Антибактериальное действие липосом и возможность их применения для профилактики раневой инфекции тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.07, кандидат биологических наук Мельянцева, Лариса Петровна
- Специальность ВАК РФ03.00.07
- Количество страниц 155
Заключение диссертации по теме «Микробиология», Мельянцева, Лариса Петровна
- 107-ВЫВОДЫ
1. Суспензия фосфатидилхолин-холестериновых липосом обладает прямым бактерицидным действием по отношению ко всем исследованным условно патогенным и патогенным микроорганизмам в дозах 1.5-3.2 мг/ мл и выше. Чувствительность к действию препарата убывает в ряду: Salmonella entiriditis, Proteus mirabilis, Staphylococcus aureus, Pseudomonos aeruginosa и Escherichia coli.
2. Бактерицидная активность препарата определяется не только его молекулярным составом, но и обусловлена наличием везикулярной структуры используемых липидов, при отсутствии которой эффективность препарата снижается в 4 - 16 раз.
3. Бактерицидная активность липосомальной суспензии зависит от ее рН и содержания продуктов ПОЛ. Оптимальными параметрами липосомальной суспензии являются рН 4.8+-0.12, уровень Щк 51.70+-2.34 нмоль /мл - 75. 75+-7. 03 нмоль/мл. При этих условиях МПК препарата составляет для Staphylococcus aureus -0.8 мг/мл, для Pseudomonos aeruginosa - 1.6 мг/мл.
4. Суспензия липосом в концентрациях в 125 - 250 раз ниже ин-гибиторных обладает антиадгезивным действием по отношению к эукари-отическим клеткам.
5. Введение суспензии фосфатидилхолин-холестериновых липосом с заданными параметрами подкожно животным дистальнее огнестрельной раны в дозе 25 мг/мл/кг приводит к снижению уровня обсемененности раны и инвазивноети бактерий вглубь тканей раневого канала.
Автор благодарит научных руководителей работы Заслуженного деятеля науки РСФСР, профессора Е М. Мельникову и Заслуженного деятеля науки РСФСР, профессора Т. И. Щраера, выражает искреннюю благодарность за творческую помощь д. м. н. В. М. Крейнееу, а также Н. Т. Лагунову, Я М. Марголина, И. М. Устьянцеву, R Г. Булгакова и Е. М. Еропкину за большую техническую помощь при подготовке материалов диссертации.
- 96 -ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Одним из перспективных направлений в современной медицине является использование липосомальной формы лекарственных препаратов и самих липосом для лечения целого ряда заболеваний (А. В. Стефанов с соавт. ,1980, 1984; М. А. Владимирский с соавт. ,1981; В. IL Торчилин с соавт. , 1982; G. Gregoriadis, 1973 и др.). Выявленный авторами терапевтический эффект липосом основан на их способности встраиваться в цитоплазматическуго мембрану эукариотических клеток или обмениваться с ними лйпиднымй компонентами. Можно предположить, что подобный эффект может проявляться и при взаимодействии липосом с бактериальными клетками. Однако наличие на поверхности бактерий клеточной стенки является препятствием для непосредственного контакта между липосомальной и цитоплавматической мембранами. Поэтому вопрос о том. оказывают ли липосомы на бактериальную клетку столь же положительный эффект вследствие модификации клеточной мембраны оставался нерешенным, Тем не менее отсутствие непосредственного контакта между липосомальной и бактериальной цитоплавматической мембранами не исключает возможности воздействия липосом на другие поверхностные структуры бактерий. Кроме того, влияние на функциональную активность бактериальной клетки могут оказывать продукты биодеградации липосомальных липидов. В связи с этим изучение возможности влияния липосомальной суспензии на жизнеспособность бактериальной клетки может иметь как научный интерес, так и значимость для практического здравоохранения. Решение этих вопросов к явилось предметом нашего исследования.
Проведенные исследования впервые позволили установить, что пустые липосомы из фосфатидилхолина и холестерина в молярном соотношении 7: 5 обладают прямым бактерицидным действием на культуры условно патогенных и патогенных микроорганизмов. При этом степень чувствительности бактерий к действию препарата зависит от их видо nn> „
О I вой принадлежат Б результате проведенных исследований была определена минимальная подавляющая концентрация липосом для изучаемых штаммов бактерий, которая черев 24 часа инкубации составила для Pseudoronos aeruginosa и Escherichia ooli - 6.2 мг/мл, для Staphylococcus aureus и Proteus mirabilis - 3.1 мг/мл и для SaliTionella enter! tidis - 1. 5 мг/мл. Продление сроков инкубации до 48 и 72 часов позволило еще более снизить ингибирувдие концентрации препарата. Таким образом, выраженность зарегистрированного бактерицидного эффекта липосом находится в прямой зависимости от дозы использованного препарата и времени его воздействия на микроорганизмы. Присутствие: в среде инкубации компонентов биологических жидкостей снижает активность суспензии липосом, которая сохраняется для S. aureus при увеличении концентрации до 6.2 мг/мл, для гра-мотрицательных палочек - до 25.0 мг/мл и времени инкубации до двух суток. Снижение бактерицидной активности липосом может явиться и-ледст] дуктах их деградации (G. Weismann et all. ,1977; D. Hoekstra, G. Scherphof,1979), что приводит к увеличению проницаемости липосом, и, вследствие этого, их разрушению (Т. М. Allen,1981). i с&п. гиЬгП. «иЛиииитЕ» ии^ДЬ ± aojaisj± uuuwja wtdwtfariwe i-, ± у у гьж g ynUs* Uwpc& зование, выявленная способность липосом подавлять рост бактерий может быть обусловлена как свойствами их структурных компонентов, так и упорядоченной структурой липидных молекул в составе липосомальной мембраны. Поэтому для решения вопроса о механизме антибактериального действия липосом важным этапом явилось определение влияния на этот процесс структурной организации микровезикул. Для этого изучали влияние на жизнеспособность бактериальной клетки исходных ингредиентов липосом в нелипосомальной форме. В результате проведенной работы выявлено, что в генезе бактерицидного действия отготт-твием сорбции везикул на белковых компонентах плазмы и про no su липосом существенное значение принадлежит упорядоченной бислойной структуре липосомальных везикул, так как использование липидов того ш состава в мицеллярной форме бактерицидного эффекта на исследуемые культуры практически не оказывает. Таким образом, проведенные исследования показали, что суспензия липосом может быть использована для подавления роста микроорганизмов.
Известно, что активность, многих веществ, в том числе и лекарственных, в большой степени зависит от физико-химических характеристик как самого препарата, так и условий внешней среды. В связи с этим для эффективного воздействия липосом на жизнедеятельность бактериальной клетки важным вопросом явилось изучение параметров, влияющих на бактерицидную активность липосом, и определение их оптимальных значений. Данные литературы свидетельствуют о зависимости физико-химических свойств липосомальной суспензии от величины рН (A. JL Клибанов с соавт. ,1990; S. Tftoml inson et al. ,1989) и содержания в ней продуктов ПОЛ (КХ А. Владимиров, 1989; 0. Cantoni et al. ,1989; Th. A. Dahl et al. Д989; M. A. Nesmeyanova, XL V. Bogdanov, 1989). Поэтому для решения вопроса о возможности использования липосом в качестве антибактериального средства важной задачей явилось изучение и оптимизация этих показателей в липосомальной суспензии, а также стандартизация получаемых липосом по величине рН и уровню липидной пероксидации.
В результате проведенных исследований установлено, что антибактериальная активность суспензии липосом имеет обратную зависимость от ее рЕ При этом чувствительность культуры Ps. aeruginosa к действию препарата уменьшается с увеличением рН, и при значениях рН < 6 антибактериальный эффект липосом не проявляется. Для культуры S. aureus эффект отмечен при всех исследуемых значениях рН, хотя в кислой среде бактерицидная активность липосом проявляется на более раннних сроках. Такие различия в активности липосомальной суспензии по отношению к представителям грамположительной и грамот рицательной флоры могут быть связаны с характером строения их клеточной стенки. В случае грамположительных бактерий непосредственный контакт липосомальной и цитоплазматической мембраны невозможен из-за наличия клеточной стенки, и воздействие липосом на клетку может носить лишь опосредованный характер, осуществляясь либо за счет сорбции липосом на поверхностных структурах бактериальной клетки (В. И. Карамушка с соавт., 1987), либо за счет обмена отдельными липидными компонентами (L. I.Barsukov et al. ,1976), либо пп пттагп n ^TmtjTjrrr тАтя"пт»тттттпг гтплтгггт^тлг» Лгттглт?п*эт?пттг*г* wrmnnAim ттх. гттгчг ОС% ЬЧС1 JоЛжШПМШ А иXIЧп£3iA rbXSJG SJlfLUMtbl родеЩШгх ^шии^ишсушдЫА липидов СЮ. А. Владимиров, А. И. Арчаков,1972).
При взаимодействии липосом с грамотрицательными бактериями по мимо перечисленных механизмов может происходить непосредственное слияние липосом с внешней мембраной бактериальной клетки (S. Thomlinson et al.,1989). В этом случае липосомы, за счет модификации липидного бислоя мембран, могут выполнять свою защитную функцию, и на некоторое время предохранять бактериальную клетку от разрушения, с чем, вероятно, и связаны более длительные сроки гибели Ps. aeruginosa под действием липосомальной суспензии с кислыми значениями рН. Так как процесс слияния липосомальной и клеточной мембран наиболее активно осуществляется при нейтральных значениях рН (S. Thomlinson et al. ,1989), этим можно объяснить тот факт, что при рН > 6 липосомы бактерицидного влияния на клетки грамотрица-тельных бактерий не оказывают. Кроме того, при рН >= 8 происходит увеличение количества бактерий в суспензии, что может быть связано с расищплением липосомальных липидов бактериальными ферментами (фосфолипаза С, щелочная фосфатаеа и др.} (А. Ф. Мороз, 1988) с последующим использованием продуктов их деградации в качестве : источ
- 100 кика питании.
Как известно, в присутствии кислорода фосфолипидные компоненты искусственных и биологических мембран подвержены процессу перекис ного окисления (Ю. А. Владимиров, А, И. Арчаков, 1972}, в результате чего происходит деформация мембранного лнпопротеинового комплекса, il4J.D ЕИШСЮ -L ИриАмЦоЬшии JL JJ WIOIWUpOJl ЦМЛ WpVjiUnUXS вида», иУДСкЙЛЯС: iUJl активность мембраносвязакных ферментов, нарушается целостность мембранного бислоя, что в итоге приводит к цитолизу и гибели клетки. В связи с этим, функциональная активность бактериальных клеток во многом определяется содержанием в их мембране и во внешней среде первичных и вторичных продуктов ИОД (Г, Готтшалк,1982; 0. Cantoni et al. ,1989; Th. A. Dahl, 1989). Поэтому воздействие на бактериальную клетку продуктов пероксидации липосомальных липидов может оказать значительное влияние на жизнеспособность бактериальной клетки.
В результате проведенных исследований показано, что в процессе инкубации как липосомальной, так и липосомально-бактериальных суспензий происходит накопление в них продуктов перекиеного окисления липидов. При этом содержание ЩА в них к концу периода наблюдения увеличивается прямопрспорционально значению рН липосомальной суспензии. Таким образом, б результате совместной инкубации wetn,±opjujri >ШгшиЬимсышпи1а и^ип^линш na,n.uiuicnjric; хз srmrvj бационной среде продуктов ПОЛ и гибель бактериальных клеток. Доказательством тому, что накопление продуктов липидной пероксидации играет существенную роль в механизмах 'гибели бактерий, явились результаты эксперимента, в котором для инкубации с бактериями использовали липосомы различной степени окисленности. В работе впервые показано, что содержание продуктов ПОЛ в липосомальной суспензии оказывает существенное влияние на выраженность бактерицидного действия липосом. В то же время, этот эффект не косит прянепропорциональной зависимости. Так, повышение уровня ЩА липосо-мальных суспензий с 31.53+-3.12 нмоль/мл до 42.17 +-3. 86 нмоль/мл не вносит достоверных изменений в характер роста бактериальных культур, и лишь высокая степень окисленности суспензии (67.75 +-5.18 нмоль/мл и более) вызывает выраженное увеличение антибактериальной активности липосом.
Как и при воздействии кислых продуктов среды, влияние продуктов ПОЛ на жизнеспособность бактериальной клетки оказалось более выраженным по отношению к грамотрицательным бактериям. Вероятно, большая устойчивость культуры Ps. aeruginosa к используемым липосо-мам по сравнению с S. aureus связана с различной активностью у этих культур ферментативных систем, как принимающих участие в метаболизме перекисей липидов {цитохромы, каталаза, глутатионпероксидач, m тг1 тх тхгтптх&7хг\*пг\тчггггг «чтгмтг ттгкптталл i шг-,-л:-Ь/~ч т-iг\ тт г-lтл.^.тг-Т'П'г~,;Т*Cf •— oaf , хan, mi пах пипууаяЩгих oiui имУЦсии i. xurbi-'yfcMWJi, aA-mjyUiuriUoem лйъ лота, глутатион, НАДФ) {Г. Готтшалк, 1982; С. Н. Голиков с соавт., 1986). Поскольку у клеток Ps. aeruginosa система антиоксидантной защиты, противодействующая развитию свободнорадикаяьного окисления, развита в большей степени, это позволяет ей более активно противодействовать токсическому воздействию продуктов ПОЛ.
Выявленные различия антибактериальной активности липосом по отношению к различным группам бактерий в зависимости от величины рН и уровня продуктов ПОЛ могут позволить конструировать липосомы с заранее заданными свойствами. Благодаря изменению в суспензии липосом этих параметров появляется возможность моноспецифического антибактериального воздействия на определенные группы микроорганизмов.
Таким образом, в результате проведенных исследований было установлено, что гибель бактериальных клеток наступает вследствие токсического воздействия на них продуктов липидной пероксидации.
Наиболее активно этот процесс происходит в кислой среде. Установлены оптимальные параметры липосомальной суспензии, при которых ее воздействие на различные типы бактериальных клеток наиболее выражено: рН 4. 8+-0.12, ЦДЛ 51. 7G+-75. 75 нмоль/мл.
Помимо воздействия на бактерии продуктов деградации липосо-мальных^липидов, липосомально-бактериальные взаимодействия могут осуществляться вследствие сорбции везикул на поверхностных структурах бактериальной клетки (ВЛ1 Карамушка с соавт,,1987; L. I. Barsukov et al. , 1976). Такое взаимодействие может привести к изменению свойств бактериальной клетки, обусловленных активностью этих структур, в том числе оказать влияние на механизм адгезии бактерий к клеткам макроорганизма, активность которого определяется многими специфическими функциями клеточной поверхности {Д. Г. Звягинцев, а С, Гузев ,1971; А. Ф. Перцовская, 1971}. Изучение изменений адгезивной способности бактериальных клеток под действием липосом проводилось нами in vitro на примере адгезии S. aureus и Ps. aeruginosa к монослоям эукариотических клеток линий НЕр-2, HeLa и иммортализованным аетроцитам спинного ганглия. Проведенные исследования впервые показали, что суспензия липосом в ингибитор-ных и субингибиторных концентрациях обладает антиадгезивным действием, что проявляется в снижении уровня сорбции бактерий на поверхности эукариотических клеток на 28.2 - 79.8Z по сравнению с контрольными суспензиями. Полученные данные показали, что антиадгезивное действие липосом носит неспецифический характер как по отношению к бактериальным культурам, так и к различным линиям эукариотических клеток. Вероятно, снижение сорбционной активности бактериальных клеток происходит благодаря создаваемому липосомами механическому барьеру между адгезинами бактериальной и рецепторами эукариотической клеток, так как липосомы могут сорбироваться на
- 103 поверхностных образованиях как про-, так и эукариот (JL Б. Марголис, Л. Д. Бергельсон, 1986; А. С. Allison, P. David, 1975).
Проведенные in vitro исследования позволили предположить, что л*ттглтгптт Ann^nrnwirrj-TrwA mm-vn т^птлттлтз? w ттлпАи л «пттттт тггт/г Аиптж» u^Uiicncj&n. фиицга & лОлс w I fepyinuiDoui. ^шниииж и о саДсах1П£ЭШ1*1 ко -химическими параметрами может быть использована в качестве лекарственного препарата для лечения инфекционных заболеваний, вызванных условно патогенной флорой. Возможность практического использования липосом в качестве антибактериального средства предполагает подтвеждение зарегистрированных in vitro бактерицидного и антиадгезивного аффектов препарата при введении его в организм, поскольку взаимодействие липосом с биологически активными компонентами крови и тканей может значительно изменить их свойства (G. Weismann et all., 1977; Т. М. Allen, 1981) и нивелировать эффект, зарегистрированный в опытах in vitro.
Исследования in vivo были проведены на кроликах с моделью огнестрельной раны мягких тканей бедра. Помимо оценки общей микробной обсемененности тканей раневого канала и выявления качественного состава раневой микрофлоры была проведена топографическая оценка распространенности микроорганизмов в мягких тканях к периферии от раневого канала. Эксперименты на животных подтвердили высокую антибактериальную активность исследуемого препарата. На протяжении всего периода наблюдения (первая и вторая фазы раневого процесса) обсемененность всех исследуемых тканей к периферии от раневого канала у животных, которым в течение 1 часа после нанесения травмы была введена.суспензия липосом, была достоверно ниже, чем у животных контрольной группы. При этом если у животных контрольной группы обсемененность всех исследованных тканей Ьгнест-рельной раны превысила критический уровень уже через 1 сутки после травмы, то у животных опытной группы микробная обсемененность дос
- 104 тигала критического уровня только на 3 сутки после травмы (в период максимального развития воспалительного процесса) и только в тканях, непосредственно прилежащих к раневому каналу. Антибактериальное действие суспензии липосом проявлялось не только в уменьшении уровня обсемененности тканей огнестрельной раны, но и в снижении уровня инвазивности бактерий вглубь тканей. По сравнению с контрольной группой животных, количество бактерий в тканях, расположенных на различном расстоянии от раневого канала, у животных опытной группы было на 48.3-79.3% ниже. Хотя препарат животным вводили однократно, эффективность его действия сохранялась на протяжении всего периода наблюдения. Некоторое увеличение численности бактерий на 9 сутки у животных опытной группы, вероятно, связано с тем, что к этому сроку содержание препарата в тканях значительно снижается, так как период полувыведения липосом из тканевого депо составляет 4 - 6 суток (Т. И. Щраер с соавт., 1988).
Существенные отличия между животными обеих групп отмечены при анализе качественного состава раневой микрофлоры. Исследования показали, что состав микрофлоры ран у животных контрольной группы был более разнообразным, чем у животных опытной. Из ран животных контрольной группы преимущественно высевались ассоциации из 2-3 видов бактерий, в то время как в опытной группе в 30% высевались монокультуры. Кроме того, если общее число выделенных штаммов у контрольных животных достигало 8-8, то у животных опытной группы оно не превышало 2-5. При этом если из ран контрольных животных преимущественно высевались условно патогенные бактерии СS. aureus и представители кишечной группы.), то у опытных животных помимо S. aureus доминировали Micrococcus sp. и грамотрицательные нефер-ментирующие палочки. В процессе наблюдения отмечались изменения состава раневой микрофлоры. Если в начальный период из ран живот
- 105 ных обеих групп преимущественно высевались кожи, то начиная с 6 суток в ранах животных контрольной группы начала превалировать палочковая группа бактерий при доминирующей роли представителей кишечной флоры, Это согласуется с данными, полученными при изучении посттравматической инфекции у людей (А. М, Королюк с соавт. , 1989). У животных опытной группы изменение микробного пейзажа произошло на 3 суток позже (9 сутки) и было менее выражено. Вероятно, это связано с тем, что у этой группы животных процесс очищения раны от раневой микрофлоры осуществлялся более активно, чем у контрольных животных. Вследствие этого более интенсивно происходило заселение ран микрофлорой вивария.
Эксперименты на животных с моделью огнестрельной травмы мягких тканей подтвердили наличие выявленного в экспериментах in vitro антибактериального действия пустых фосфатидилхолин-холестериновых липосом. Использованный препарат после однократного подкожного введения оказывал выраженный антибактериальный эффект, который проявлялся как в снижении численности бактерий, контаминируюшях ткани раны, так и в уменьшении их распространенности к периферии от раневого канала. Полученный эффект может быть обусловлен показанными in vitro бактерицидным и антиадгезивным действием липосом. Кроме того, существенное улучшение клинической картины инфекционного процесса у животных опытной группы могло быть обусловлено сорбцией на липосомальных мембранах целого ряда микробных токсинов (W. В. Van Heyningent1971), а также продуктов эндогенной интоксикации (А. В. Стефанов с соавт., 1984).
Таким образом, проведенные исследования показали, что однократное подкожное введение суспензии фосфатидилхолин-холестериновых липосом с заданными физико-химическими параметрами может быть использовано для профилактики раннего нагноения микробно загрязнен
- 106 яых ран. Для подтверждения эффективности препарата у больных с микробно загрязненными ранами необходимо дальнейшие его клинические изучение, что является задачей нашего дальнейшего исследования. С этой целью данные о специфическом действии препарата и его токсикологические характеристики представлены в Фармакологический комитет и получено разрешение на проведение первой фазы его клинических испытаний.
Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Мельянцева, Лариса Петровна, 1992 год
1. Акатов А. К } Зуева В. С. Стафилококки. М.: Медицина, 1983. -256 С.
2. Александер Дж. , Гуд Р. А. Иммунологиядля хирургов. М.: Медицина, 1974.- 191 С.
3. Афиногенов Г. Е. , Блинов Е П. Антисептики в хирургии. Л.: Шдицина, 1987. - 144 С.
4. Бабаян 3. А. , Лепахин В. К. , Руденко Г. М. и др. Руководящие методические материалы по экспериментальному и клиническому изучению лекарственных средств; -М. ,1986. -С. 53-66.
5. Безбородов А. М. Биохимические основы микробиологического синтеза. М.: Легкая и пищевая пром-ть, 1984. - 304 С.
6. Безрукова А. Г. Спектроскопические методы исследования параметров липосом. // Направленный транспорт и иммобилизация биологически активных препаратов для клинической практики: Науч. конф:, Киев, 20-21 апреля 1984: Тез. докл. Киев, 1984. - С. 4.
7. Липосомальные лекарственные формы полиеновых антибиотиков / И. Б. Белявская, Б. С. Грязнова, Р. М. Петюшенко и др. // Актуальные проблемы химиотерапии бактериальных инфекций: Всее. конф. , 22-24 октября, 1991: Тез. докл. М, 1981. - 4.1. - С. 59.
8. Беляков В. Д., Ряпис Л. А., Илюхин В. И. Псевдомонады и псев-домонадозы. М.: Шдицина, 1990. - 224 С, '
9. Березовская Л. Н. Проблемы создания липоеомальных лекарственных форм антибиотиков. // Актуальные проблемы химиотерапии бактериальных инфекций: Есес. конф., 22-24 октября, 1991: Тез. докл. М, 1991. - 4.1. - С. 63-64.
10. Биргер М. О. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования. М.: Шдицина, 1973. - 456 С»
11. Бородин Е. А., Арчаков А. й. Стабилизация и реактивация ци-тохрома Р-450 фосфатидилхолином при перекисном окислении липидов.//- 109;
12. Биол. мембраны. 1987. - т. 4. - N7. - С. 719-728.
13. Бертиев Ю. В. , Бродинова Н. С. , Мороз А. Ф. Экзотоксин А Pseudomonas aeruginosa и его роль в патогенезе сикегнойной инфекции //Ж. микробиол. 5 эпидемиол. и иммунобиол. 1981. - N 2.- С. 13-19.
14. Вицин Б. А. Раны и их лечение. // Раны и неспецифическая гнойная хирургйчбскй.я инфекция. ~ Новосибирск: Наука, 1S7S. С. 8-17.
15. Владимиров К). А. , Арчаков А. И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. М. , 1972. - 252 С.
16. Владимиров К). А. Роль нарушения липидного слоя мембран в развитии патологичееких процессов. // Пат. физиол. експер. терапия. -1989. N 4. - С. 7-18.
17. Воденников Н. А. Кислотно-щелочное равновесие чистых и гнойных ран при гнойных воспалительных процессах. // Вестн. хир. -1950. Т. 70. - N 4. - С. 28-32.
18. Войно-Ясенецкий М. В. Биология и патология инфекционных процессов/АМН СССР. Л.: Медицина, 1981. - 208 С.
19. Воскресенский 0. Е , Левицкий А. П. Перекиси липидов в живом организме.// Вопр. мед. химии. 1970. - Т. 16. - вып. 6. - С. 563-583.
20. Говалло А. И. , Рычков Ю. Г. Физиологическая генетика .человека в проблеме заживления ран. Рецензия.// Хирургия. 1987.- Н !.-С. 116.
21. Гамалея И. Г. , Стручков Ю. В., Хохлов А. Е Структура микрофлоры гнойных ран и частота вторичного их инфицирования. //Проблемы клинической микробиологии в неинфекционной клинике: Всес. кокф. , Tes, докл. М, 1983. - С. 39-40.- 110
22. Голиков 0. Е , Саноцкий И. В., . Тиунов Л. А. Общие механизмы токсического действия/АМН СССР. Л.: Медицина - 1986. - 280 С.
23. Гончар А. К } Коган А. С. , Салганик Р, И. Раневой процесс и иммобилизованные протеолитические ферменты.- Новосибирск: Наука, 1986. 120 С.
24. Готтшалк Г. Метаболизм бактерий. М.: Мир, 1982. - 310 С.
25. Грачева Е М., Щетинина И. Е Клиническая химиотерапия при инфекционных болезнях. JL: Медицина, 1980. - 248 С.
26. Грегориадие Г., Аллиеон А. Липосомы в биологических системах. М.: Медицина, 1983. - 384 С.
27. Трансмембранный транспорт липидов между лецитиновыми липо-еомами и клетками нейрабластами С 1300 RL8. / ЕМ. Гулая, Г. М.Волков, Е Е Говсива и др. // Укр. биохим. ж. 1987. - Т. 59. - N 4. - С. 64-69.
28. Давыдовский И. В. Процесс заживления ран. Актовая речь 23 ноября 1949 г. - & ,1950. - 12 С.
29. Далин М. В., Фиш Е Г. Адгезины микроорганизмов. Итоги науки и техники. ВИНИТИ, Микробиология. - М,1985. - 110 С,
30. Даценко Б. М., Белов С. Г. , Тамм Т. И. Гнойная рана. Киев: Здоров'я, 1985.- 136 С.
31. Джавец Э. , Мельник Дж. Л. , Эйдельберг Э. А. Руководство по медицинской микробиологии. М.: Медицина, 1982. - Т. 1. - 368 С.
32. Джавец 3., Мельник Дж. JL , Эйдельберг 3. А. Руководство по медицинской микробиологии. М.: Медицина, 1982. - Т. 2. - 384 О.
33. Егоров Е С. Руководство к практическим занятиям по микро- ill биологии. -M.: Ивд-бо Московского университетаj 1983. 222 С.
34. Езепчук Ю. Б. Биомолекулярные основы патогенности. -М.: Наука, 1977. 215 С.
35. Езепчук Ю. В. Патогенность как функция биомолекул. -Е: Медицина, 1985.- 238 С.
36. Евепчук Ю. В. Функциональные критерии патогенности //Ж. микробиол. , эпидемиол. и иммунобиол. 1988. - N 5. - С. 113-116.
37. Блинов Н. Е Химическая микробиология. Е : Высшая школа,1989. 448 С.
38. Звягинцев Д. Г,, Гузев В. С. Концентрирование и разделение бактерий на анионите Дауэкс. //Ж. Микробиология. 1971. - Т. 40. - N 1. -С. 139-143.
39. Исполатовская ML В. , Шапошникова Г. М. Клеточные стенки бактерий// Ж. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1973. - N 8. - С. 103 -108.
40. Кагава Я Биомембраны. М.: Высшая школа, 1975. - 303 С.- 42. Каплан А. В., Махеон Е Е., Мельникова В. М. Гнойная травматология костей и суставов. М.: Медицина, 1985. - 384 С.
41. Взаимодействие гликопротеида клеточной оболочки Bacillus ' pumilis с липоеомами/ Карамушка В, И. , Грузина Т. Г. , Подольская В. И.и др.// Укр. биохим. журн. 1987.- Т. 59. - N 1.- С. 70-75.
42. Биотинмлированные рН-чувствительные липосомы контейнер для направленной доставки биологически активных веществ к клеткам/ А. Л. Кливынов, А. А. Богданов, А, Е Лукьянов и др. //Вестн. АМН СССР.1990. N 8. - С. 50-53.
43. Колкер И.Й. Микрофлора гнойных ран, видовой состав и количественная характеристика. // Актуальные вопросы клинической микробиологии. Новосибирск: Наука, 1986. С. 11-17.
44. Костюкова R Н, Начальный этап инфекционного процесса колонизация и пути ее предотвращения. // Ж. микробиол. , эпидемиол. и иммунобиол. - 1989. - N 9.- С. 103-110.
45. Котик А. , Яначек К. мембранный транспорт. М.: Шр, 1980. -320 С.
46. Краткий определитель бактерий Берги /Под ред. Дж. Хоулта,1. , 1 t---- л £Г\г; лm. : wmp} j. sou, 4эи v.
47. Противовоспалительные эффекты липосом/В. М. Крайнее, В. Ы. Мельникова, Я, М. Шрголин и др. // Веотк, Акад. мед. наук СССР. 1S90.isт <77 п л л лгч1. П — У-', *±*±— *±Г .
48. Коррекция процессов переписного окисления липидов с помощью липосом. / В. М, Крейнес, Ю. Г, Шапошников, й. М. Устьянцева и др. // Экспериментальная травматология и ортопедия. М. , 1990.- С. 7- 10.
49. Кузин М. й., .Шимкевич JL JL Патогенез раневого процесса. // Рана и раневая инфекция. М.: Медицина, .1931.- СЛ 14-160.
50. Кузин М. И. , Костюченок Б. Е Раны и раневая инфекция. -М.: Медицина, 1981. 688 С.54, Кульберг А. Я. Рецепторы клеточных мембран. М.: Высшая школа, 1987. - 103 С.
51. Ланчини Д. , Паренти Ф. Антибиотики . -М.: Мир, 1985. 272 С.
52. Лебедь О. PL , Стефанов А. Б, , Примак ?. Г. Влияние условий ультразвуковой обработки на характеристики формирующихся липосом// Укр. биохим. журнал. 1989,- Т. 61. - N 3, С, 96-101.
53. Лишко В. К Современные подходы к моделированию биологических мембран. //Направленный 'транспорт и иммобилизация биологически активных препаратов для клинической практики. Киев, -1984. -С. 16-17,
54. Лыткин М. И. , Коеачев й. Д. , Пуни Ц. А. Некоторые вопросы гнойной инфекции огнестрельных рак, // Вестн. хир. 1S70. - Т. 105. - N1. А А л tf™\ А /~ч11 . ~ О- 1U.
55. Марголис Л. Б. } Бергельсон Л. Д. Липосомы и их взаимодействие с клетками. М. - 1986. - 240 С.
56. Мельникова Б. М. Химиотерапия раневой инфекции в травматологии и ортопедии. М.: Медицина, 1975, - 224 С.
57. Мельникова Б. М. , Богомолова R С. , ймшенецкая В. Ф. Этиологическая структура гнойно-воспалительных процессов в хирургических клиниках. / Лаб. дело. 1984. - N 7. - С. 438-442.
58. Моров А. Ф., Анциферова Н. Г. , Баскакова R В, и др. Синег-нойная инфекция. -М.: Медицина, 1988. 256 С.
59. Мусил Я. Основы биохимии патологических процессов: пер. с чеш. М.: Медицина, 1S85. - 365 С.
60. Николаев В. Г. , Стрелко В. В. Гемосорбция на активированных углях. Киев.: Каукова думка, 1S79.- .288 С.
61. Перцовекая .4. Ф. Адсорбция (адгезия) микроорганизмов (влияние характера взаимодействующих поверхностей и определение силы адгезии) . Автореф. канд. дйес. М. - 1971.г
62. Першин Г. R Методы экспериментальной химиотерапии. М.: Медицина, 1971,- 539 С.
63. Петровская В. Г. Перспективы получения усовершенствованных- 114 средств профилактики инфекционных заболеваний// Ж. микробиол. , эпи-демиол. и иммунобиол. 1380. - N 5. - С. 51-69,
64. Полинг Г. , Полинг П. Химия. М. г Мир, 1978. - 582 С.
65. Ионов Г. А. , Гончаров II И. Включение рубомицина в многоелой ные липосомы. // Антибиотики. 1980. - N Б. - С. 367-340.
66. Попов А. М, » Лоенко КЗ. К. , Анмсимов М. М. Р'зменение чувствительности опухолевых клеток к действию тритерпеновых глюкозидов ли-шеомами. // Антибиотики. 1981.- N 3.- С. 127-129.
67. Попов И. К Роль цАЩ включенного в липосомы, в стабилизации мембран кардиомиоцитов при патологии сердечной мышцы. / /Дисс. канд. мед. наук. JL - 1S85. - 166 С.
68. Пращенков К. й. , Сахаров П. П. , Гудков S. И. Значение клини-кобактериологических и клинике-иммунологических параллелей в учении0 раневой инфекции. // Журн. микробиол. , эпидемиол. и иммунобиол. -1945.- Т. 7-3.-С. 4.
69. Бяткин К Д., Кривошеин Ю. С. Микробиология. М.:. Медицина,1 г-О" ем пlbои. Difi
70. Речменский С. С. К характеристике флоры ран. // Журн. микробиол. , эпидемиол. и иммунобиол. 1944. - Т. 9. - С. 70.
71. Ротов К А., Васильев В. П. , Антонов КЗ. В. Получение и характеристика липосом, содержащих антибиотики// Микробиол. журнал.ibos, ~ rt О. 1. - oi. - о.
72. Самеонова Т. М. Экологические и .биологические параллели при изучении стафилококков. // Инфекции, вызываемые условно-патогенными микроорганизмами стафилококками и еинегнойной палочкой. -!vL , 1982. -С. 23-32.
73. Соринеон С.Е, Мирзаев КМ. Комплексная фармакотерапия при инфекционных заболеваниях. Ташкент: Медицина, 1987. - 365 С.
74. Стейнмер Р. , 3дельберг 3. , Ингрэм Дж. Мир микробов. М.: Мир, 1979. Т. 1. - 320 С.л
75. Стейниер Р. , Здельберг 3. , Ингрем Дж, Мир микробов. М.:a m о r^r^ fi г*,mni-ij J.Tift), ~ I „ iG. ~ V/.
76. Стефанов А. В. Использование липосом в медицине. //Мол. биоя. 1980,- Вып. 27. - С. 32-34.
77. Об особенностях действия норадреналина, заключенного в липосомы, ка системное артериальное давление. / Стефанов, А. В. , Гуревич
78. И. , Дмитриева A. R и др.// Фйбиол. журн. 1S80. - Т. XXVI. - Ы 1.- С.1 г т,т,
79. Страйер Л. Биохимия. М.: Мир. 1984.- Т. 1.- 232 С.
80. Страйер Л, Биохимия. М.: Мир, 1S85. - Т. 2. - 312 С.
81. Стручков В. Н. s Григорян В. К. , ГостищвБ В. К. Гнойная рака.- 116
82. Si. Ча&оь E. й. , Смирной В. Н. Стенка сосудов б атеро- и тромбо-генезе, М. , 1983, - С, 195-204.
83. Шапошников Ю, Г, , Решетников 5. А.' Профилактика и лечение инфицированных ран на этапах медицинской эвакуации. // Воен. -мед. зкурн. 1976. - С. 33-37.
84. Шапошников КЗ. Г. , Решетников Е. А. , Кондратьева И, Е. Профилактика и лечение гнойной инфекции ран. //Воен. -мед. «урн. 1978, -N 1. - С. 19-24.
85. Шапошников Ю. Г., Рудаков Б, Я. Оценка течения репаративных процессов в ранах, //Хирургия. 1984,- N4.- С. 11-13.
86. Особенности патогенеза и лечения огнестрельных ран. / Ю. Г. Шапошников, Б. Я. Рудаков, Г, Н. Берченко и др. //Раны и раневая инфекция: 2 Веееоюз. конф. *, Тез. докл. ML , 1986, - С. 20-21,
87. Применение взвеси липосом при экспериментальном локальном гнойном процессе/ Т. И, ffipaep,- В, М. Крейнее, Н. А. Голубчикова и др. // Хирургия, 1988,- N 4,- С, 30-34.57, Шувалова Е, П. Инфекционные болезни: Учебник. М.: Медицина, 1SS0, - 560 С.
88. Allen 7. ivl A study о Г phospholipid interact ions between high density lipoproteins and small unilamellar vesicles. //Bioohim. et biophys. acta. 1981,- V, 640, - P. 385-397.
89. Allen Т. U., Cleland L. C. Serum-induced leakage of liposome oontens. //Biochim, et biophis. aota. 1S31. - V. 557,- P. 418 -425,
90. Allison A. C. , David P. Increaset biochemical and biological activites of mononuclear phagocites ezposed to variousstimul, with special reference to secretion of 1isosomal ensymes. /
91. Mononucl. Fhagocit. Immun. Infect, and Patol. Oxford, 1975.- P. 487504.
92. Barton P. G. , Gunstone P. D. Hydrocarbon chain packing and molecular motion in phospholipid bilayers formed from unsaturated lecithins. //J. Biol. Chetru 1975.- V. 250. - P. 4470-4476.
93. Batzri S., Korn E. D. Interaction of phoshpolipid vesicles with cells: Endooytosis and fusion, as alternate mechanism for the uptake of lipid-soluble and water-soluble molecules. //J. Cell Biol. 1975. - V. 66. - P. 621-634.
94. Bayer E. A. ,Rivnay В., Skuteisky E. In .the mode of liposornecell interaction: biotin-conjugated lipids as ultr-astructural 'probes. //Biochim. et Biophiys. Acta.-1979. V. 550. -P. 464-473.
95. Beachey E. //J. infect. Dis. -1981.-Vol. 143. -R 325 -345.
96. Behffl K. , Falk K., Skogh T. , Lewis D. The Effect, of Trauma to the leg on the first-pass uptace of bacteria by the lung- //J, r. 4 nnfl т Г or* *ТЛ с*. . v- г- 1 ТП ГУ* Г* СЛА n>i i Ucufra. isoo. V. <c,o. ~ rtx, — ouppi. - r. bif-bj.».
97. Berlin R. H. , Brandberg A. Tissue changes and bacteriological finding 1,6 and 12 hours after shot iniuries. //Revue International des seruices de sante des armies de Terre, de-. И9 108.- N. 1. P. 175-184.
98. De Gier J. , Mandersloot J. G. , Van Deenen L. L. Lipid composition and permeability of liposomes, //Biochem. Biophis. Acta. -1968. V. 150. - N 4. - P. 565-675. '
99. Demel R. A. , Kinsky'S. C. , Kinsky S. B., van Deenen L, L. Effect of temperature and cholesterol on the glucose permeability of liposomes prepared with natural and sinthetic lecithins. //Biochem, Biophys. Acta, 1968. - V. 150. - N 4. - P. 329-336.
100. Desnoffes J.-F. Antibiotiques et adhesion bacterienne. // Rev. fr. lab, 1983, - V. 13. - N 196. - C. 77-82.
101. Gregoriadis G. , Ryman В. E. Lysosomal localisation of b- f r uo tofuranos i da-ге containing Iipisomes injected into rat-implications in the treatment of genetic disorders. // Biochem. J.-1972. V. 129. - F. 123-133,
102. Gregoriadis G. Drug entrappment in liposomes.// FEBS Lett. -1973. -V. 36. -N. 3, -P. 292-296.
103. Hoekstra D. , Soherphof G. Effect of fetal calf serum and serum protein fractions on the uptake of liposomal phosphatidylcholine by rat hepatocytes.//Biochim. Biophys. Acta.-1979,- V. 551.- P. 109-121.
104. Hoekstra D., Yaron A, , Carmel A., Scherphof G. Fusion of phospholipid vesicles containing a trypsin-sensitive fluorogenio substrate and trypsin,// FEBS Lett. 1979.- V. 106. - P. 176-180.
105. Huang L. , Ozato K. , Pagano R. E, Interaction of phospholipid vesicles with murine lymphocytes. 1. Vesicles-cell adsorbtion and fusion as alternative pathway of uptake. // Membr. Biochem. 1978.- V.I.- P. 1-25.
106. Inbar E, Shinitzky M. Increase of cholesterol level in the surface nv&iribrart* of lymphoma cells and its inhibitory effect onascites tumor '-development.//Proc. Nat. Aoad. Soi. US. 1974.- V. 71.1. P. 2188-Si 30.
107. Krizek T. , Robson Evaluation of quantitative bacteriology in woundmariageirient.//Am J. Surg. 1975.- V. 130. - P. 579584.
108. The interaction of oationiо liposomes containing enterapped horse radish peroxidase with cells in culture. / V. E. Ivfegee, C. W. Goff, J. Sohokneoht et al. // J. Cell Biol. 1974. -Vol. 63. - P. 492-504.
109. O. Maki D. G. Nosocomial bacteremia.- Am. J. Med.-1981.-V. 70.-N 3.- P. 719 -732.
110. Martin F. J. , Mo Donald R. S, Phospholipid exchange between bilayer membrane vesicles.//Biochemistry.-1975. V. 15. - P. 321-327.
111. Mauricio T, et al. Comparision of water exposed ares of cholera toxin when free in solution and bound to 1 i posomes containing the ganglioside AM. //Bioohem. Biophys. Res. Commun. 1885. -V, 136. - N. 2. - P. 835-846.
112. Naouoohio M. C. , Gat to B. R J. , Sordelli D. 0. , D'Aguino M. Enhanced liposome-mediated antibacterial activity of piperacillin and gentamioin against, gram-negative bacilli in vitro //J. Microcapsul. -1988. -5, N4.- P. 303-309. /
113. Nesmejanova M. A. , Bogdanov ivL V. Participation of aoid phospholipids in protein translocation across the bacterial cytoplasmic membrane. //FEBS Lett. -1989. -257. N 2. - P. 203-207.
114. Modulation of phytohemagglutinin-mediated lymphocyte stimulation by egg lecithin. / M. H. Ng, W. S. Ng, W. К. К. Ho et al.// Exp. Cell. Res. 1978. - V. 116. - P. 387 -395.
115. Bacterial adhesens in patogenecity /S. Normark* S. Hultren, В. -1. Marklund// Perspeot. Antiinfec. Therapy: Bayer AG Oenten.
116. Symp. , Washington, D. C. , Aug. 31 Sept. 3, 1983.- Braunschweig, «iesbaden, 1989. - P. 89-34.
117. Pagano R. E., Huang L. , Weg S. Interaction of phospholipid vesicles with cultured mammal ian" cells. // Nature. 1374. -V. 252- P. 165-167.
118. Pagano R E. , Huang L. Interaction of phospholipid vesicles with oultured mammalian cells. II. Studies of mechanism. / / J. Cell. Biol. -1975. V. 67. - P. 49-GO.
119. Pagano R. E. , Takeichi M. Adhesion of phospholipid vesicles to Chinese hamster fibroblasts. The role of cell surface proteins. //J. Cell. Biol. -1977. -V. 74. -N. 2, P. 531-546.
120. Papahajopoulos D. , Vatrins J. C. Phospholipid model membranes. II. Permeability properties of hydrated liquid crystals. //Biochem. Biophys. Acta. 1967.-V. 135. - N 4. - P. 639-652.
121. Papahajopoulos D. , Post* G., Mayhew E. Cellular uptake of cyclic AMP captured within phospholipid vesicles and effect on cell growth behaviour. // Biochem. Biophys. Acta. 1974.- V. 353. - N 3.
122. РЛП /) л* о . *±\-P± li'J.
123. Quite Paul G. , Belan Kiran K. Coagulase-Negative Staphylococcal Adhesence and Persistence/The J. of Infections diseases, Vol. 156. N4.- October 1987.- P. 543-547.
124. Razin S. Reconstitute on of biological membranes. // Biochem. Biophys. Acta. 1972.- V. 265. - N2.- P. 241-2S6.
125. Sohi ffer 1 i D. IvL , Beaohey E. H. Васter i al adhes i on: Modulation by antibiotics which perturb protein synthesis. //Antimiorob. Agents arid Chemother. 1388.- V. 32. - N 11.- P. 1603-1608.
126. Stendahl 0., Magnusson К. -E. //J. Path. 1982. - Vol. 138.1. P. 62.
127. Szoka F. , jaoobson K., Derako. Z.,. Fapahadjopoulos D. Fluorescence studies on the mechanism of liposome-cell interaction in vitro.//Biochem. Biophys. Acta 1980.- V. 600. - P. 1T18.
128. Tian H. M , Huang M.L., Liu Y. Q. et al, Primary bacterial cont&mination of wound track. //Acta Chir. Scand. 1982.-Suppl. 503. - P.265-26S.
129. Quantitative bacteriological study of the wound track./
130. H. Tian, G. Deng, M Huang et al.// J. Trauma. 1SSS. - V. 28. - N.1. -Suppl. P. 215-219.
131. Tikka S. The contamination of missile wounds with special reference to early antimicrobial therapy.//Acta Chir. Scand.-1982. -Suppl. 508. P. 281-287.
132. Tomiinson S. j Taylor P. W. , Luzio J. P. Transfer of phospholipid and protein into the envelope of gramnegativ bacteria by liposome fusion. //Biochemistry. 1S3S. - 23. - N 21.- P. 8303-8311.
133. Van Heuningen : W. В. , Carpenter С. C. , Picree B. F. , Greenough W. B. Desacti vat ion of cholera toxin by ganglioside.//- 123
134. J. Infect. Dis. -1971. V. 184. - P. 415-419.
135. Watt P. L. , Ward M. E. Bacterial Adhesence/Ed E. H. Beachey. -New York, 1980. P, 253-288,
136. Liposomecell interaction: transfer and intracellular release of a trapped fluorescent marker. / J. N. Weinstein, P. Henkart, S. Yoshicami et al. // Science.- 1977,- V, 195. N 4277,- P. 489-492.
137. Weissmann G. , Cohen C. , Hoffstein S. Introduction of enzymes by means of liposomes into non-phagocytic human cell in v i tro. //B i ocem. В i ophys. Acta. -1977. V. 498. - P. 375-385,
138. Zheng Т., Driessen A, J, M. , Konings V.N. Effect of cholesterol on the 'branched -chain amino acid transport system of Streptococcas oremotis //J. Baoteriol.-1988.-170, N 7.-P. 3194-3198.