было более выраженным во всех стадиях заболевания.

Таким образом изучение степени экспрессии CD95 на CD4+ и CD8+ субпопуляциях Т-лимфоцитов отражает повышенную готовность данных субпопуляций к апоптозу, а также является информативным тестом при установлении стадии и скорости течения ВИЧ-инфекции.

Важнейшим итогом экспрессии CD95 и дальнейшего развития апоптоза, к которому приводит реализация целого ряда биохимических этапов, является фрагментация ядерного ДНК клетки (Чередеев А.Н., Ковальчук JI.B., 1999).

При анализе содержания клеток с деградированной ДНК среди Т-лимфоцитов у ВИЧ-инфицированных пациентов в стадии ГЛАП отмечалось значительное увеличение таких клеток, по сравнению с донорами как до и, особенно, после дополнительной стимуляции, и сопровождалось достоверным повышением коэффициента стимуляции. Полученные данные об активации процессов апоптоза лимфоцитов в стадии ГЛАП коррелируют со снижением общего содержания Тлимфоцитов в данной стадии. Значительное увеличение содержания клеток с деградированной ДНК в стимулированных культурах отражает повышенную активацию данного процесса после дополнительной стимуляции, что в более выраженной степени проявляется в последующей стадии ВИЧ-инфекции пре-СПИД (рис.68).

40

30

20

10

-г 3 2

- 1

I спонт. I стим. ■Кст.

ГЛАП пре-СПИД

СПИД

Рис.68 Содержание Т-лимфоцитов с гиподиплоидным набором ДНК в динамике ВИЧ-инфекции; * - достоверные различия по сравнению с контролем или предыдущей стадией В стадии пре-СПИД, в результате интенсификации различных активационных факторов отмечается резкое увеличение содержания клеток с гиподиплоидным набором ДНК при спонтанной культивации, а наблюдаемое увеличение таких клеток при стимулированной культивации было не так выражено, как в стадии ГЛАП, что верифицировалось снижением коэффициента стимуляции.

При анализе клеток с деградированной ДНК Т-лимфоцитов у ВИЧ-инфицированных пациентов в стадии пре-СПИД с различной скоростью прогрессирования заболевания, в группе с быстрым прогрессированием отмечалось значительно более высокое содержание таких клеток как в спонтанных культурах, так и в большей степени в стимулированных культурах клеток, что обусловливало более высокий коэффициент стимуляции по сравнению с медленным течением заболевания (рис.69).

30 25 20 15 10 5 0

ГЛАП пре-СПИД СПИД

Рис.69 Содержание Т-лимфоцитов с гиподиплоидным набором ДНК в группах больных с различным вариантом течения ВИЧ-инфекции; * - достоверные различия в группах с различным вариантом течения

Таким образом, при быстром течении ВИЧ-инфекции в стадии пре-СПИД наблюдается повышенная чувствительность лимфоцитов к дополнительным стимулирующим апоптогенным влиянием in vivo.

С дальнейшим утяжелением ВИЧ-инфекции в стадии СПИД наблюдается снижение содержания клеток с деградированной ДНК при спонтанном культивировании, что вероятно является следствием интенсификации данного процесса в предыдущей стадии заболевания пре-СПИД. Однако при дополнительной стимуляции процесс апоптоза значительно усиливался, что выражалось в увеличении коэффициента стимуляции и свидетельствует о сохранении чувствительности лимфоцитов к апоптогенным стимулирующим факторам.

При анализе содержания клеток с деградированной ДНК среди Т-лимфоцитов у ВИЧ-инфицированных пациентов в стадии СПИД с различной скоростью прогрессирования заболевания не отмечалось i Iбыстроесп. ] медленное сп. -Кст.быстр. ■Кст.медл. 1 значимой разницы содержания данных клеток ни в спонтанных, ни в стимулированных культурах клеток (рис.69).

Таким образом полученные данные указывают на активацию процесса деградации ядерной ДНК Т-лимфоцитов при ВИЧ-инфекции по мере утяжеления стадии заболевания, а также на более выраженное проявление данного процесса при неблагоприятном течении ВИЧ-инфекции. Следует отметить, что усиление интенсивности процессов апоптоза Т-лимфоцитов коррелируют с их общим снижением в процессе прогрессирования ВИЧ-инфекции.

С целью решения вопроса за счет каких субпопуляций происходит выявленное усиление процесса апоптоза Т-лимфоцитов при ВИЧ-инфекции, было исследовано содержание клеток с деградированной ДНК в CD4+ и CD8+ субпопуляциях Т-лимфоцитов. Полученные результаты свидетельствуют о статистически значимом увеличении количества клеток с гиподиплоидным набором ДНК у ВИЧ-инфицированных пациентов по сравнению с донорами как в CD4+, так и CD8+ субпопуляции Т-лимфоцитов, однако в процессе прогрессирования заболевания динамические изменения количества клеток с деградированной ДНК в данных субпопуляциях были различны.

В стадии ГЛАП среди CD4+ субпопуляции Т-лимфоцитов отмечается активное повышение количества клеток с деградированной ДНК как в спонтанной культуре, так и, особенно, в стимулированной культуре клеток, что обусловливало увеличение коэффициента стимуляции. Данный процесс более интенсивно проявляется при неблагоприятном течении ВИЧ-инфекции и коррелирует с резким снижением общего содержания CD4+ субпопуляции Т-лимфоцитов в стадии ГЛАП (рис.70).

40

30

20

10 -0

ГЛАП пре-СПИД СПИД

Рис.70 Содержание CD4 Т-лимфоцитов с гиподиплоидным набором ДНК в группах больных с различным течением ВИЧ-инфекции; * - достоверные различия в группах с различным вариантом течения С утяжелением стадии ВИЧ-инфекции в стадии пре-СПИД наблюдается более выраженная активация процесса деградации ДНК CD4+ лимфоцитов при спонтанном культивировании, что в сочетании с данными о повышении экспрессии CD95, свидетельствует о повышенной чувствительности данных клеток к Fas-индуцированному апоптозу и коррелирует с нарастающим снижением содержания CD4+ субпопуляции Т-лимфоцитов в стадии пре-СПИД. При дополнительной стимуляции не наблюдалось такого резкого увеличения количества клеток с гиподиплоидным набором ДНК как в стадии ГЛАП, в результате чего коэффициент стимуляции в стадии пре-СПИД практически не изменился.

Оценивая степень деградации ДНК CD4+ субпопуляции Т- лимфоцитов в стадии пре-СПИД в группах пациентов с различной скоростью течения заболевания можно отметить высокий уровень содержания клеток с гиподиплоидным набором ДНК как при спонтанном, так и при стимулированном культивировании в группе с неблагоприятным течением заболевания. При медленном течении ВИЧ-инфекции в стадии пре-СПИД процессы деградации ДНК в CD4+ субпопуляции Т- лимфоцитов менее т з i i быстрое сп. медленное сп. —ф— Кст.быстр. —О— Кст.медл. 2 выражены, что говорит о большей сохранности этой патогенетически важной субпопуляции клеток.

В терминальной стадии ВИЧ-инфекции - СПИД наблюдалось снижение количества CD4+ субпопуляции Т-лимфоцитов с деградированной ДНК в спонтанной культуре клеток, что возможно является следствием повышенной активации данного процесса в предыдущей стадии заболевания. Однако, при дополнительной стимуляции отмечается неадекватное увеличение количества CD4+ субпопуляции Т-лимфоцитов с деградированной ДНК, что отражает повышенную чувствительность данных клеток в стадии СПИД к Fas-индуцированному апоптозу. Отмеченная активация процесса деградации ДНК среди CD4+ субпопуляции Т-лимфоцитов в стадии СПИД коррелирует с резким уменьшением их содержания в данной стадии и более выражена при неблагоприятном течении ВИЧ-инфекции (рис.70).

Среди CD8 субпопуляции Т-лимфоцитов в стадии ГЛАП наблюдается увеличение клеток с деградированной ДНК по сравнению с донорами в спонтанной культуре клеток, но отмечается их устойчивость к дополнительной стимуляции, что выражается в незначительном изменении коэффициента стимуляции по сравнению с донорами и коррелирует с небольшим уменьшением общего содержания CD8+ субпопуляции в данной стадии заболевания. Однако если при медленном течении заболевания выявленные закономерности сохраняются, то при быстром течении ВИЧ-инфекции - в стадии ГЛАП отмечаются более низкие показатели деградации ДНК в спонтанной культуре клеток и повышенная чувствительность к дополнительной стимуляции.

Содержание в CD8+ субпопуляции Т-лимфоцитов клеток с гиподиплоидным набором ДНК в стадии пре-СПИД изменяется незначительно по сравнению с предыдущей стадией ГЛАП как в спонтанной, так и в стимулированной культуре клеток. По-видимому отсутствие выраженной динамики в содержании гиподиплоидных CD8+ лимфоцитов и определяет сохранность CD8+ субпопуляции в стадии пре-СПИД. При различном варианте течения ВИЧ-инфекции наблюдались различия в количественном соотношении клеток с деградированной ДНК среди CD8+ субпопуляции. Так, в группе с быстрым течением заболевания отмечалась повышенная реализация апоптоза CD8+ при спонтанной культивации и незначительные изменения при дополнительной стимуляции, что верифицировалось низким коэффициентом стимуляции, по сравнению с показателем в подгруппе с медленным течении заболевания, в которой сохраняется устойчивость к апоптозу при спонтанном культивировании.

В терминальной стадии ВИЧ-инфекции- СПИД отмечается активация процесса деградации ДНК среди CD8+ субпопуляции Т-лимфоцитов как в спонтанной, так и в стимулированной культуре клеток. Причем у пациентов с быстрым течением заболевания данная закономерность сохранялась, когда как при медленном течении ВИЧ-инфекции CD8+ были более устойчивы к апоптозу при спонтанном культивировании, что верифицировалось повышенным коэффициентом стимуляции. Выявленная активация процесса деградации ДНК среди CD8+ субпопуляции Т- лимфоцитов коррелирует со снижением общего количества клеток данной популяции в стадии СПИД.

В результате анализа динамики процесса апоптоза Т-лимфоцитов у ВИЧ-инфицированных пациентов, отмечалось усиление данного процесса по мере утяжеления стадии заболевания, и в особенности у пациентов с быстрым течением заболевания, как среди общего количества Т-лимфоцитов, так и в отдельных субпопуляциях. Причем среди CD4+ субпопуляции апоптоз клеток был более выражен, по сравнению с клетками CD8 субпопуляции, что в конечном счете определило снижение иммунорегуляторного индекса. Полученные результаты исследования констатируют не только количественные изменения Т-лимфоцитов, детерминируемые активацией процессов апоптоза, но и нарушение их функциональной активности. Установлено, что на фоне выраженного снижения количества Т-лимфоцитов, содержание клеток, экспрессирующих HLA-DR, увеличивается по мере утяжеления стадии, а также при быстром течении ВИЧ-инфекцией. Поздняя активация лимфоцитов, на которую указывает экспрессия HLA II класса (Ярилин А.А., 1997 Mathieson Т. et., 1992), свидетельствует о неадекватном повышении функциональной активности лимфоцитов. Увеличение экспрессии антигенов HLA II класса на лимфоцитах по данным Авдеевой Ж.И. с соавт.(1998) отмечено при аутоиммунных заболеваниях, что согласуется с нашими данными, полученные у ВИЧ-инфицированных пациентов. Выявленное динамическое увеличение содержание AT к н-ДНК наблюдаемое по мере утяжеления заболевания указывает на развитие аутоиммунной патологии при ВИЧ-инфекции и согласуется с данными ряда авторов (Edelman, Lolla-Paznes 1989, Stimmler et al 1989, Насонов Е.Л. 1989, 1990, Орлова В.М., 1996, Шестакова И.В., 1999). Свидетельством повышенной активации лимфоцитов при ВИЧ-инфекции может служить также однонаправленное увеличение содержания иммуноглобулинов A,M,G и количество ЦИК в стадиях ГЛАП, пре-СПИД, СПИД, что коррелирует с результатами Enler et al. (1985), Martin et al. (1989), Орлова B.M. (1996), Денисенко В.Б. (1997), Шемшура А.Б. (1997), Сизякина Л.П. (1999).

Выявленная повышенная активация лимфоцитов и наблюдаемая при этом их массовая гибель, является ярким примером феномена "негативных последствий активации" ведущей клетки не к пролиферации, а к апоптозу (Ковальчук Л.В., Чередеев А.Н., 1998).

Результаты анализа пролиферативной активности лимфоцитов в РБТЛ с ФГА указывают на то, что если в стадии ГЛАП при спонтанной активации наблюдается относительная сохранность пролиферативной активности лимфоцитов, то с последующим утяжелением стадии ВИЧ-инфекции данная активность снижается. Дополнительная стимуляция лимфоцитов ФГА также выявила сниженную способность лимфоцитов к пролиферативному ответу как в стадии ГЛАП, так и особенно в пре-СПИД и СПИД, что выражалось в резком снижении индекса стимуляции. Следует отметить, что данный процесс наиболее выражен при быстром течении заболевания.

Поскольку полученные данные указывают на активацию при ВИЧ-инфекции процесса апоптоза и снижение пролиферативной активности лимфоцитов, а данные процессы являются ключевыми в формировании иммунного ответа, представляется интересным и важным анализ соотношения данных процессов в динамике развития заболевания.

Было установлено, что в стадии ГЛАП соотношение процессов пролиферации и апоптоза значительно ниже по отношению к донорам за счет повышенной активации апоптоза и имеет более низкие значения при неблагоприятном течении ВИЧ-инфекции. При прогрессировании заболевания в стадии пре-СПИД значение соотношения данных процессов отличается от предыдущей стадии незначительно, что является результатом активации не только процесса апоптоза, но и значительного снижения пролиферативной способности лимфоцитов. В стадии пре-СПИД также наблюдается более высокие значения соотношения процессов пролиферации и апоптоза при медленном варианте течения ВИЧ-инфекции, являясь благоприятным критериям заболевания. В терминальной стадии ВИЧ-инфекции - СПИД показатель соотношения данных процессов резко снижается, что является свидетельством гиперактивации процесса апоптоза, а более низкие значения при быстром варианте течения заболевания являются неблагоприятным критерием заболевания (рис.71). о.а.

40 пролиф/апоптоз быстр. о пролиф/апоптоз медл.

30 пролиферация/ апоптоз

20

10 10 о о

ГЛАП пре-СПИД

СПИД

Рис.71 Соотношения процессов пролиферации и апоптоза в динамике ВИЧ-инфекции; * - достоверные различия в группах с различным вариантом течения

Таким образом, основываясь на полученных данных, можно утверждать, что дисбаланс таких ключевых процессов, как пролиферация и апоптоз, имеют патогенетически важное значение при ВИЧ-инфекции, а соотношение данных процессов является прогностическим критерием в определении стадии и скорости прогрессии заболевания.

Необходимо отметить, что в реализации процессов позитивной и негативной активации лимфоцитов в динамике ВИЧ-инфекции, приводящей к пролиферации или апоптозу клеток, немалую роль играет степень инфицированности клеток ВИЧ (Чередеев А.Н., Ковальчук JI.B., 1999, Nardelli В. et al., 1995). По нашим данным провирусная нагрузка лимфоцитов прогрессивно увеличивалась с развитием инфекционного процесса и регистрировалась на более высоком уровне при быстром течении заболевания (Рис.72). о.а.

5,5 . 4,5 . 3,5 . 2,5 . 1,5

5,0 4,0 3,0 2,0 1,0 0,0

I IPYL быстр. ЕЕЩ PVL медл. —о— PVL

ГЛАП пре-СПИД

СПИД

Рис.72 Провирусная нагрузка лимфоцитов в динамике ВИЧ-инфекции;

- достоверные различия по сравнению с контролем или предыдущей стадией

Таким образом, развитие ВИЧ-инфекции сопровождается усилением спонтанного и стимулированного процессов апоптоза Т-лимфоцитов, выражающихся в увеличении экспрессии CD95, повышении содержания клеток с деградированной ядерной ДНК, как CD8+ субпопуляции, так и

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Колесникова, Ирина Николаевна, 2000 год

1. Гриневич Ю.А., Алферова А.И. Определение иммунных комплексов в крови онкологических больных.// Лабораторное дело. 1981. - №8. -С.493-495.

2. Денисенко В.Б. Клинико-иммунологическая характеристика ВИЧ-инфекций у детей.// Автореф. дис. канд.мед.наук. Ростов/Дон., 1997. -С.24.

3. Зарецкая Ю.М. Клиническая иммуногенетика. М.: Медицина, 1983. -С.5-12

4. Ковальчук Л,В., Павлюк А.С. и др. Анализ фармакологических средств на модели апоптоза лимфоцитов человека in vitro в норме и при иммунопатологии II Аллергология и иммунология 2000. - Том I. -С.24.

5. Ковальчук Л.В., Чередеев А.Н. // Методические рекомендации по оценке иммунного статуса. 1984. - М. - С.2-55

6. Ковальчук Л.В., Чередеев А.Н. Апоптоз иммуно дефицитных состояний заболеваний. Иммунология. 1999. - №3 - СЛ.

7. Ковальчук Л.В., Чередеев А.Н. // Современные проблемы аллергологии, клинической иммунологии и иммунофармакологии. -М., 1998. С.615-620.

8. Козлов И.Г., Емельянов А.Ю., Давыдова Н.В. и др. // Rus.J.Immunol. -1999,-Vol.4-Р.113-122

9. Коненков В.И. Медицинская и экологическая иммуногенетика. -Новосибирск. 1999. - 167с.

10. Коненков В.И., Мусатов М.И. Подвижность мембранных белков лимфоцитов человека как фактор функциональной активности клеток иммунной системы // Проблемы и перспективы современной иммунологии. Методический анализ. Новосибирск.: Наука. - 1988. -74с.

11. Краснов М.М., Каспаров А.А., Ковальчук JI.B., Павлюк А.С. Полудан в лечении вирусных заболеваний глаз. // Вестн. офтальмол. -1997. т. 133. - №5 - С.35-39.

12. Лозовой В.П. Место иммуногенетических исследований в клинической иммунологии // Иммуногенетические аспекты аутоиммунных заболеваний и вторичных иммунодефицитов. -Новосибирск. 1989. - С.37-38

13. Насонов Е.Л. Инфекция вирусом иммунодефицита человека, ревматическая патология и аутоиммунитет // Тер. архив. 1990. - т.62, №5. - С. 141 -146

14. Никонова М.Ф., Литвина М.М., Варфоломеева М.И. и др. Апоптоз и пролиферация как альтернативные формы ответа Т-лимфоцитов на стимуляцию. // Иммунология. 1999. - №2. - с.20-23

15. Никонова М.Ф., Литвина М.М., Варфоломеева М.И. и др. Апоптоз и пролиферация как альтернативные формы ответа Т-лимфоцитов на стимуляцию. // Иммунология. 1999. - №2. - с.20-23

16. Никонова М.Ф., Ярилина А.А., Ярилин А.А. и др. Апотоз и пролиферация как альтернативнаые формы ответа Т-лимфоцитов на стимуляцию. // Иммунология 1999 №2 С.20-23.

17. Орлова В.М. Иммунологическая и серологическая характеристика динамики ВИЧ-инфекции у детей. Автореф.дис.канд.мед.наук. -Краснодар, 1996. С. 10-15

18. Павлюк А.С. и др. Оценка субпопуляций Т-лимфоцитов у человека. Методические рекомендации М. - 1988. - С. 13-18

19. Петров Р.В., Павлюк А.С., Ковальчук JI.B. и др. // Механизмы иммунорегуляции и иммунная биотехнология. М., 1998. - С.4-12.

20. Покровский В.В. Эпидемиология и профилактика ВИЧ-инфекции и СПИД. М,: Медицина, 1996. - С.4-5

21. Сизякина Л.П., Шемшура А.Б., Плаван В.В., Чумакова Е.А. Иммунопатологические эффекты субтипов А и G ВИЧ-1 при ВИЧ-инфекции. // Междунар. конференция по ВИЧ-инфекции, Paris, December 1999, Abstr.1534

22. Сепиашвили Р.И., Шубич М.Г. и др. // Апоптоз в иммунологических процессах. Аллергология и иммунология. 2000. - Т. 1 - С. 15-23.

23. Филатов А.В, Исследование субпопуляционного состава лимфоцитов в человеческой субпопуляции с помощью панели моноклональных антител // Гематология и трансфузиология. 1990. - №4. - С. 16-19

24. Хаитов P.M., Игнатьева Г.А. СПИД. // М.: Народная академия культуры и общечеловеческих ценностей. 1992. - С. 17-109

25. Чередеев А.Н., Ковальчук Л.В. Клеточные и молекулярные аспекты иммунных процессов. // Итоги науки и техники. Иммунология. т. 19. - ч.2. -М.- 1989. -С.18-19

26. Шарова Н.И., Дзуцев А.Х., Литвина М.М. и др. Результаты взаимодействия лимфоидных и эпителиальных клеток тимуса человека in vitro. Активация и апоптоз. // Иммунология. 2000. - №3 -с.7-11

27. Шемшура А.Б. Особенности макрофагального звена в динамике ВИЧ-инфекции у детей. Автореф.дис.канд.мед.наук. Краснодар, 1997.-С.5-17

28. Шестакова И.В., Автореф.дис.канд.мед.наук. Ростов-на-Дону, " 1999.-С.5-17

29. Ярилин А.А.// Иммунология. 1996. - №6 - С.10-23.

30. Ярилин А.А. // Иммунология. 1997. - №3 - С.9-12

31. Ярилин А.А. Сиситема цитокинов при иммунологической патологии // Тезисы докл. I международной конференции РААКИ. М., 1997. -С.161-167

32. Ярилин А.А. // Изв.Рос.АН. Сер.биол. -1998. №2 - с.142-150

33. Ярилин А.А. Основы иммунологии. // М.: Медицина, 1999. - 639с.

34. Algeciras-Schimnich A, Griffith T.S., Lynch D.H., Paya C.V. Algeciras-Schimnich A. Cell cycle-dependent regulation of FLIP levels and susceptibility to Fas-mediated apoptosis. // J. Immunol. 1999. - Vol.162. N.9. - P.5205-5211

35. Alnemri E.S., Livigston D.J., Nicholson D. et al. Human ICE/CED-3 protease nomenclature. // Cell. 1996. - Vol.87. - P. 171

36. Ameisen J., Capron A. // Immunol.Today. 1991. - Vol.12. - P.l02.

37. Ameisen J.C. Immunodeficiency mechanisms in HIV-infection // Rev de Praticien. 1995. - Vol.45. -N.6 - P.709-14

38. Badley A.D., Parato K., Cameron D.W. et al. Dynamic correlation of apoptosis and immune activation during treatment of HIV infection. // Cell Death Differ. 1999. - Vol.6 - N.5 - P.420-432

39. Banki K., Hutter E., Gonchoroff N.J., Perl A. Molecular ordering in HIV-induced apoptosis. Oxidative stress, activation of caspases, and cell survival are regulated by transaldolase. // J. Biol. Chem. 1998. - Vol.273. - N.19 -P.l 1944-53

40. Barre-Sinouissi F., Cherman J., Rey F. Isolation of a lymphotropic retroviruses from a patient at risk for AIDS // Science. 1983. - Vol.220. - N.4599 - P.868-871

41. Berman A., EspinosaL., Diaz J. Rheumatic manifestations of HIV-infection. // Am J.Med. 1988. - Vol.85. - N.l - P.59-64

42. Biwa M., Hara A., Kanamori Y. et.al. // Life Sci. 1997. - Vol.61. - P.205-215.

43. Bohler Т., Debatin K.M., Linde R. Sensitivity of CD4+ peripheral blood T cells toward spontaneous and CD95 (APO-l/Fas)-induced apoptosis in pediatric human immunodeficiency virus infection. // Blood. 1999. - Vol.94 - N.5 -P. 1829-1833

44. Bortner CD, Cidlowski JA Caspase independent/dependent regulation of K(+), cell shrinkage, and mitochondrial membrane potential during lymphocyte apoptosis. // J. Biol. Chem. 1999. - Vol.274. -N.31. - P.21953-21962

45. Brown S.B., Clarke M.C., Magowan L., Sanderson H., Savill J. Constitutive death of platelets leading to scavenger receptor-mediated phagocytosis. A caspase-independent cell clearance program. // J. Biol. Chem. 2000. -Vol.275.-N.8-P.5987-5996

46. Brown T.L., Patil S., Cianci C.D., Morrow J.S., Howe P.H. Transforming growth factor beta induces caspase 3-independent cleavage of alphall-spectrin (alpha-fodrin) coincident with apoptosis. // Blood. 1999. - Vol.94. - N.5 -P.1829-1833

47. Bursh W., Kleine L., Tenniwood M. // Biochem.Cell Biol. 1990. - Vol.68. -P.1071

48. Chirmule N., Pahwa S. Envelope glycoproteins of human immunodeficiency virus type 1: profound influences on immune functions. // Microbiol-Rev. -1996. Vol.60 -N.2 - P.386-406

49. Chitnis D., Dickerson C., Munster A., Winchurch R. // J. Leukoc.Biol. 1996. - Vol.59 -P.835-839

50. Clerici M., G. Shearer Thl/Th2 hypothesis of HIV-infectin: new insights // Immunol Today. 1994. - Vol.15. -N.12 - P.575-581

51. Cohen J. Caspase: the executioners of apoptosis. // Biochem.J. 1997. -Vol.326. -P.l-16

52. Cohen J., Barankievich J. // Arch. Biochem. 1987. - Vol.258. - P.498-503

53. Cohen J., Duke R. // J.Immunol. 1984. - Vol.132. - P.138-142

54. Cohen J., Semin U. // Immunol. 1992. - Vol.4. - P.363-369

55. Cohen J., Sun X.Fearnhead H. et al. // J.Immunol. 1994. - Vol.153. - P.507-5116

56. Cohen J.J. // Semin. Immunol. -1992. -Vol. 4. P. 363-369.

57. Cohen J.J., Duke R.C.//Ibid. -1984. -Vol. 132 -P.38-42.

58. Coito C., Bomsel M. B7 cosignal potentiates apoptosis of uninfected CD4+ T-lymphocytic cell lines primed by HIV envelope proteins. // AIDS Res. Hum. Retroviruses. 1999. -Vol.15. - N.6 - P.509-521

59. Collette I., Zauli G., Gibellini D. et al. // 12 world AIDS Conf., July., 1998, Abstr.111145.

60. Darmon A., Nicolson D. // Nature. 1995. - V.377. - P.446-448

61. Dausset J., Hors J. Some contributions of the HLA-complex to the genetics of human diseases. // Transplant. Rev. 1975. - Vol.22. - P.45

62. Donnenberg A.D., Margolick J.B., Donnenberg V.S. Lymphopoiesis, apoptosis, and immune amnesia. // Annals of the New York Academy of Sciences. 1995. - Vol.770. - P.213-226

63. Duke R.C. // Sem. Immunol. 1992. - Vol.4. - P.407-412

64. Duvall E., Wyllie A. // Immunol. Today. 1986. - Vol.7. - P.l 15-119

65. Edelman A.S., Zolla-Pazner S. AIDS: a syndrome of immune dysregulation, dysfunction and deficiency // FASEB J. 1989. - Vol.3. - N.l - P.75-78

66. Enari M. et al. // Nature. 1998. - Vol.391. - P.43-50

67. Fauci A.Z. // J.Immunology. 1999. - Vol.359. - P.1247-1251

68. Finkel Т.Н. Potential use of a caspase against HIV. // JAMA 1999. -Vol.282. - N.l 1 -P.1021-1022

69. Gajewski T.F., Tomson C.B. Apoptosis mectssignals transduction: elimination of a BAD influence. // Biochem.Cell Biol. 1996. - Vol.87. - P.589-592

70. Gougeon M.L., Lecoeur H., Sasaki Y. Apoptosis and the CD95 system in HIV disease: impact of highly active anti-retroviral therapy (HAART). // Immunol. Lett. 1999. - Vol.66 - N.l-3 - P.97-103

71. Green D., Bissonnette R.P., Glynn J. et al. // Sem. Immunol. 1992. - Vol.4. -P.379-388

72. Groux H., Monte O., Plouvier B. et al. // Eur.J.Immunol. 1993. - Vol.23. -P. 1623-1629

73. Haskova V., Kaslik J., Matl I. Novy spusob stanoveni cirkalujcick immunokomplexi. // Cas. Zer.Ces. 1977. - N.4 - P.436-437.

74. Haynes B.F. //Thymus. 1990. - Vol.16. -P. 143-157

75. HebertM. J., Takano Т., Hojthoefer H. et.al.// J. Immunol. 1996. - Vol.157. -P.3105-3115.

76. Hebert M., Takano Т., Holthoefer H. et al. // J. Immunol. 1996. - Vol.157 -P.3105-3115

77. Hernandes-Caseles Т., Stutman O. // J.Immunol. 1993. - Vol.151. - P.3999-4012

78. Hewish D.R., Burgoyne L.A. // Biochem.biophys.ResCommun. 1973. -Vol.52. -P.504-510

79. Homburg C., Roos D. // Curr.Opin.Hematol. 1996. - Vol.3 - P.94-99

80. Honami Naora, GougenonM. et al. //// 12 world AIDS Conf., July., 1998, Abstr.280/21162.

81. Hrimech M., Yao X.J., Bachand F., Rougeau N., Cohen E.A. Human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) Vpr functions as an immediate-early protein during HIV-1 infection. // J.Virol. 1999. - Vol.73. - N.5 - P.4101-4109

82. Hsu S.C., Gavrilin M.A., Tsai M.H., Han J., Lai M.Z. p38 mitogen-activated protein kinase is involved in Fas ligand expression. // J.Biol.Chem. 1999. -Vol.274. -N.36 - P.25769-25776

83. Ishizaki Y., Jakobson H., Raff M. // J.Cell Biol. 1998. - Vol.140. - P.153-158

84. Iwakura Y., Maiyao T. // 12 world AIDS Conf., July., 1998, Abstr.l 1142.

85. Jacobson M.D., Weil M., Raff M. // Cell. 1997. - Vol.88-P.347-354

86. Jameson S.C., Hogquist K.A., Bevan M.J. // Ann. Rev. Immunol. 1995. -Vol.13. -P.93-126.

87. Jaworowsky A., Crowe S. // ImmunoI.Cell Biol. 1999. - Vol.77. - P. 190-198

88. Kameoka M., Auwanit W., Suzuki S., Horikoshi H., et al. A specific T-cell subset with CD4+/CD38- markers derived from HIV-1 carriers induces apoptosis in healthy donor-derived T-lymphocytes. // Virus. Res. 1998. -Vol.56.-N.l -P.l 15-122

89. Kawabe Y., Ochi A. // Nature. 1991. - Vol.349. - P.245-248

90. Kern F., Ode-Hakim-S, Vogt K., Hoflich C., Reinke P., Volk-H.D. The enigma of CD57+CD28- T cell expansion-anergy or activation? // Clin.Exp.Immunol. 1996. - Vol.104. - N.l - P.180-184

91. Kimura K., Gelmann E.P. Tumor necrosis factor-alpha and Fas activate complementary Fas-associated death domain-dependent pathways that enhance apoptosis induced by gamma-irradiation. // J. Biol. Chem. -2000. V.275 -N.12 - P.8610-8617

92. Kornbluth R. // J.Leuc.Biol. 1994. - Vol.56. - N.3 - P.247-256

93. Korsmeyer S. //Trends Genet. 1995. - Vol.11. -P.101-105

94. Kothakota S., Asume Т., Reinhard С et al. // Science. 1997. - V.278 - P.294-298

95. Krakauer D.C., Nowak M. M T-cell induced pathogenesis in HIV: bystander effects and latent infection. // Proc.R.Soc.Lond.B.Biol.Sci. 1999. - Vol.266 -N.1423 - P.1069-1075

96. Kroemer G. // Cell death Different. 1997. - Vol.1. - P.450-456

97. Kroemer G., Martinez A.C. Pharmacological inhibition of programmed lymphocyte death. // Immunol.Today. 1994. - Vol.15. - N.5 - P.235-242

98. Kuhnel F., Zender L., Paul Y., Tietze M.,K., Trautwein C., Manns M., Kubicka S. NFlcappaB mediates apoptosis through transcriptional activation of Fas (CD95) in adenoviral hepatitis. // J. Biol. Chem. 2000. - Vol.275. - N.9 -P.6421-6427

99. Leist M. // Cell death Different. 1997. - Vol.5. - P.516

100. Leist M., Nicotera P. // Cell death Different. 1997. - Vol.4. - P.517-538

101. Levy J.A., Kaminski L.S., Morrow W.J. et al. Infection by the retrovirus assotiated with AIDS clinical, biological and molecular features // Ann. Intern.Med. 1985. - Vol.103. - N.5 - P.694-699

102. Levy J.A., Shimabulcuro J. Recovery of AIDS-assotiated retroviruses from patients with AIDS and AIDS-related conditions and from clinically healts with AIDS //Fortschr. Ophthalm. 1985. - Vol.125. - N.4 - P.734-738

103. Lewis D.E., Ng Tang D.S. et al. Costimulating pathways mediate monocyte-dependent apoptosis in HIV // J.Clin.Immunol. 1999. - V1.90. - N.3 -P.302-312

104. Litman D.R. // Curr.Biol. 1994. - Vol.4. -P.618

105. Lotem J., Sachs L. // Blood. 1993. - Vol.82. - P.1092-1096

106. Lowe S., Schmitt E., Smith S. et al. // Nature. 1993. - Vol.362. - P.847-849

107. Lu W., Salerno-Goncalves R., Yuan J., Sylvie D., Han D.S., Andrieu J.M. Glucocorticoids rescue CD4+ T lymphocytes from activation-induced apoptosis triggered by HIV-l: implications for pathogenesis and therapy. // AIDS. 1995.-Vol.9.-N.l-P.35-42.

108. Maldarelli F., Sato H., Berthold E., Orenstein J., Martin MA. Rapid induction of apoptosis by cell-to-cell transmission of human immunodeficiency virus type 1. // Journal of Virology. 1999. - Vol. 69 - N.l 0 - P.6457-6465,

109. Martin S., Lennon S.V., Bonham A.M. // J.Immunol. -1989. Vol.145. -P.l 859-1867

110. Mathiesen Т., Collins V.P., Ohlsson E. et al. Induction of class I antigen expression following infection of a human esthsioneuroblastoma cell line with cytomegalovirus HIV. // Acta virol. 1992 - Vol.36. - N.6 - P.551-556

111. Matsumoto Y., Shinzato Т., Amano I. et al. // Biochem.Biophis.Res.Commun.- 1995.-Vol.215.-P.98-105.

112. McCloskey Т., OttM., Tribble E et al. // J.Immunol. 1997. - Vol.158. -N.2 -P.1014-1019

113. McCloskey Т., Oyazu N., Coronesi M. // Clin.Immunol.Immunopath. 1994. -Vol.71 -P.14-18

114. Migliorati G., Pagliacci M., Moraca R. et al. // Int.J.Cell.Lab.Res. 1992. -Vol.21.-P.300-303

115. Montagnier L., Gougoen M., Olivier K. et al. Factors and mechanisms of AIDS pathogenesis // Science challenging AIDS. Basel. 1992. - P.51-70

116. Muro-Cacho C.A., Pantaleo G., Fauci A. // J.Immunol. 1995. -Vol.154. -N.10 - P.5555-5566

117. Nagata S. // Cell. 1997. - Vol.88. - P.355-365

118. Nakahara H., Sato E., Ishiaka R. et al. // Free Radic. Res. 1998. - Vol.28 -P.485-495

119. Nardelli В., Gonsalez C. et al. // PNAS USA 1995. - Vol.92. - P.7312

120. Newel M., Haughn L., Maroun K. // Nature. 1990. - V.347. - P.286-289

121. Niwa M., Hara A., Kanamori Y et al. // Life Sci. 1997. - Vol.61 - P.205-215

122. Nossal G. // Cell. 1997. -Vol.76 - P.229-240

123. O'Reily, Strasser A. Apoptosis and autoimmune disease. // Inflam.Res. 1999.- Vol.48.-N.5.-P.5-21

124. Odaka C., Kizaki H., Tadakuma T. // J.Immunology. 1990. Vol.144. -P.2096-2101

125. Oltavi Z., Milliman C. // Cell. 1993. - Vol.74.- P.609-612

126. Pantaleo G., Fauci A. // New concepts in the immunopathogesis of HIV-infection // Annu.Rev. Immunol. 1995. - Vol.13 - P.487-512

127. Piedimonte G., Crinelli R., Salda L.D. et al. Protein degradation and apoptotic death in lymphocytes during Fiv infection: activation of the ubiquitin-proteasome proteolytic system. // Exp.Cell.Res. 1999. - Vol.248. - N.2 -P.381-390

128. Radrizzani M., Accornero P., Amidei A et al. // Cell.Immunol. 1995. -Vol.161.-N.l -P.14-21

129. Rapaport E., Casella C., Mustafa F. et al. Mapping of HIV determinants of apoptosis in infected T-cells. // Virology. 1998. - Vol.252. - N.2 - P.407-417

130. RochaB., von Boehmer H.// Science. 1991. - Vol.251. - P.l225-1228

131. Romero-AlviraБ^сс9авзЦ1998), I/

132. Rosenberg Z., Fauci A . Immunopathogenesis of HIV-infection. // FASEB -1991. Vol.5. - N.6 - P.2382-2390

133. Rosenberg Z., Fauci A. Immunopathogenic mechanismes of HIV-infection: cytokine induction of HIV expression // Immunol. Todey 1990. - Vol.11. -N.5 - P. 176-180

134. Rosok B.I., Brinchman L.E., Stent G. // AIDS.Res.Hum.Retovir. 1998. -Vol.2014. - N.18 - P.1635-1645

135. Ross M.E., Caligiuri M. // Blood. 1997. - Vol.89. - N.3 - P.910-918

136. Rossio J.L., Bess J.J., Henderson L. // AIDS.Res.Hum.Retovir. 1995. -Vol.12.-P.14-33-1439

137. Rothenberg E.V. // Cur.Opin.Immunol. 1994. - Vol.6 - P.229-240

138. Rothenberg E.V., McGuire K., BoyerP. // Immunol. Rev. 1988. - N.104. -P.29-53

139. Russel J., White C., Loh D, Meleedy-Rey P. // PNAS USA. 1991. - Vol.88 -P.2151-2155

140. Savill J., Fadok V., Henson P., Haslett C. // Immunol/Todey. 1993. - Vol.14. -P.131-136

141. Scaffidi C., Kirchhoff S., Krammer P.H., Peter M.E. Apoptosis signaling in lymphocytes. // Cur.Opin.Immunol. 1999. - Vol.ll - P.277-285

142. Seely A., Swartz D., Giannias B, Christou N.V. // Arch. Surg., 1998. -Vol.133-P.1305-1310

143. Sellins K.S., Cohen J. // J.Immunol. 1987. - Vol.139.- P.3199-3206

144. Sheuring U., Sabzevari H. et al. // AIDS. 1999. - Vol.13. - N.2 - P.167-175

145. Shorle H.T., Holtschke T. et al. // Nature. 1991. - Vol.352. - P.621

146. Shostak L., Ludlow J., Fisk J. et al. Roles of p53 and caspases in the induction of cell cycle arrest and apoptosis by HIV-1 vpr. // Exp. Cell. Res. 1999. -Vol.251 - N.l -P.156-165

147. Simon N., Yousefi S., Dommann-Scherrer-C.C., Zimmermann D.R. et al. Expansion of cytokine-producing CD4-CD8- T cells associated with abnormal Fas expression and hypereosinophilia. // J.Exp.Med. 1999. - Vol.183. - N.3 -P.721-724

148. Sprent J., Webb S.R. // Curr.Opin.Immunol. 1995. - Vol.7. - P. 196-205

149. Stimmler M., Quismorrio F., McGehee J. Anticardiolipin antibodies in AIDS // Arch. Intern. Med. 1989. - Vol.149. -N.8 - P.1833-1835.

150. Thompson C.B. // Science. 1995. - Vol.267. - P.1456-1462

151. Tsuchida H., Takeda Y., Takei H. et al. // J. Immunol. 1995. - V.154 -P.2403-2412

152. Ucker D.S., Meyers J., Obermiller P. // J.Immunol. 1992. - Vol.149 -P.1538-1544

153. Uehara T. Miyawaki T. Ohta K. Tamaru Y. Yokoi T. Nakamura S. Taniguchi N. Apoptotic cell death of primed CD45RO+ T lymphocytes in Epstein-Barr virus-induced infectious mononucleosis. Blood. 80(2):452-8, 1992 Jul 15.

154. Vanderbielt J.N., Bloom K.S., Anderson J.N. // J.Biol.Chem. 1982. -Vol.257.-P.13009-13017

155. Von Boehmer H. // Cell. 1994. -Vol.76. - P.219-228

156. Vukmanovich S., Jameson S.C., Bevan. M. // Int.Immunol. 1994. - Vol.6 -P.239-246

157. Wang L., Chen J. A novel mechanism of CD4 lymphocyte depletion involves effects of HIV on resting lymphocytes: induction of lymphnode homing and apoptosis. // J.Immunol. 1999. - Vol.162. -N.l - P.268-276.

158. Wang S.D., Huang K., LiuY. et al. // J.Immunol. 1994. - Vol.152. - P.1514-1521

159. Wesselborg S., Janssen O., Kabelitz D. // J.Immunol. 1993. Vol.150 -P.4338-4345

160. White E. // Genes Dev. 1996. - Vol.10. - P. 1-15

161. Wijsman J., Joniver R., Kegzer R. et al. // J.Histochem.Cytochem. 1994. -Vol.41.-P.7-12

162. Williams J.R., Litle J.B., SHipley W. // Nature. 1974. - Vol.252. - P.754-755

163. Wu J. et al. // PNAS USA. 1994. - Vol.91. - P.2344125

164. Wu J., Daley J., Rasmiissen R et al. I I J.Cell Biochem. 1995. - Vol.198. -P.306

165. Wyllie A., Kerr J., Curie A. // Int. Rev. Cytol. 1980. - Vol.68. - P.251-306

166. Yarilin A.A. // Russian J.Immunol. 1998. - Vol.3 - P.5-20

167. Yoo J., Chen H., Kraus Т., Hirsch D., Polyak S., George I., Sperber K. Altered cytokine production and accessory cell function after ВИЧ-1 infection. // ^ J.Immunol. 1996. - Vol.157. - N.3 - P.1313-1320

168. Yoshino N., Ryu Т., SugamataM., IharaT., Ami Y., ShinoharaK., Tashiro F., Honda M. Direct detection of apoptotic cells in peripheral blood from highly pathogenic SHIV-inoculated monkey. // Biochem.Biophys.Res. Commun. -2000. Vol.268. - N.3 - P.868-874

169. Yoshioka M., Bradley W.G., Shapshak P., Nagano I., Stewart R.V., Xin K.Q., Srivastava A.K., Nakamura S. Role of immune activation and cytokine expression in ВИЧ-associated neurologic diseases. // Adv.Neuroimmunol. -1995. Vol.5 - N.3 - P.335-358

170. Zhyvolovsky В., Cedervall В., Jiang S et al. // Biochem.Biophys.Res. Commun. 1994. - Vol.202. -P. 120-127